羔羊大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究

对２９１只怀孕母羊皮下注射菌毛苗０．５ｍｇ／只，其局部和全身均无任何不良反应，不会造成母羊流产、早产及羔羊畸形，进一步证明该菌毛苗安全性好。应用菌毛苗主动免疫的怀羔母羊所产羔羊通过吃初孔获得被动免疫，攻毒结果，保护率均在８０％以上，证明该苗具有较强的Ｋ＿（９９）和Ｆ＿（４１）免疫原性，可使羔羊获得确实的被动免疫，对羔羊的生长发育产生良好的影响。

转基因动物乳腺定位表达重组蛋白质的研究现状(上)

介绍了转基因动物乳腺定位表达重组蛋白质研究的现状、存在的问题和未来发展前景。

转基因动物乳腺定位表达重组蛋白质的研究现状(下)

转基因动物乳腺定位表达重组蛋白质的研究现状（下）卢一凡邓继先肖成祖马清钧（军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）四、乳汁中表达产物的特征不论材料的来源如何，如细菌培养物、哺乳动物细胞培养液或转基因动物乳汁，对重组蛋白都需进行纯化，其所需的要求...

广州市远郊九佛农村5岁以下儿童产毒性大肠杆菌(ETEC)腹泻的定点研究

1988年3月—5月在广州远郊九佛农村两个自然对342名不足5岁儿童的ETEC腹泻作定点研究。发生腹泻186人次,估算发病率为1.26次/人/年。检出病原体6种71株,检出率38％(71/186),依次为ETEC45株:轮状病毒和志贺氏菌各11株,气单胞菌2株,沙门氏菌和致病性大肠杆菌(EPEC)各1株。ETEC的三种肠毒素基因探针(热敏肠毒素LT,热稳定肠毒素ST-H和ST-P)的检测结果依次为16.2％(30/186)、3.7％(7/186)、1.7％(3/186),另外,同时具有二种肠毒素(LT+ST)的ETEC有5株占2.6％(5/186)。ETEC的抗药性普遍存在,多抗性尤为严重,最少的抗9种,最多的竟抗20种。LT阴性(LT-)菌的多抗性强度显著大于LT^+菌(P<0.05)。两种菌对痢特灵,呋喃妥因、床大霉素、卡那霉素都高度敏感,对青霉素、万古霉素、杆菌肽、新生菌素、麦迪霉索具有较强抗性。ETEC中存在7种耐药模式,其中3种为ETEC模式,4种志贺氏模式,这在国内未见报道,对深入研究志贺氏菌的耐药机理有实际意义。

芹菜夜蛾核型多角体病毒感染5种昆虫细胞系的研究

用０．５ＭＯＩ的ＳｆａＭＮＰＶ病毒感染液感染５种昆虫细胞系：Ｂｍｅ、Ｐｘ、Ｈｖ、Ｔｎ和ＬｅＨ．结果表明：这５种细胞系对ＳｆａＭＮＰＶ都敏感．感染１４４ｈ后，受染细胞百分率分别是２．８４％、１１．８３％、８％１、６．６５、６．２２和７．０２．电镜观察可见感染细胞核中出现病毒发生基质、病毒粒子和多角体，病毒形态大小分别是：多角体１．４５±０．１０μｍ，病毒粒子３８．１±２．０９×３０６±１４．５ｎｍ，多角体晶格为７０Ａ．

t-PAS165W突变体的分子设计及其生物活性的初步分析

蛋白质工程是继基因工程之后的生物学前沿研究领域。借助于分子设计,在氨基酸水平进行点突变的方法深入研究蛋白质的结构—功能关系,是当前国际上分子生物学的活跃领域和新的发展趋势。 组织型纤溶酶原激活剂(Tissue type plasminogenactivator,t-PA)是由血管内皮细胞合成并分泌的糖蛋白,对心血管系统栓塞性疾病的治疗具有较好的疗效。但由于野生型t-PA在血液中的半衰期太短(～5min),因此需反复多次给药。

结直肠癌患者血清外泌体代替肿瘤组织检测K-Ras基因突变的研究

目的探讨结直肠癌患者血清外泌体代替肿瘤组织进行DNA中K-Ras基因12密码子突变检测的价值。方法收集2014年5月至2015年9月于我院病理组织学诊断为局部晚期或转移性结直肠癌患者的外周血标本90例,使用Exo Quick试剂提取血清外泌体,盐析法提取外泌体及血细胞DNA,采用PCR方法扩增K-Ras基因12密码子并通过高通量测序法检测突变,比较血清外泌体DNA与血细胞DNA突变的特异性,比较外泌体与组织学检测的K-Ras基因12密码子突变情况。结果 90例结直肠癌患者中检测出外泌体K-Ras基因12密码子突变43例,突变率为47.8%。全组共检出4种突变类型,以G12D突变率为最高。与组织学检测比较,灵敏度为90.6%,一致性为81.1%(Kappa值=0.62,P<0.05)。结论血清外泌体DNA用于检测肿瘤相关突变,与肿瘤组织相比一致性较高,可作为液体活检的来源指导肿瘤的个体化治疗。

发酵生产中空气微生物污染的综合检测

空气中的噬菌体和细菌对L—谷氨酸发酵生产的污染是一个严重问题,主要是由于牵涉的因素较多,问题比较复杂.目前为止,尚未完全解决.我们针对噬菌体广泛地存在于适合宿主菌生存的泥土、污水和空气中,预防应从二个方面着手:1.防止噬菌体污染环境,发酵设备,菌种。

内含子对提高转基因动物基因表达效率的影响

综述了内含子在转基因动物基因表达中的作用，对内源性内含子和异源内含子对转基因表达的影响进行分析，讨论了内含子提高转基因动物基因表达效率的三种可能机制，并指出在表达载体构建中应考虑到内含子的重要性．

丙型肝炎病毒抗原决定簇与霍乱毒素B亚基的融合表达以及融合蛋白的抗原性

通过固相化学合成法，合成了编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区的４个抗原决定簇基因，这些抗原决定簇基因片段以不同方式串朕后与ｃｔｘＢ基因融合，构建了１２种表达不同嵌合蛋白的重组质粒。各重组质粒转化大肠杆菌后均能高效分泌性表达融合蛋白，表达产量随所融合的抗原决定簇不同在１０～５０μｇ／ｍｌ之间，表达水平主要与抗原决定簇的氨基酸组成有关，而与抗原决定簇的大小及串联次数关系不大。融合蛋白通过亲和层析纯化达到了电泳纯。对１１种融合蛋白中ＨＣＶ抗原决定簇的反应原性的研究表明，多数融合蛋白中ＨＣＶ抗原决定簇均能与对应的ＨＣＶ抗体结合。其中以融合蛋白９５０８２为抗原研制的抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂具有良好的灵敏度和特异性。

重组人白细胞介素6的制备

我们采用本院基础医学研究所组建的ＩＬ—６工程菌Ｅ．ｃｏｉｌＤＨ５ａ（ｐＢＶ—ｈｌＬ－６），在选定的培养基及ｐＨ值下，采用３０升发酵罐进一步观察了工程菌的生长和ｒＩＬ－６的表达，确定了发酵工艺条件。在此条件下连续进行了三批次的培养试验。结果表明，工程首的生长密度达到２．５１±０．０２ｇ［干重］／Ｌ［发酵液］，ｒＩＬ—６产率为１８２．４±２．０ｍｇ／ｇ［干重］。ｒＩＬ—６以包涵体形式表达于大肠杆菌细胞中，破菌后选用非离子型去垢剂或尿素等变性剂提取包涵体中的杂蛋白，可使ｒＩＬ—６的纯度达到７０．１±１．３％，收率为７１．９±１．９％。洗涤后的包涵体，经过凝胶柱纯化和复性，ｒＩＬ—６纯度达到９５％以上，柱纯化的收率为７２．３±０．９％；采用依赖ＩＬ—６，小鼠杂交瘤细胞系７ＴＤ１及ＭＴＴ比色法测定生物活性，ｒＩＬ—６比活性达２×１０８Ｕ／ｍｇ。

TGF-β在骨关节炎发生中的可能作用

转化生长因子TGF - β具有广泛的生理效应 ,对于维持关节软骨正常有重要意义。软骨细胞外基质降解和关节软骨损坏是骨关节炎的重要特征 ,研究表明TGF - β一方面通过调节细胞外基质成分含量维持基质的正常更新 ,另一方面通过调节关节软骨细胞的形成、增殖和分化来保持正常数量和正常生理状态的软骨细胞。本文就这两个方面综述了最新研究进展 ,以探讨TGF - β在骨关节炎发生中的可能调节机制。

重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实，根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息，利用ＰＣＲ技术，对人ＴＮＦα基因进行了改造，并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，分子量约为３７ｋＤ；活性检测结果证实，该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力，在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。

昆虫细胞的大规模培养

昆虫细胞的大规模培养李文青，肖成祖（北京军事医学科学院生物工程研究所，）昆虫细胞培养的鼻祖是德国人ｆｏｒｈａｒｄＢｅｎｄｉｃｔ（１８７８—１９５８）［１］，他在１９１５年发表了有关昆虫细胞培养的第一篇文章［２］。早期，昆虫细胞的培养是为了进行昆虫的生...

利用分子进化树计算蛋白质的特异进化速率

本文提出了一种计算蛋白质绝对进化距离和进化速率的方法，它根据现有同源蛋白质的序列构建分子进化树，并推断进化过程中各结点处的共同祖先序列，根据某成员与某结点处共同祖先序列的氨基酸差异百分率，计算该蛋白质序列的特异进化距离和进化速率。比较我们的算法和Ｄａｙｈｏｆｆ等的模拟统计方法表明，我们的算法在一定范围内是正确的。结合计算哺乳动物红细胞生成素的进化速率，讨论了本算法在分子进化研究中的应用。

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。

四价HCV聚合抗原的克隆、表达及在抗-HCV ELISA试剂中的应用

本研究通过反转录从丙肝病人血清中克隆了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３ｃ基因，通过ＤＮＡ合成法又分别合成了编码ＨＣＶ核心抗原基因、ＮＳ４抗原及ＮＳ５抗原部分抗原决定簇的基因，利用基因工程手段，在大肠杆菌中表达了含有上述四种抗原的融合蛋白。该融合蛋白具有良好的抗原性和特异性，以该融合蛋白为抗原制备的抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂检测中国药品生物制品检定所１９８份标准血清时，其阳性、阴性符合率分别达到９７％和９８％。

真核细胞高效表达载体的构建及尿激酶原基因在哺乳动物细胞中的高效表达

真核细胞高效表达载体的构建及尿激酶原基因在哺乳动物细胞中的高效表达北京军事医学科学院生物工程研究所１００８５０）李风知，李军，俞炜源真核表达载体的元件组成及结构是哺乳动物细胞高效表达外源基因的关键因素之一。我们以基因表达调控理论为指导，采用多种表达载...

HBV基因组中GRE相关的DNA片段能介导多种激素对转录的调节作用

乙型肝炎病毒(HBV)能引起急性和慢性的乙型肝炎,慢性HBV感染可能导致肝硬变,最终引发肝细胞癌(HCC)。在世界范围内慢性HBV感染几乎波及三亿人,其中四分之三在亚洲。一些研究结果表明男性遭受慢性HBV感染、肝损伤和肝细胞癌的危险性高于女性。许多临床报告证明,给慢性HBV患者服用可的松类甾类激素可使患者血清中的HBsAg水平上升,同样的激素处理也能使培养细胞中的HBcAg表达水平升高。

蛋白质剪接与一类新的可移动遗传因子

最近在几种生物体中连续发现了蛋白质剪接现象，由于它与通常所说的ＲＮＡ剪接的区别，人们称这些在蛋白质水平被剪切掉的部分为“蛋白质内含子”。有些蛋白质内含子具有核酸内切酶功能，编码蛋白质内含子的ＤＮＡ片段是一类新的可移动遗传因子。文中介绍了目前发现的几例蛋白质剪接现象，讨论了蛋白质剪接的可能机理，分析了蛋白质内含子的进化及其生物学意义。