NF2/Merlin在原发性肝癌中的表达及临床意义研究

目的研究NF2/Merlin在原发性肝癌中的表达及临床意义。方法免疫组织化学法测定94例肝细胞癌(HCC)和37例肝内胆管细胞癌(ICC)的Merlin表达,并对癌组织中的表达与其临床病理的关系进行分析。结果Merlin蛋白在癌组织中的表达高于癌旁组织。HCC中Merlin蛋白高表达率为20.2%,ICC中Merlin蛋白高表达率为45.9%。在HCC中,Merlin蛋白的表达高低与肿瘤的分期、HBV感染和肿瘤细胞的分化程度均无关,但在ICC中Merlin蛋白的表达高低与肿瘤细胞的分化程度相关。结论 NF2基因的表达可能与原发性肝癌的发生相关。

POFUT1影响食管鳞癌细胞生物学行为及其机制的初步研究

目的探讨蛋白O-岩藻糖基转移酶1(POFUT1)对食管鳞癌细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其潜在机制。方法利用siRNA转染人食管鳞癌细胞KYSE30和EC109细胞株,按转染情况分为POFUT1敲低组(转染POFUT1 siRNA)和阴性对照组(转染NC siRNA)。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法验证敲低效果。通过CCK-8法、Transwell实验检测不同的POFUT1表达对细胞增殖、迁移能力的影响;采用流式细胞术检测敲低POFUT1后食管鳞癌细胞周期和凋亡的变化。通过转录组测序分析POFUT1敲低组与阴性对照组KYSE30细胞中的差异表达基因,利用KEGG数据库分析潜在的信号通路。结果与阴性对照组相比,POFUT1敲低组细胞增殖能力及迁移细胞数均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组相比,POFUT1敲低组凋亡细胞比例增加,同时,细胞周期G2/M期细胞比例增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。转录组测序分析及qRT-PCR结果显示,敲低POFUT1后,多条癌症相关信号通路分子表达发生改变,其中鞘脂信号通路相关基因S1PR5与MAPK8,以及NOTCH信号通路相关基因NOTCH1、NOTCH2、DLL1表达均降低。结论POFUT1体外敲低导致食管鳞癌细胞增殖和迁移减少、细胞周期阻滞以及凋亡水平升高,POFUT1可能通过鞘脂信号通路、NOTCH信号通路等影响食管鳞癌细胞生物学行为。

北京友谊医院实验动物福利伦理审查中常见问题探讨

首都医科大学附属北京友谊医院实验动物中心为医院旧楼改造设施,自2012年6月开始运行至今。10年期间,北京友谊医院实验动物管理与使用委员会共计审查了514份实验动物使用申请。笔者就北京友谊医院近10年参与的实验动物使用申请评审会项目福利伦理审查中发现的常见问题分析并总结,供同行及相关科研人员参考。

增生的小胆管样上皮细胞与肝硬化──超微结构研究

用电镜观察慢性肝炎、肝硬化及胆道梗阻患者肝组织活检标本，发现肝小叶周围、纤维隔、肝硬化小结节边缘部常见增生的小胆管、小胆管样上皮细胞及呈胆管样排列的小肝细胞和肝细胞。这些细胞周围总是伴随基底膜增厚、胶原纤维增多，甚至完全纤维化。探讨增生的小胆管样上皮细胞与肝细胞小结节生成和胶原纤维增生的关系，增生的小胆管样上皮细胞可能分化演变成小肝细胞和肝细胞，并直接参与胶原纤维合成和／或分泌α１抗胰蛋白酶抑制胶原降解。

实验梗阻性胆汁郁积早期肝脏细胞反应的超微结构研究

大鼠胆总管结扎术后１至１４天，其肝组织在光学显微镜和透射电镜下观察，发现肝细胞散在性萎缩、变性直至坏死；周围可见肝细胞分裂相，小胆管样上皮细胞在汇管区周围增生并向小叶内发展。本文探讨了胆道梗阻导致肝细胞损伤、坏死的机理，小胆管样上皮细胞增生与肝细胞损伤、坏死的关系及其在肝硬化发生中的作用。

肝微循环障碍在病毒所致肝损伤中作用的研究

本研究旨在探讨肝微循环障碍在病毒所致肝损伤发生中的作用。实验Ⅰ,麻疹活疫苗同时注入家兔门静脉及耳缘静脉,24小时快速放血处死,立即取肝固定送病理检查。光镜下可见小血管扩张瘀滞,红细胞粘集贴壁、纤维蛋白血小板构成之微血栓形成等严重微循环障碍的改变。同时可见肝细胞变性、小灶状坏死及GPT(血清谷丙转氨酶)等也明显升高。如先给予山莨菪碱,GPT等升高受到明显抑制。实验Ⅱ,麻疹活疫苗仅单独注入门静脉,24小时GPT并不升高,仅门脉血管对静注去甲肾上腺素的收缩反应性上升。实验Ⅲ,麻疹活疫苗仅注入耳缘静脉,24小时GPT也不升高,但血小板粘附功能增强。结果提示:(1)在病毒感染中肝血管收缩反应性上升及血小板粘附功能增强是肝微循环障碍发生的基础。(2)肝微循环障碍是病毒所致肝损伤的机理之一。(3)山茛菪碱是防治病毒性肝损伤的有效药物。

大剂量维生素C在危重病中的应用及其研究进展

大剂量维生素Ｃ在危重病中的应用及其研究进展北京友谊医院，北京市临床医学研究所任世光自从应用大剂量维生素Ｃ静脉注射救治危重型克山病获得明显疗效以来，对其有效的机理及在其他危重病中应用是否也有价值进行了广泛的研究。目前越来越多的临床及实验资料证实，大剂量...

雌激素通过NF-κB信号通路影响肝癌细胞的肿瘤学行为研究

目的探讨雌激素对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖及迁移能力的抑制和诱导凋亡的作用及其相应机制。方法利用MTS试验检测不同浓度的雌激素在不同时间点对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖能力的影响。Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度的雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞凋亡的情况。Transwell迁移实验检测雌激素对HepG2和BEL7402细胞迁移能力的影响。采用Western blotting法检测不同浓度下雌激素对肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性及其下游相关基因c-Myc、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达的影响。结果 MTS试验结果显示,在不同时间点雌激素有效抑制了HepG2和BEL7402细胞的增殖,并随着雌激素浓度的升高其抑制肝癌细胞增殖的效果逐渐增强,与此同时,雌激素也降低了c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因的表达。Annexin V/PI流式细胞术数据显示雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞的凋亡并呈明显剂量依赖性,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达出现下降。Transwell迁移实验证明雌激素明显抑制了HepG2和BEL7402细胞的迁移能力并且降低了MMP-9和VEGF的表达。验证了雌激素可有效抑制HepG2和BEL7402肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性。结论雌激素通过下调NF-κB信号通路的活性及下游相关分子的表达,而抑制肝癌细胞的增殖与迁移并诱导其凋亡。

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体超微结构的研究

从实验感染的长爪沙鼠小肠内分离贾第虫滋养体,用SEM和TEM做超微结构观察。SEM见虫体呈纵切为半的梨形。前端钝圆,后端尖细。背部隆起,凹凸不平。体前腹面凹陷形成吸盘,边缘为嵴部。虫体周缘有周翼。本虫共有前、腹、后侧和尾鞭毛各一对,直径为200 nm左右;TEM是吸盘为一不对称的圆盘,由呈顺时针旋转之微管组成,并在嵴部重叠形成上、下叶。吸盘背侧有两个左右对称的细胞核,核间可见轴索。胞质内见许多空泡、纤维物质和中体。

抗磷脂综合征研究进展

抗磷脂体（APA）是直接沟通免疫和凝血两大生理系统的桥梁之一，是迄今所知直接诱发血液高凝状态的唯一自身抗体。它可导致体内未明原因的动静脉血栓形成、习惯性流产、血小板减少症、溶血性贫血等症状，临床上把与之相关的一组临床症状称为抗磷脂综合征（APS）。APA可通过干扰磷脂依赖性凝血过程，抑制抗凝血蛋白C和阻糖蛋白1的抗凝血活性，抑制内皮细胞释放前列环素等机制促进血液高凝状态的产生。木文将重点介绍最近关于MA生物学作用的研究进展。

临床生物样本的过程质量监控

样本质量已成为衡量样本库价值的主要指标。如何对生物样本进行质量控制是生物样本库建设的关键性难题。文章重点探讨医疗机构生物样本库如何通过制定和优化工作流程的管理措施来实现样本库的过程质量监控。获取样本产生过程中的关键信息,对事后样本评估是十分重要的。

实验胆汁性肝硬化形成机制的病理研究

结扎Ｗｉｓｔａｒ大鼠胆总管制备胆汁性肝硬化模型。取结扎术后１～８６ｄ不同时间的肝脏，用光学显微镜和电镜观察肝硬化形成过程的病理和超微病理变化。探讨了肝硬化胶原纤维增生和结节形成的机制：胆总管结扎后胆汁郁积造成肝细胞损伤、坏死、激发小胆管样上皮细胞增殖并分化演变，大多数变成小胆管，少数变成小结节状肝细胞。小胆管样上皮细胞和小胆管上皮细胞具有合成胶原纤维的能力。增殖的小胆管、纤维母细胞、毛细血管等和伴随其增生的胶原纤维一起形成结缔组织，隔包围、分割、改建原来的肝小叶而形成假小叶，终于导致肝硬化形成。

制作简易实验动物雾化箱建立小鼠哮喘模型研究

目的应用简单易操作的方法将家用型医疗雾化吸入装置改造为实验动物雾化箱,为实验动物呼吸道疾病的研究提供便利。方法利用家用型雾化器和动物实验室常见的独立通气鼠笼组合改造为实验动物雾化箱。应用自制实验动物雾化箱和鸡卵清白蛋白建立小鼠过敏性哮喘模型。结果实验动物雾化箱能同时为1~20只小鼠实验快速稳定地产出雾化吸入气体,利用该雾化箱成功建立起小鼠过敏性哮喘模型。结论我们利用该实验动物雾化箱建立小鼠过敏性哮喘模型并观察到明显的肺组织炎症表现。该方法为简便和低成本地进行实验动物雾化实验提供具有操作性的指导。

载脂蛋白CIII在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究进展

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）在发达国家和我国富裕地区已经超过病毒性肝炎成为慢性肝病的首要病因,严重影响人们的健康及生活。NAFLD由环境因素和遗传因素共同决定,其发生发展常伴随高甘油三脂血症（HTG）。载脂蛋白CIII（ApoCIII）在脂质代谢中起重要作用,它可通过多种途径增加血浆甘油三酯（TG）水平,引起HTG。

OX40调控双阴性T细胞的转化及抑制功能研究

目的探讨免疫共刺激分子OX40对双阴性T细胞(DN T细胞)转化、抑制功能的影响及可能的作用机制。方法通过中和抗体及基因敲除的方式将OX40作用阻断,检测在这一过程中DN T细胞的转化效率、抑制功能的变化及OX40对DN T细胞存活的影响。结果通过DN T细胞的转化实验发现,将OX40阻断,DN T细胞的转化效率分别从20.2%、29.1%降为10.5%、15.9%。同时与CD4 T细胞相比,OX40在DN T细胞中高表达,其阳性率为27.0%。通过DN T细胞的体外抑制实验发现,OX40敲除后的DN T对CD4 T细胞的抑制作用明显减弱。通过Annexin V染色发现,OX40敲除后DN T细胞的凋亡率分别从14.6%、22.3%增加为21.1%、35.1%,同时OX40敲除使DN T细胞抗凋亡基因表达降低。结论 OX40敲除能降低DN T细胞的转化效率,减弱其对CD4 T细胞抑制功能,这有可能与OX40敲除所致DN T细胞凋亡增加有关。

OX40基因对卵清白蛋白诱导的小鼠哮喘模型的影响机制研究

目的研究OX40基因对卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型中的影响及其机制。方法选取6~8周龄雄性C57/BL6小鼠20只,应用腹腔注射OVA致敏和雾化吸入OVA的方式诱导野生型和OX40基因敲除小鼠产生过敏性哮喘。通过苏木精-伊红染色、迪夫快速染色、肺气道呼吸阻力测试等方法验证哮喘疾病严重程度。通过流式细胞术检测肺泡灌洗液和肺实质中嗜酸性粒细胞、CD4 T细胞、滤泡辅助T(Tfh)细胞和CD11b^+CD8^-树突状细胞亚群比率。结果OX40基因敲除明显减轻了OVA诱导的小鼠过敏性哮喘的疾病症状和嗜酸性粒细胞在肺部的浸润。与野生型哮喘小鼠相比,OX40基因敲除的哮喘小鼠肺脏中CD4 T细胞和Tfh细胞亚群比率明显降低,CD11b^+CD8^-树突状细胞比率也明显降低。结论OX40基因促进了OVA诱导的小鼠哮喘疾病进程,并显著增高了Tfh细胞和CD11b^+CD8^-树突状细胞比率。

人红细胞钠泵及大黄对其影响的研究

用(30)~Rb摄入法研究了人红细胞钠泵的阳离子转运活性。在实验的最适条件下,测定了正常人70例红细胞钠泵活性,其值为0.449±0.059mmol/(L·h)(X±SD)。在此基础上观察了大黄液在体外对人红细胞钠泵活性的抑制作用。讨论了大黄降温机理与大黄抑制钠泵的关系。研究提示了钠泵活性异常在细胞产热的病理生理学上的可能作用。