丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达

目的 :为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略 ,构建具有 2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体。方法 :分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有 2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游 ,称为pRSC HBV/HCV ,转染SP2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达 ,免疫Balb/c小鼠 ,用酶联免疫小鼠体液免疫应答。结果 :pRSC HBV/HCV转染SP2 / 0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞 ,SDS Page电泳显示在 14kD及 2 1kD处均可见蛋白条带 ,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致 ,Western印迹分析显示在 14kD及 2 1kD处可见特异性的蛋白条带。 5只免疫鼠中全部出现抗 HCV及抗 HBV抗体 ,而对照组全阴性。结论 :pRSC HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白 ,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答 ,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础。

慢性肝病患者肝组织Fas抗原的表达及意义

Ｆａｓ是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的受体，效应细胞的ＦａｓＬ与靶细胞的Ｆａｓ结合时，可诱导靶细胞凋亡［１］．有研究报道［２］，病毒性肝炎患者肝细胞的Ｆａｓ抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨慢性乙型、丙型病毒性肝炎、肝...

乙型肝炎导向干扰素抗乙型肝炎病毒作用的体外实验研究

为提高ＩＦＮ抗ＨＢＶ疗效，实现感染细胞水平上的抗病毒性肝炎导向治疗，我们将抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ＇）２片段与ＩＦＮ文联，所得交联体称为乙型肝炎导向干扰素（Ｔ－ＩＦＮ）。应用ＨＢＶＤＮＡ转染细胞系（２，２，１５细胞）作模型，对Ｔ－ＩＦＮ进行了体外抗ＨＢＶ实验：通过检测细胞上清液ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ水平的变化，结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ活性，并与游离ＩＦＮ和ＭｃＡｂ以及二者的混合法（Ｍｉｘ）进行比较。结果显示，经１２天作用，Ｔ－ＩＦＮ在细胞存活率。

丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达与HAI积分关系的研究

目的：研究丙型病毒性肝炎患者肝组织Ｆａｓ抗原的表达状况与肝细胞病理损伤的关系，探讨细胞凋亡在丙型肝炎发病机制中的作用和意义。方法：６９例丙型肝炎患者，均为血清抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性或ＨＣＶＲＮＡ（ＰＣＲ）阳性，肝组织均为快速肝穿，福尔马林固定，连续切片，常规ＨＥ染色，按Ｋｎｏｄｅｌ方法计算ＨＡＩ积分前三项，根据Ｋｉｙｏｓｈｉ方法进行Ｆａｓ抗原半定量分析。结果：Ｆａｓ抗原在丙肝的阳性率为７４％，其中ＣＡＨ（８４．５％）。急肝（８３．４％）明显高于ＣＰＨ（６４．９％，Ｐ＜０．０５）。ＨＡＩ积分与Ｆａｓ抗原半定量分析显示，肝组织病理炎症积分越高，Ｆａｓ抗原表达量越高（Ｐ＜０．０５）。结论：Ｆａｓ抗原在丙型病毒性肝炎患者肝组织的表达与肝细胞的病理损伤明显相关。

丙型肝炎肝细胞凋亡的电镜和免疫组化研究

目的探讨丙型肝炎肝细胞凋亡与Ｆａｓ抗原表达及病理损伤的关系。方法应用电镜和免疫组化方法检测了２３例慢性丙型肝炎患者的肝组织。结果凋亡肝细胞呈多种形态学改变；Ｆａｓ抗原中，强度表达及组织炎症活动度积分高者，细胞凋亡指数增高。结论肝细胞凋亡是一系列超微病理改变过程，Ｆａｓ系统在介导细胞凋亡中起重要作用，细胞凋亡是慢性丙型肝炎肝组织的重要病理变化。

丙型肝炎病毒核酸定量检测方法的研究及评价

ＨＣＶＲＮＡ是丙型肝炎病毒感染最直接和可靠的标志，本文就目前几种ＨＣＶＲＮＡ定量检测方法及其临床应用与前景作一综述。

原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白mRNA的意义

目的由于ＰＣＲ技术的应用，血循环中癌细胞的检测近有很大进展．本文用ＲＴＰＣＲ检测肝癌（ＨＣＣ）和其他慢性肝病患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ，藉以反映ＨＣＣ细胞的存在，并与其他血清标记物比较．方法ＨＣＣ患者２２例，肝硬变和慢性乙型肝炎患者各１０例，健康成人受试者（对照）５例．取患者和对照的外周血，分离单核细胞，提取总ＲＮＡ并作电泳鉴定，用合成的两对引物进行巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ，同时分析血清ＡＦＰ和乙肝标记物．结果ＡＦＰｍＲＮＡ在１３例ＨＣＣ（５９１％），２例肝硬变（２００％）患者外周血中测到，其余标本均为阴性．ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的１３例患者肿瘤均大于５ｃｍ，为晚期患者．在该１３例患者中仅有６例（４６１％）在血清中测到ＡＦＰ，但有１２例（９２３％）ＨＢｓＡｇ，抗ＨＢｅ，抗ＨＢｃ全阳性，而ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的５例该３标记物全阴性．结论ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ是检测ＨＣＣ和肝硬变患者循环肝癌细胞的敏感方法．患者外周血中的ＡＦＰｍＲＮＡ有可能作为肿瘤转移和复发的标记对ＨＣＣ诊断、随访观察和疗效评定有较大临床意义．

应用聚合酶链反应技术快速诊断腹水中大肠杆菌感染

应用聚合酶链反应技术快速诊断腹水中大肠杆菌感染陈乃玲童贻刚苑公忍顾芳田惠英韩春风贾克明作者单位：北京１００７００北京军区总医院解放军肝病研究所目前国内外对腹水感染的诊断主要依靠细胞数检测、生化分析、鲎试验及细菌培养，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术尚未...

乙型肝炎与肝癌关系

乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅能引起急性和慢性肝炎、肝硬变[1-4],而且由于持续HBV感染和宿主免疫反应,终可导致肝细胞癌(HCC)[5-27].过去对其机制不清,近年由于分子生物学、细胞生物学先进技术的应用,这方面研究取得重大进展[28-43],特别是HBV X基因的表达产物(HBx)与HCC的关系成为当前研究的热点,关于其机制现有多种观点提出,特别是HBx与抑癌基因p53作用的机制、HBx的基因突变对其功能的影响,以及HBx通过调节细胞信号传导途径激活转录的机制等,均在分子水平上进行了深入研究[44-83].据近期文献报道,除上述外HBx还有其他重要功能,如对于细胞增殖和细胞凋亡的作用及在不同条件下的不同效应.所以HBx被认为是一多功能的调节因子[78-87].台湾儿童广泛推行乙肝免疫,使HCC发病率明显下降的报道引起广泛重视,这提示免疫是预防肝癌的有效措施,也证明HBV感染与HCC发病的密切联系[88-97].

细胞凋亡在病毒性肝炎及原发性肝癌中的表达

目的：细胞凋亡（Ｆａｓ）参与免疫调节及清除病毒，本文就Ｆａｓ与慢性肝病中组织学活动指数、谷丙转氨酶及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸的关系作一分析，以期了解Ｆａｓ在慢性肝病中的意义。方法：以Ｋｉｙｏｓｈｉ半定量法对４９例慢性肝病患者肝组织的Ｆａｓ表达进行了分析，部分患者进行了随访。其中慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）２５例，肝硬化（ＬＣ）６例，原发性肝癌（ＨＣＣ）１８例。结果：２５例ＣＡＨ中１８例占７２％阳性，多呈弥漫型分布。门脉或门脉周围炎症重者阳性信号明显。ＡＬＴ升高、ＨＡＩ分值高者Ｆａｓ呈高表达。在ＣＡＨ细胞凋亡和坏死并存。原发性肝癌癌组织的Ｆａｓ表达为片状或点状分布。ＩＮＦ治疗后肝组织Ｆａｓ表达增虽。

丙型肝炎患者外周血单个核细胞HCV和Fas抗原检测

目的 :探讨丙型肝炎 (丙肝 )患者外周血单个核细胞 (PBMCs)内丙型肝炎病毒抗原 (HCVAg)及Fas抗原 (FasAg)表达状况及意义。方法 :采用HCV核心区及NS3 区单克隆抗体 ,对 2 8例慢性丙肝患者PBMCs进行免疫组化检测 ,并同步检测FasAg。结果 :HCVAg及FasAg阳性率分别为 85 7% (2 4/ 2 8)和 82 2 % (2 3/ 2 8) ,经相关分析显示。两者表达呈显著正相关 (r =0 5 46 ,P <0 0 1)。FasAg阳性PBMCs中的部分细胞有凋亡性改变。结论 :HCV可感染PBMCs,并可激发FasAg表达。PBMCs中的HCV和Fas介导的细胞凋亡 ,会影响机体免疫功能 ,并可能成为病毒持续感染的原因之一。

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。

肝细胞癌p53基因的突变与表达

目的 :对HCC患者的肝组织和外周血单核细胞 (PBMC)进行突变 p5 3基因、p5 3蛋白和HBX的检测并作比较 ,以助评估它们与HCC发生的关系。方法 :从HCC患者肝组织和PBMC中提取DNA ,用PCR/SSCP和PCR/RFLP法分析 p5 3基因突变。HCC中HBx与p5 3蛋白表达用免疫组化法检测。 结果 :HCC标本 35 8% (5 /14)显示 p5 3基因第 7外显子突变发生在 2 49密码子。同样的PBMC标本中亦测到 p5 3基因第 7外显子有突变。免疫组化分析HCC肝组织中 p5 3蛋白检出率为 2 8 6 % ,而HBx在大多数标本中均有表达。 结论 :在HCC ,p5 3基因突变热点在第 7外显子 ,p5 3基因突变率与 p5 3蛋白检出率均约 30 %～ 40 % ,HBx较善遍地存在于所测的HCC标本中。这提示p5 3蛋白与HBx蛋白相互作用可能是HCC发病机制中的重要一步。

肝硬变患者TGF-β_1基因在外周血中表达及与PⅢP血清水平的关系

目的:为验证肝纤维化动物模型和慢性肝病患者肝组织中,转化生长因子(TGF-β1)的mRNA表达增强。作者分析肝硬变患者外周血TGF-β1mRNA和血清中有活性的TGF-β1蛋白及其结果与型前胶原N端肽(PP)血清水平间的关系。方法:肝硬变患者50例,健康自愿者8人,取其外周血,分离单核细胞(PBMC),提取总RNA,用巢式RT-PCR扩增TGF-β1mRNA并测定血清中TGF-β1和PP的水平。结果:分析表明患者外周血单核细胞(PBMC)中TGF-β1mRNA有高阳性率的表达。血清中TGF-β1与PP的水平均明显高于对照。结论:研究结果证实肝硬变患者TGF-β1基因在外周血中表达增强,与PP血清水平相关,表明TGF-β1可能在肝纤维化。