溶瘤腺病毒肿瘤靶向治疗:从实验室到临床

过去几十年从实验室到临床对溶瘤腺病毒进行了广泛的研究。有多种策略增强溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性,包括将腺病毒基因组中参与细胞周期节点调控的功能基因(如E1A或E1B)进行突变或(和)利用肿瘤特异性启动子调控E1A基因的靶向转录调控,利用不同血清型腺病毒或RGD基序改变溶瘤腺病毒进入肿瘤细胞方式的靶向转导调控,以及利用细胞载体将溶瘤腺病毒传送至远处的肿瘤部位。溶瘤腺病毒作为一种载体,输送免疫调节基因或治疗性基因,通过增强抗肿瘤免疫,或引起肿瘤细胞凋亡、自杀等产生协同抗肿瘤效应。溶瘤腺病毒临床试验涉及到多种实体瘤,显示其临床应用是安全的,毒性作用轻至中度,患者能很好耐受,但有明确客观抗肿瘤反应的临床病例较少见,联合诸如化、放疗等治疗方法有助于提高临床效果。未来的方向应强化溶瘤腺病毒免疫学相关机制的研究、突破妨碍溶瘤腺病毒研究的一些技术性瓶颈、优化细胞载体、提高溶瘤腺病毒远处传递的靶向性,以及寻找更具潜能的肿瘤干细胞作为靶点。此外,需要扩大临床试验的研究范围和加强与其他治疗方式特别是免疫治疗联合应用的研究。

FasL诱导HIF-1α表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响

目的探讨FasL诱导缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响。方法将含FasL全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1 FasL转染人直肠癌细胞系HR-8348,通过Transwell侵袭小室实验检测癌细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞不同缺氧时点HIF-1α表达水平。结果细胞侵袭实验表明,FasL转染组HR-8348细胞穿透Transwell滤膜细胞数为12.9±2.4,明显多于空载体转染组和对照组(分别为7.7±2.1和8.1±2.0,P<0.05)。各组细胞在缺氧0h时点无HIF-1α表达,6h时点HIF-1α仅有微量表达,缺氧12h与24h时点FasL阳性细胞组(FasL转染组)HIF-1α表达水平明显提高(P<0.05),FasL阴性细胞组(对照组和空载体转染组)HIF-1α表达水平无显著变化(P>0.05)。同一缺氧时相HIF-1α表达水平组间比较,缺氧0h与6h各组间均无显著性差异(P>0.05),缺氧12h与24h转染FasL组显著高于空载体转染组和对照组(P<0.01)。结论直肠癌细胞中FasL诱导HIF-1α表达的因素,可促进直肠癌细胞对缺氧的适应及提高癌细胞的侵袭能力。

结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织相关差异表达蛋白研究

目的探讨结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE),对比分析结直肠癌原发灶、癌旁正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点;采用细胞转染方法,将差异蛋白基因导入结直肠癌细胞,观察细胞生物学行为的改变。结果结直肠癌原发灶与正常肠黏膜组织中蛋白质组分有明显差别。结直肠癌原发灶组织与正常肠黏膜组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为60个。共分析了8个差异蛋白点,其中2个蛋白点在原发灶组织中表达下调,6个蛋白点在原发灶组织中表达上调。经质谱鉴定,碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)在原发性组织中表达下调,醛缩酶A等在原发灶中表达上调。将CAII cDNA克隆转染结直肠癌细胞后,癌细胞侵袭、趋化运动能力及耐药性均明显降低。结论结直肠癌原发灶和正常肠黏膜蛋白质组表达有显著差异,CAⅡ、PDI表达降低和醛缩酶A表达增强可能与结直肠癌的发生相关。

组织蛋白酶B表达对结直肠癌细胞侵袭行为的影响

目的探讨组织蛋白酶B(CatB)表达对结直肠癌细胞黏附和侵袭行为的影响。方法选用人结肠癌细胞系LoVo和人直肠癌细胞系HR-8348,将含CatB全长cDNA的质粒pcDNA3CatB分别转染LoVo和HR-8348细胞。用RT-PCR方法检测CatBmRNA表达,采用细胞学实验方法分别测定并比较对照组、空载体转染组和CatB转染组细胞的黏附能力和细胞侵袭能力。结果CatB转染后,LoVo、HR-8348细胞中可检测到CatBmRNA的表达。对照组、空载体转染组、CatB转染组LoVo细胞与基质蛋白的黏附力分别为0.4616±0.1487、0.4121±0.2158、0.6916±0.1508。CatB转染组LoVo细胞黏附率高于对照组和空载体转染组,差异有显著性意义(F=5.8390,P<0.01)。对照组、空载体转染组、CatB转染组HR-8348细胞与基质蛋白的黏附率分别为0.4514±0.1195、0.5325±0.0999、0.7193±0.1013。CatB转染组HR-8348细胞黏附力高于对照组和空载体转染组,差异有显著性意义(F=13.1034,P<0.01)。对照组、空载体转染组和CatB转染组LoVo细胞侵袭数分别为47.09±8.16、52.41±6.24、66.47±8.77,三组细胞的侵袭能力有显著差异(F=9.8843,P<0.01),CatB转染组LoVo细胞侵袭数高于对照组和空载体转染组。对照组、空载体组和CatB转染组HR-8348细胞侵袭数分别为43.18±4.57、45.99±6.24、72.41±9.34,三组细胞侵袭力有显著差异(F=31.8474,P<0.01)。CatB转染组HR-8348细胞侵袭数高于对照组和空载体转染组。结论CatB表达增强了结直肠癌细胞的运动迁徙能力和与细胞外基质的黏附能力,可促进癌细胞的侵袭和转移。

乙型肝炎病毒感染者外周血T淋巴细胞亚群表达与其血清HBV-DNA水平的相关性分析

观察乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血T细胞亚群功能变化与其血清HBV-DNA水平,探讨病毒复制程度与细胞免疫功能的关系。应用流式细胞术直接荧光法检测142例HBV感染者和35名健康对照者外周血中T淋巴细胞亚群百分率,用荧光定量PCR法检测HBV感染者血清HBV-DNA。结果显示:与健康对照组比较,慢性乙型肝炎组CD4+细胞数量降低,CD8+细胞数量明显升高(P均<0.01),肝硬化组CD4+/CD8+细胞比值与健康对照组比较明显降低,CD4+CD25+调节性T细胞数量明显增加(P<0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者可导致体内细胞免疫功能紊乱,HBV-DNA高复制状态可进一步促进细胞免疫功能紊乱,CD4+/CD8比值的动态检测可为指导临床免疫治疗提供依据。

结直肠癌原发灶及其肝转移灶的蛋白表达差异研究

目的研究结直肠癌发生及其肝转移过程中蛋白质的表达差异,以及这些差异蛋白与肝转移的关系。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE)对比分析正常肠黏膜、结直肠癌原发灶及其肝转移灶中的蛋白质组表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点。采用免疫组化方法验证差异蛋白在结直肠癌及其肝转移灶组织中的表达情况。结果结直肠癌原发灶与肝转移灶组织中蛋白质组分有明显差异。平均每张胶大约有900个蛋白点,结直肠癌原发灶与肝转移灶组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为46个。共分析了20个差异蛋白点,其中2个蛋白点在肝转移灶组织中表达下调,16个蛋白点肝在转移灶组织中表达上调。经质谱鉴定,激活蛋白因子2B、腺苷蛋氨酸变异体在肝转移灶组织中表达下调,锌指蛋白64同系物、鸟嘌呤核苷酸交换因子4、人精氨酸酶、人谷胱甘肽S-转移酶A3、肿瘤坏死因子α-诱导蛋白9等蛋白在肝转移灶中表达上调。经免疫组化方法验证人精氨酸酶表达在肝转移灶组织中高于原发灶组织。结论结直肠癌原发灶及其肝转移灶蛋白质组表达有显著差异,一些差异蛋白与结直肠癌的肝转移相关。人精氨酸酶可能是结直肠癌肝转移的生物标志物之一。

对进修人员开展评估管理的探索

随着现代医学的飞速发展,医师的进修学习已成为职业培训的重要途径与方法。本文就进修医师管理和医师进修效果评价进行了探讨,并对进修管理的改进提出了设想和建议。总结了对临床进修生的招收、上岗前的培训与学习、入科后的教学管理、结业考试等管理经验,提出了临床跟学、共同研讨、名师带教等提升进修效果的具体方法。

组织蛋白酶B与金属硫蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨组织蛋白酶B(CatB)和金属硫蛋白(MT)表达与结直肠癌淋巴结和肝转移的关系。方法采用免疫组化方法检测82例结直肠癌患者原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶组织中CatB、MT的表达,对比分析CatB、MT表达与临床分期和病理类型的关系。结果结直肠癌原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中CatB表达阳性率分别为48.8%、20.7%、66.7%、59.1%,MT表达阳性率分别为53.7%、26.8%、71.4%、72.7%。结直肠癌原发灶、转移淋巴结和肝转移组织中CatB、MT表达阳性率均高于正常肠黏膜组织。转移淋巴结和肝转移灶中CatB、MT表达阳性率高于癌原发灶和无转移淋巴结组织。Dukes C、D期CatB、MT表达阳性率高于Dukes A、B期(χ2=11.0244、10.9338,P<0.01)。低分化腺癌和黏液腺癌CatB、MT表达阳性率高于高分化和中分化腺癌(χ2=10.9338、10.1148,P<0.01)。结论CatB、MT表达增强与结直肠癌的浸润和淋巴结、肝转移有关,可作为评价结直肠癌患者预后的重要指标。

T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测结直肠癌细胞方法的建立及其意义

目的探讨T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测循环血中结直肠癌细胞的可行性及其价值。方法配制不同浓度的HT29细胞悬液并加入1×107个健康人外周血单核细胞,建立模拟结直肠癌循环肿瘤细胞的模型,从中分离出有核细胞后,加入生物素化抗CEA单克隆抗体(针对Gold抗原决定簇Ⅳ),孵育后加入亲和素-生物素-DNA分子,再加入T7 RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并用RT-PCR检测从模型中分离出的有核细胞中CEA mRNA的表达情况。结果建立了检测结直肠癌细胞的T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术,最低可从1×107个单核细胞中检出5个癌细胞,比RT-PCR最低可从1×107个单核细胞中检出1×102个癌细胞更加敏感。结论T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术可用于检测外周血中的循环肿瘤细胞,是一种敏感的检测结直肠癌细胞的方法。

125例阴道念珠菌的检验方法比较分析

目的：探讨四种检验方法检验阴道念珠菌病的效果比较。方法：同时用盐水法、快速凝集法、培养法和革兰染色法对临床拟诊的125例阴道分泌物检测进行比较。结果：快速凝集法的检出率最高，革兰染色法次之，盐水法的检出率最低。结论：快速凝集法检测念珠菌具有简便、检出率高等特点，在各级医院都可采用，尤其适宜在基层医院推广。

术前应用肠梗阻导管对梗阻性左半结直肠癌患者心理干预作用分析

目的探讨经肛型肠梗阻导管置入术对左半结直肠癌性肠梗阻患者术前心理干预作用的价值。方法选择54例梗阻性左半结直肠癌患者分为导管组和对照组,各27例。对照组急诊I期手术切除病变,近端结肠造口,II期造口还纳;导管组术前置入肠梗阻导管减压,解除梗阻后行I期肿瘤切除肠吻合术。比较两组患者术前的焦虑、抑郁情况。结果导管组患者焦虑、抑郁评分明显低于对照组,P<0.05。结论术前置入肠梗阻导管对梗阻性左半结直肠癌患者心理干预作用显著。