ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究

目的 构建ERβ表达载体 ,探讨其在肿瘤细胞株中的表达及功能。 方法 利用常规PCR技术扩增人全长ERβ编码序列 ,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中 ,得到重组质粒pCDNA3 ERβ。用Westernblot和体外翻译方法检测ERβ的表达情况。将pCDNA3 ERβ分别转染SV4 0病毒转化的胚胎肾细胞 2 93T、乳腺癌细胞MDA MB 4 35、MDA MB 4 36、SKBR3和前列腺癌细胞PC 3,用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ在这些不同细胞中的功能。 结果 经酶切鉴定 ,证实重组质粒pCDNA3 ERβ含有目的基因ERβ。Westernblot检测表明 ,转染pCDNA3 ERβ的细胞表达了相对分子量为 6 30 0 0的ERβ蛋白。体外翻译进一步证实该表达载体翻译了ERβ蛋白。报告基因系统检测表明 ,ERβ在不同肿瘤细胞中的表达均激活了雌激素应答的ERE和C3报告基因的表达。 结论 pCDNA3 ERβ在肿瘤细胞中既可表达 ,又具有功能活性 ,为进一步研究ERβ在肿瘤细胞中的作用奠定了基础。