莱姆病螺旋体P39蛋白的基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的 克隆并表达我国莱姆病螺旋体分离株 Bm p A即 P39基因 ,为制备莱姆病螺旋体基因工程重组抗原以用于我国莱姆病的基础与临床诊断研究奠定基础。方法 应用 PCR方法及基因重组技术对我国莱姆病螺旋体分离株 P39蛋白进行全基因克隆 ,并在此基础上去掉信号肽序列 ,将 P39基因插入原核表达载体 L KB2 ,在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中进行诱导表达。表达产物以 SDS— PAGE电泳、Western blot、薄层扫描分析。结果 成功地克隆了 P39基因 ,序列分析显示 ,P39基因全长 10 2 0 bp,其核苷酸序列及氨基酸序列同源性与国外分离株均较高 ,与 Sh- 2 - 82株皆为 99% ,P39基因在大肠杆菌中以天然蛋白形式得到高效表达 ,扫描分析其分子量为 37k Da,单株表达量占菌体总蛋白的 5 8% ,Western blot实验表明其可与莱姆病患者血清发生特异性反应。结论 成功克隆了莱姆病螺旋体国内分离株 P39蛋白基因并且在原核系统中得到高效表达。重组 P39蛋白具有较好的免疫活性 。

酵母表达的重组戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白的抗原性鉴定

目的 对应用巴氏毕赤酵母表达系统制备的重组戊型肝炎病毒 (HEV)结构区ORF2蛋白的抗原性进行鉴定。方法 以原核细胞表达的重组HEVORF2抗原作为对照 ,应用间接ELISA方法鉴定重组HEVORF2蛋白在HEVIgM和IgG抗体检测中的特异性和敏感性 ;并测定不同保存时间对抗原稳定性的影响。同时 ,比较了两种重组抗原与国外 5株HEVORF2单克隆抗体的反应特性。结果 应用酵母抗原可检测到HEV抗体的最低包被量为 12 5ng ml,可检测到HEVIgM、IgG抗体的血清最大稀释度皆为 1∶5 12 0。重组蛋白与其他类型肝炎患者血清无交叉反应 ,37℃加速试验证实重组蛋白 4℃保存 12个月可保持良好的抗原性。各株单克隆抗体与酵母表达的HEVORF2蛋白有更好的反应性 ,其中 4B2、2E2与酵母表达的HEVORF2蛋白的反应性比与原核表达抗原的反应性分别高出 12 5倍和 2 5倍。结论 应用巴氏毕赤酵母表达系统制备的重组HEVORF2蛋白可能包含了更为广泛的构象依赖性抗原表位 ,具有良好抗原性、特异性和稳定性。