先进的农药残留快速检测技术——生物荧光法

1.农药残留概况。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药母体、衍生物、代谢物、降解物和杂质的总称,按其化学结构大致可分为有机氯类、有机磷类、氨基甲酸酯类和拟除虫菊酯类等。其中,有机磷类农药在我国的使用最为广泛,约占总使用量的70%,其中又有70%为剧毒、高毒类药物,故大部分被禁止用于果蔬作物。此外,氨基甲酸酯类农药是我国当前广泛使用的农药之一,且随着有机氯农药相继被禁用或限制使用,氨基甲酸酯类农药的使用量逐年增加。

生物荧光酶抑制法快速定性测定粮食中有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留

建立了生物荧光酶抑制法测定粮食及其制品中的有机磷类及氨基甲酸酯类的农药残留快速定性检测方法。样品通过乙酸乙酯∶丙酮(体积比为95∶5)提取离心净化,取50μL上清液45℃氮气吹干,1 mL蒸馏水或去离子水复溶进行检测。结果表明,本方法测定粮食及其制品中的有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留时,最低检测限为0.1μg/kg,提取液与酶溶液的最佳反应时间是10 min,提取液与酶溶液的最佳反应温度为35℃。通过确立不同农药的限量抑制率,可以提高判定的准确度。本方法同时处理7个样品需要20 min,检测时间为15 min,平均每个样品5 min即可出结果,可用于粮食及其制品中有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留的快速筛选。

TaqMan-MGB探针荧光定量聚合酶链式反应法检测酸奶制品中动物双歧杆菌BB-12

目的建立一种TaqMan-小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针荧光定量聚合酶链式反应法检测酸奶制品中动物双歧杆菌BB-12的分析方法。方法设计动物双歧杆菌BB-12的16SrRNA序列的MGB探针,利用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术,构建目标序列的过表达载体,提取质粒进行标准曲线的绘制,最后进行市售酸奶样品检测,定量酸奶中BB-12菌株的数量。结果所有载体标准品均产生显著的荧光增幅,循环阈值(cycle threshold, Ct)介于16~20之间;而以其他酸奶制品添加菌及大肠杆菌样品DNA为模板则无荧光扩增信号。在检测灵敏度方面,BB-12载体可被稳定检出的质量浓度低至0.0000584 ng/μL, Ct值平均数为28.73,即检测灵敏度低至为0.05 pg。绘制的标准曲线线性良好,扩增效率E为0.39,判定系数R^(2)=0.9999。市售酸奶样品检测特异性好、灵敏度高、定量结果准确。结论本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测法可实现在酸奶中对BB-12菌种的检测及定量。