鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗安全性试验和效力检验初报

利用PageA、B、C型副鸡禽杆菌,研制鸡传染性鼻炎(IC)三价灭活疫苗。用6批IC疫苗进行了大剂量单次接种和单剂量多次接种的安全性试验,结果表明,IC三价灭活疫苗安全无副作用;用3批疫苗进行SPF鸡和普通鸡的免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后约9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%;用4℃～8℃保存一年的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%。

鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联灭活疫苗的研究

利用Page A型、B型、C型副鸡禽杆菌和新城疫病毒La Sota株,研制鸡传染性鼻炎（三价）和新城疫二联油乳剂灭活疫苗。用3个批次疫苗进行单剂量（0.5mL/次）3次接种和大剂量（2.0mL）单次接种的安全性试验、SPF鸡的免疫效力试验、商品鸡的免疫持续期试验和疫苗的保存期试验。结果表明,3批疫苗对试验鸡安全无副作用;免疫接种SPF鸡只30d后对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%,用20μL/只疫苗免疫接种SPF鸡21d后新城疫的平均HI抗体〉24;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,对新城疫病毒强毒100%保护;用4℃-8℃保存12个月和15个月的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,用20μL/只疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21d新城疫病毒的平均HI抗体〉2^4,对新城疫病毒强毒的攻毒保护率〉70%。说明研制的疫苗安全有效。

猪繁殖与呼吸综合征病毒7个分离株全基因序列测定及遗传进化分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2006年～2009年在我国部分地区分离鉴定的7株PRRSV分别进行9段基因片段扩增,测序分析表明,获得的病毒全基因序列与PRRSV JXA1变异株高度同源。并与GenBank中登录的其他70株PRRSV全基因序列进行遗传分析,根据构建的遗传进化树分析表明,中国大陆PRRSV分离株包含美洲型和欧洲型,美洲型可分为3个亚群,亚群1主要为以JXA1株为代表的病毒株,本研究中的7个分离株均为亚群1,其GP5主要中和抗原表位高度变异;亚群2主要为以CH-1a株为代表的病毒株;亚群3主要为以VR-2332株为代表的病毒株。欧洲型病毒株BJEU06-1、NMEU09-1分属于不同亚型。本实验为深入研究该病毒的遗传与变异及其分子流行病学研究奠定基础。

双重RT-PCR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒

为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIVM基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法。检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345bp)和PRRSV(520bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV2种病毒混合液的最小检出量分别为102EID50/0.1mL和103TCID50/0.1mL。应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒。证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测。

近红外光谱法快速检测兽用冻干疫苗中的水分含量

利用积分球漫反射近红外光谱法检测了7种动物用冻干疫苗中的水分含量。采用PLS算法,全交互验证建立定量校正模型,SECV为0.0293,SEP为0.0493,R2为0.9936。对27个样本的预测偏差范围为-0.47～0.63,相对标准偏差为0.19%～2.24%,F检验表明近红外光谱法检测动物疫苗中水分含量与卡尔费休法无明显差异,为近红外方法在动物疫苗水分含量无损检测的应用提供了依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ株、GD株全基因组序列测定与分析

利用RT-PCR方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北京分离株(BJ株)、广东分离株(GD株)各9条基因片段,并将这9个片段分别克隆于PGEM-T-easy质粒载体上进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSVBJ株和GD株的全基因组cDNA(GenBank:EU825723,EU825724)。测序结果表明,BJ株和GD株基因组全长分别为15340和15336bp,各包含9个开放式阅读框,5′UTR都含有189nt,3′端URT分别含有170nt、166nt,其中各包含20ntPoly(A)、16ntPoly(A)。基因组序列分析结果显示,BJ株和GD株与ATCCVR-2332的核苷酸同源性分别为88.9%和89.0%,与高致病性PRRSV毒株JXA1的核苷酸同源性分别为99.0%和99.4%,与PRRSV毒株HuN的核苷酸同源性分别为98.8%和98.9%。

机器与人工鸡胚接种和收获对比试验

采用意大利TKA公司生产的台式半自动鸡胚接种收获一体机进行了鸡胚接种和收获试验,制备NDV La Sota株及IBV M41株病毒液,共进行了4次机器鸡胚接种和收获试验,同时使用同批鸡胚用人工方式接种和收获作为对照,比较机器与人工接种和收获的速度、鸡胚病毒液的收获量、清亮度及毒价等。结果显示,该设备每小时可接种鸡胚8000-9000枚,收获鸡胚4500枚,机器接种和收获的病毒液的产量、清亮度及毒价等,与人工接种和收获基本相同。试验证明,采用机器接种和收获和人工相比具有较大的优势,极大地提高了生产效率。

PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。

犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白和核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。

高低效价伪狂犬病疫苗免疫效果的比较

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种危害养猪业的重要疫病,PRV-gE基因缺失疫苗接种是其有效预防措施,疫苗免疫虽能阻止临床发病,但难以完全阻止野毒感染。2010年以来,猪的伪狂犬病在国内出现了明显反弹,部分猪场的PRV野毒感染率明显上升,疫苗效价不足可能是其重要原因之一。现有多种猪伪狂犬病商品疫苗,不同商品疫苗标识的每头份剂量之间存在明显差异。

2株Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

为了解山东省禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)毒株的基因遗传演化情况及致病性,本试验对山东省两家疑似暴发鸡包涵体肝炎和心包积液综合征鸡场采集的病料(肝脏、脾脏)进行PCR鉴定,并将鉴定为FAdV的2份阳性病料提取病毒液,接种鸡肝癌细胞(LMH)进行毒株传代培养和细胞病变(CPE)观察、PCR检测、TCID50测定、鸡胚致病性试验、SPF鸡回归试验、病毒hexon部分基因扩增及序列分析。结果显示,试验成功分离到2株FAdV,2株分离株细胞传第1代即可观察到CPE,PCR均可扩增出大小为500bp的片段,且2株分离株细胞F5代TCID50分别为10-7.75/0.1mL和10-7.60/0.1mL,均对7日龄SPF鸡胚有强致病性;第1分离株和第2分离株对21日龄SPF鸡攻毒死亡率分别为80%和15%。hexon基因核苷酸同源性分析结果显示,第1分离株与FAdV-4株同源性最高(99.57%),第2分离株与FAdV-8b株同源性最高(99.18%)。这2株FAdV分离株均与Ⅰ群禽腺病毒同源,与火鸡出血性肠炎病毒(HEV)所在的血清Ⅱ群及减蛋综合征病毒(EDSV)所在的血清Ⅲ群禽腺病毒位于不同分支。第1分离株基因型为C型,血清型为4型,命名为FAdV-SDC4株;第2分离株基因型为E型,血清型为8b型,命名为FAdV-SDE8b株。综上所述,FAdV-SDC4和FAdV-SDE8b株属于近几年国内流行毒株。本研究结果可为鸡包涵体肝炎、心包积液综合征的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。

新城疫病毒La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒M41株低免疫鸡胚同胚培养研究

为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0~1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。

鸡传染性支气管炎病毒的变异与分型

基于S1蛋白基因序列,对国内外主要的传染性支气管炎病毒进行分子进化树分析,对疫苗毒株加以分类,并分析了流行毒株与疫苗株的差异性。

辅酶Q的生物特性及其在宠物食品中的应用前景

辅酶Q(Coenzyme Q,CoQ)能在动物机体所有组织和细胞中大量合成,是由一个苯醌环和多个异戊二烯构成的长链状的醌类化合物。CoQ是线粒体电子传递链中的辅助因子,对ATP的产生有着至关重要的作用。同时,CoQ是一种亲脂性的抗氧化剂,并且是唯一一种可以内源合成的脂溶性抗氧化剂。CoQ在动物体内含量会因为年龄、疾病和药物的影响而降低。不过,可以通过外源摄入的方法补充。文章阐述了CoQ在动物体内的合成、吸收转运过程和多种生理功能及其在宠物保健和疾病治疗中的作用。

生物反应器生产狂犬病疫苗的工艺应用

狂犬病是一种致死率非常高的人畜共患病,我国列为甲类传染病,是重要防控疫病。由于尚无非常有效的治疗方法,因此暴露于该病原后,接种疫苗是最重要预防措施之一。2015年OIE的狂犬病控制计划指出,95%的人狂犬病是由病犬咬伤所致,如果实现70%以上的犬免疫,可将人的狂犬病发病率极大降低。与人预防该病相比,所消耗的费用成本节约近10倍。

动物源性食品中盐霉素残留的检测方法

盐霉素（SAL），又名沙利霉素、优素精、萨里诺马辛、球虫粉，分子式为C42H70O11，于1970年由日本株式会社东京研究所研制成功，是聚醚类抗生素的一种，是由白色链球菌经发酵培养产生的一种一元羧酸聚醚类离子载体型抗生素类。盐霉素是白色或淡黄色结晶性粉末，微有特异味，熔点140℃～142℃，易溶于丙酮、三氯甲烷、苯、乙酸乙酯、乙醚和甲醇，几乎不溶于水。

重组L.lactis的研究进展及在兽用疫苗中的应用

乳酸乳球菌(L.lactis)被公认为食品安全级微生物,以其抗原性弱、不产生胞外酶和不在胃肠道内定植的优点在疫苗研发方面具有天然的优势。近年来,构建重组乳酸乳球菌已成为生物制药、疫苗研究的热点。本文对重组乳酸乳球菌的研究及其在兽用疫苗的应用进展进行了介绍。

重视猪场育肥猪的PRRSV感染

猪场要想做好PRRS的防控，首先要弄清楚PRRS在猪场“阴魂不散”的根源，即找到PRRSV在猪场是如何循环的，感染节点在哪里，再考虑如何切断这个感染链条。