转基因肝星状细胞株的建立及生物学特性

目的 建立稳定表达肝细胞生长因子 (HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF。方法 构建携带hgf基因全长序列的重组逆转录病毒pMSCV HGF ,反复感染肝星状细胞系CFSC建立转基因肝星状细胞株。对建立的CFSC/HGF用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )和酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别从基因和蛋白水平进行鉴定 ,并通过免疫细胞化学检测、细胞增殖活性测定 ,以及对人肝癌细胞HepG2的扩散试验等对其生物学特性进行初步研究。结果 构建了重组逆转录病毒质粒 pMSCV HGF及包装细胞株PT/HGF ,建立并筛选出HGF表达水平分别为0 .15、2 .2 3、5 .48、9.76μg/L的 4个细胞株CFSC/HGF ,细胞表达结蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 ;随HGF表达水平不同 ,CFSC/HGF细胞增殖活性显示出明显的差别 ;CFSC/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散 ,生长受抑。结论 建立了稳定表达hHGF的肝星状细胞株CFSC/HGF ,并对其生物学行为进行了初步鉴定。