骨组织脱钙技术及在免疫组化染色中的应用

与一般的软组织不同 ,骨组织石蜡切片在脱水、透明等制片前需要使用脱钙剂除去骨组织中的钙盐才能制备成 4～ 5 μm厚的切片。为了更好地了解脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色质量的影响 ,本文根据骨组织及其免疫组织化学染色的特点 ,结合文献对影响骨组织免疫组织化学染色质量的组织的固定、常用的脱钙方法及脱钙液、低温 微波快速脱钙技术及注意事项等方面进展进行了综合分析。

CD44s、CD44v6在颅内转移瘤与胶质母细胞瘤中的表达研究

目的:探讨粘附分子CD44基因蛋白在颅内转移瘤及胶质母细胞瘤中的表达及其与这些肿瘤侵袭、转移之间的关系。方法:应用标准型CD44(CD44s)和变异型CD44v6基因蛋白单克隆抗体,微波-LSAB免疫组化染色检测20例正常脑组织、35例脑胶质母细胞瘤和30例颅内转移瘤中CD44基因蛋白的表达情况。结果:20例正常脑组织中CD44s和CD44v6表达均为阴性;35例脑胶质母细胞瘤CD44s阳性表达率为100%(35/35),CD44v6表达为阴性;30例颅内转移瘤中CD44s阳性表达率为86.7%(26/30),CD44v6阳性表达率为66.7%(20/30)。CD44v6在颅内转移瘤及脑胶质母细胞瘤的表达差异有显著性(P<0.01)。结论:脑胶质母细胞瘤中CD44s的表达可能与其脑内侵袭过程有关,无CD44v6表达可能与其很少发生颅外转移有关,并有可能成为颅内转移瘤诊治的有用指标之一。

COX-2、VEGF、E-cad在乳腺癌中的研究进展

在乳腺癌演变的过程中,环氧化酶2诱导了乳腺癌的发生、发展;血管内皮生长因子促进了肿瘤血管的生成,保证了肿瘤细胞的生长与存活;上皮钙黏蛋白介导同型细胞之间的连接,其表达的降低或缺失可直接引起肿瘤细胞趋向离散,易于从原发灶脱落、转移。因此,检测这三个影响因子的表达和分析它们之间的关系对判断乳腺癌患者预后及指导临床个体化治疗有重要意义,同时也为临床治疗提供了新的思路与策略。

光波-微波快速石蜡切片技术在肺穿刺活检中的应用

目的探讨光波-微波辐射技术在肺穿刺活检组织制片和染色中的作用。方法选择肺穿刺组织55例,组织固定、脱水、透明、浸蜡和苏木素染色在光波-微波炉中,用光波-微波组合Ⅱ进行处理,同时以全自动组织脱水机中处理作为对照。结果光波-微波组合Ⅱ组织处理组所用时间24.5min,全自动组织脱水机中处理组所用时间750min;光波-微波快速石蜡切片方法所制出的切片组织完整,细胞结构清晰、细胞核与细胞浆对比染色好,切片质量较同期全自动组织脱水机常规处理的好。结论光波-微波辐射石蜡切片所用的时间明显缩短,对肺穿刺标本良恶性疾病的临床病理诊断是准确、可靠的,是一种快速、方便的实用技术,有推广价值。

光波-微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的应用

目的探讨光波-微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的作用。方法用8%硝酸分别在单纯微波、单纯光波、光波-微波组合Ⅰ和光波-微波组合Ⅱ的条件下脱钙,同时以室温脱钙作为对照;应用光波-微波-LSAB免疫组织化学染色技术检测不同脱钙条件下ANP、CD31、CD34、5-HT、S-100、NF、GFAP和Vimentin的表达。结果8%硝酸室温脱钙时间最长,光波-微波组合脱钙时间最短;微波组、光波组、光波-微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显比对照组好;光波-微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显优于单纯微波、单纯光波法;光波-微波组合Ⅱ-LSAB免疫组织化学染色技术比常规免疫组织化学染色所用时间短、染色效果好。结论光波-微波辐射脱钙及免疫组化染色所用的时间明显缩短,染色效果好。

CD44与VEGF在颅内转移瘤与胶质母细胞瘤中的表达研究

目的:探讨VEGF、CD 44s和CD 44v6抗原在颅内转移瘤及胶质母细胞瘤中的表达及其与肿瘤侵袭、转移之间的关系。方法:应用微波-枸橼酸缓冲液(MW-CA)、EDTA修复抗原,微波-LSAB免疫组化染色检测VEGF、CD 44s和CD 44v6基因蛋白在20例正常脑组织、35例脑胶质母细胞瘤和30例颅内转移瘤中的表达情况。结果:20例正常脑组织中VEGF阳性表达率为25%(5/20),CD 44s和CD 44v6表达均为阴性;35例脑胶质母细胞瘤VEGF、CD 44s阳性表达率分别为82.9%(29/35)和100%(35/35),CD 44v6表达为阴性;30例颅内转移瘤中VEGF、CD 44s和CD 44v6性表达率分别为90.0%(27/30)、86.7%(26/30)和66.7%(20/30)。VEGF、CD 44s和CD 44v6在正常脑组织、脑胶质母细胞瘤和颅内转移瘤之间的阳性率差异有显著性;颅内转移瘤及脑胶质母细胞瘤与CD 44v6表达差异有显著性,但VEGF表达差异无显著性(P>0.05)。结论:VEGF有助于脑胶质母细胞瘤、颅内转移瘤与正常脑组织的鉴别,而CD 44s在脑胶质母细胞瘤中的表达可能与其脑内侵袭过程有关,无CD 44v6表达可能与其很少发生颅外转移有关,VEGF和CD 44v6有可能成为颅内转移瘤诊治的有用指标之一。

CD_(34)与CD_(44)s在非小细胞肺癌中的表达研究及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC))微血管密度(MVD)和CD44s表达与肿瘤浸润和淋巴结转移的关系。方法应用CD34和CD44s抗体,采用微波-LSAB免疫组化染色方法对78例手术切除的非小细胞肺癌进行血管标记免疫组化染色,并与10例正常组织对照。结果78例NSCLC标本平均微血管计数为65.8±14.3条,实际范围18-112条,有淋巴结转移的MVD(69.5±15.7)、CD44s(109.8±13.2)表达与无淋巴结转移的MVD(44.3±14.3)、CD44s(136.5±14.8)、正常对照的MVD (25.7±13.6)、CD44s(91.3±11.5)比较,均有非常显著的差异性(p<0.01)。MVD、CD44s与年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小以及病理学分级等临床病理学均无明显关系(P>0.05)。结论非小细胞肺癌间质内MVD和CD44s表达强度与淋巴结转移密切相关,二者均可作为预测非小细胞肺癌病人发生转移的指标。

抗原修复技术在脱钙组织冰冻切片免疫组化染色中的应用

目的 探讨抗原修复技术在脱钙组织冰冻切片免疫组织化学染色中的作用 ,并寻找最佳的抗原修复方法。方法 将“低温微波 硝酸快速脱钙方法”处理的骨及其软组织冰冻切片分为 4组 :Ⅰ对照组 (不处理 )、Ⅱ组(胰蛋白酶 )、Ⅲ组 (微波 枸椽酸 )、Ⅳ组 (微波 TritonX 1 0 0 )。应用LSAB技术检测ANP、5 HT、S 1 0 0、NF、GFAP、Vimen tin、CD31、CD34、FⅧ和VEGF和 1 0种抗体在I～Ⅳ组中的表达 ,图像分析各组阳性细胞的平均吸光度 (A)值 ,结果进行统计处理。结果 Ⅱ～Ⅳ组的吸光度值 (分别为 0 87± 0 4 1、2 .4 3± 0 35、和 2 .4 9± 0 4 3)明显高于I组 (0 4 1±0 37) ;Ⅲ～Ⅳ组明显高于Ⅱ组 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1 ) ;Ⅲ、Ⅳ组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 用微波 TritonX 1 0 0或微波 枸椽酸缓冲液对脱钙组织冰冻切片进行微波抗原修复是必要的 ,能明显提高免疫组化染色的敏感性。

CD_(31)、CD_(34)和F_(Ⅷ)在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮标记物CD31、CD34与FⅧ在显示宫颈癌微血管密度(MVD)中的差异,以及MVD与淋巴结转移的关系。方法:采用微波免疫组化染色方法(LSAB)检测CD31、CD34与FⅧ在50例宫颈癌中的阳性表达。结果:3种血管内皮标记物CD31、CD34与FⅧ显示的MVD分别是(60.6±11.9)条、(59.4±12.3)条和(51.8±10.8)条,范围分别是12～81、14～75和15～73条,3种微血管内皮标记物显示的MVD具有一致性(P>0.05)。CD31、CD34与FⅧ3种微血管内皮标记物在正常宫颈组织MVD分别是(35.9±12.5)条、(33.7±12.5)条和(32.6±12.9)条;显示宫颈鳞癌的MVD,在转移组分别是(66.2±10.5)条、(64.3±11.9)条和(63.8±10.4)条,在无转移组分别是(50.8±11.7)条、(49.7±12.8)条和(48.5±13.6)条,转移组与无转移组间差异均有显著性(P<0.01),而3种微血管内皮标记物之间显示的MVD差异无显著性(P>0.05)。结论:CD31、CD34、FⅧ相关抗原均能清晰地、选择性地显示宫颈癌的微血管,能突出显示较小的、不成熟的微血管或单一的内皮细胞;宫颈鳞癌的MVD与微血管内皮标记物的种类无关,与有无转移密切相关,MVD可作为预测宫颈癌病人预后的指标。

CD34在78例非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨微血管密度(M V D)与非小细胞肺癌(N SC LC)侵袭性行为和预后的关系。方法:微波枸椽酸缓冲液抗原修复后采用微波免疫组化染色方法(LSA B)检测778例N SC LC中的M V D与此组病人的性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、组织学类型、分化程度和淋巴结有无转移的关系。结果:78例N SC LC标本平均微血管计数为(65.8±14.3)条,实际范围18～112条。有淋巴结转移的微血管为(69.5±15.7)条,无淋巴结转移的微血管为(44.3±14.3)条,M V D与有无转移有非常显著的差异性(P<0.01),与年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小以及病理学分级等临床病理学特征无明显关系(P>0.05)。结论:M V D高的病人侵袭性强、转移率高、病人预后差,M V D可作为检测N SC LC病人预后的指标。

光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P<0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P>0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P<0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P<0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P>0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。