兽医学(中医药)北京市重点实验室的管理体制探讨

为建设好兽医学(中医药)北京市重点实验室,根据北京市教育委员会对重点实验室的要求,本文作者从建设目标出发,探讨了实验室的归属及其内部管理体制。

兽医生物安全二级实验室的管理要点

兽医实验室是指一切从事兽医病原微生物、寄生虫研究与使用,以及兽医临床诊疗和疫病检疫监测的实验室。生物安全实验室是通过实验室设计、建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用,通过严格遵守预先制定的安全操作程序和管理规范等综合措施,确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害,确保周围环境不受其危害的实验室。兽医生物安全实验室是指对病原微生物进行试验操作时所产生的生物危害具有物理防护能力的兽医实验室。

薏苡仁在兽医临床中的应用及研究进展

薏苡仁是禾本科(Gramineae)薏苡属(CoixL.)草本植物成熟后的干燥种仁,具有较高的营养和药用价值,含有脂肪酸、酯类、黄酮、三萜、生物碱等多种活性物质。中兽医认为薏苡仁性凉,味甘、淡,具有健脾利湿、排浊利肾、清热排脓、解毒散结的功效。现代药理学研究发现,薏苡仁具有抗肿瘤,抗炎,调节血糖、血脂和肠道菌群等功效。此外,作为常用的饲料添加剂,薏苡仁还可增加育肥动物体重,提升经济动物生产性能[1]。

中药龙胆草抗鸽毛滴虫的临床药效分析

鸽毛滴虫病是一种极易传播的寄生虫病,严重影响鸽的生产性能,甚至导致鸽的死亡,给养鸽业带来巨大经济损失。然而,临床上防控鸽毛滴虫病的药物多为化药,药物使用周期较短,毒副作用大。为更好地开发临床天然抗寄生虫用药,本文研究了中药龙胆草抗鸽毛滴虫的临床药效,为养鸽业鸽毛滴虫病的治疗提供新的用药策略。通过对鸽毛滴虫的分离、鉴定、纯化,获得稳定用于后续试验的虫株,在体外测定龙胆草水提物对鸽毛滴虫的相对生长抑制率和最低有效浓度;为进一步观察药效,作者将不同剂量浓度的龙胆草水提物加入基础日粮中,在体内测定龙胆草水提物对患病肉鸽体重、存活率、鸽毛滴虫活性、血液生化指标及炎症因子含量的影响,以此来评价中药龙胆草体内外抗鸽毛滴虫的临床药效。体外试验结果表明,龙胆草水提物作用12 h杀灭全部虫体的最低有效浓度(MEC)为50 mg·mL^(-1),具有较强的体外抗鸽毛滴虫活性;体内试验结果表明,龙胆草水提物对体重降低的病鸽有恢复体重的作用并能够提高患鸽生存率;龙胆草水提物杀虫效果与对照组相比效果显著(P<0.05),与甲硝唑组无显著差异(P>0.05),且龙胆草500 mg·只^(-1)组药效持续时间长于甲硝唑组;血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、ALT/AST含量低于对照组;血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β(TGF-β)3种炎症因子含量高于对照组,与甲硝唑组相似。龙胆草水提物对治疗鸽毛滴虫病具有显著的临床药效,其药效作用达到了化药甲硝唑的疗效,且无显著的毒副作用,因此,龙胆草可以用作抗鸽毛滴虫病潜在的天然药物开发。

扶正类中药多糖调控畜禽免疫功能的研究进展

畜禽常见传染病发病往往是畜禽免疫功能低下造成的,免疫力的降低导致畜禽更易感,进而增加发病率,对畜禽养殖行业造成了巨大的经济损失。扶正类中药具有扶正固本,提升畜禽免疫功能的作用。在临床上,扶正类中药的使用能够显著增强畜禽对病原微生物的抵抗力,降低畜禽的死亡率,进而有效减少畜禽养殖过程中的经济损失。扶正类中药中的多糖是其发挥功能的主要活性物质,主要通过调节免疫信号通路的激活和传导、炎性细胞因子的表达及体液免疫和细胞免疫的激活过程来调控畜禽免疫功能。本文总结了扶正类中药多糖调控畜禽免疫功能的相关研究,重点讨论了扶正类中药多糖对提升畜禽免疫力的作用机制和临床应用研究,提出了多糖配伍抗生素和疫苗等保护畜禽健康的联合用药思路,为畜禽规模化养殖企业和个体养殖户科学高效的防控畜禽疫病提供了防控思路和理论依据。

基于高效液相色谱法的苦参指纹图谱研究

【目的】旨在建立苦参高效液相色谱指纹图谱。【方法】采用Waters Atlantis■T3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),流动相为0.01 mol/L乙酸铵(0.045%浓氨水)和乙腈,流速1.0 mL/min,梯度洗脱,色谱柱温度30℃,检测波长225 nm。检测12批苦参样品,建立指纹图谱,进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。【结果】建立了苦参的高效液相色谱指纹图谱,苦参样品的相似度在0.940~0.998之间,共标定出23个共有峰,并通过标准品确认了其中5个,分别为氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱。聚类分析将12批苦参样品分为4类,主成分分析后23个共有峰缩减为4个主成分。【结论】该方法快速可靠,稳定性和重复性好,可用于苦参的质量控制。

蛋白桑在畜禽生产上的应用研究进展

“桑树浑身都是宝”,桑白皮、桑枝桑叶、桑葚,乃至桑树的寄生物——桑寄生,都具有很高的药用价值,其中桑葚和桑叶还可供人类食用,是药食同源的代表性植物。此外,大量研究发现桑树可开发作为畜禽饲料。在1998年,国内研究人员从全国28个桑树地方品种中选育出了一种具备杂交优势的饲料桑,并命名为“蛋白桑”或“饲料桑”。蛋白桑生命力顽强,生长快速,营养成分丰富,且有良好的药用、饲用及生态价值,具备良好的饲料开发资源与利用前景。与此同时,蛋白桑可以调控多种畜禽的营养代谢过程,改善肉品质,并增强畜禽的抗病能力。本文重点对蛋白桑作为畜禽饲料的优势以及在生产中应用效果的新研究成果进行总结,以期为在畜禽养殖过程中合理开发和应用蛋白桑提供理论支持。

内化菌耐受性Tr值评估方法研究

【目的】建立一种全面考虑宿主细胞、内化菌、抗菌药物三者互作的评估方法来精准比较内化菌介导的抗菌药物耐受情况。【方法】以IEC-6、RIMVECs和RAW264.7细胞为宿主细胞,以金黄色葡萄球菌和沙门菌作为内化菌,以氨苄西林、环丙沙星、四环素等7种化学药品及槲皮素和山柰酚等4种中药标准品为抗菌药物,检测抗菌药物细胞外最小杀菌浓度(MBC EX),建立细菌-细胞感染互作模型,利用细菌菌落计数检测抗菌药物细胞内最小杀菌浓度(MBC IN)。测定内化菌感染细胞的百分比(N)及药物治疗后内化菌感染细胞的百分比(N D)。通过计算得到内化菌耐受值(Tr),对内化菌的抗菌药物耐受性进行评估。【结果】金黄色葡萄球菌对氨苄西林、环丙沙星、红霉素、多黏菌素、利福平、四环素、万古霉素7种化学药品和中药标准品黄芩苷均产生了耐受性(Tr值>1),其中,对环丙沙星耐受性Tr值最高,耐受程度最严重;对槲皮素、山奈酚和儿茶素不产生耐受性(Tr值≤1)。不同内化菌对四环素的耐受性结果显示,金黄色葡萄球菌对四环素产生的耐受性Tr值大于沙门菌。不同宿主细胞对内化菌介导的抗菌药物耐受性的影响显示,IEC-6细胞中金黄色葡萄球菌对四环素的耐受性最高。【结论】耐受性Tr值评估方法不仅可有效评估内化菌对不同抗菌药物的耐受程度,还可比较不同宿主细胞对内化菌介导的抗菌药物耐受性的影响,将内化菌对抗菌药物产生的耐受性可视化和数据化地呈现出来,为临床精准用药提供指导。

生姜泻心汤加减方在宠物临床的应用

生姜泻心汤出自于汉代张仲景的《伤寒论》,包含生姜、干姜、半夏、黄芩、人参、黄连、炙甘草、大枣八味中药,全方寒热并用,辛开苦降,攻补兼施,阴阳并调,未用理气之药,却有理气之效。该方应用广泛,尤其在胃肠疾病方面常作为基本方。笔者临床收治1例近3个月内间断呕吐、大便不成形的病猫,且应用抗菌药、抑制呕吐等西兽药等难以奏效。经中兽医诊断病猫久病而脾胃虚弱,胃失和降,浊气归于上,且寒热错杂,辨证为水热互结的痞证兼脾阳虚。治则为和胃降逆,宣散水气,健脾益气。药用生姜泻心汤加炒白术、陈皮,散水消痞,和胃降逆兼健脾,其中炒白术偏重健脾和胃,陈皮偏重于理气,服药1 d后未见呕吐,大便基本成形,食欲、精神明显好转,服药3 d病猫基本痊愈。本病例可为宠物临床治疗长期呕吐病例提供新思路,为生姜泻心汤方证的科学研究及临床应用提供借鉴。

中医对奶牛乳痈的辨证论治及蒲公英的防治研究进展

奶牛乳房炎是奶牛场的高发疾病之一,在国内奶牛养殖场流行广泛,对我国奶业经济效益影响较大。乳房炎中医称为乳痈,我国传统中医学古籍中对乳痈发病的记载颇多,对乳痈的发病及治疗具备了系统性的认识,并在乳痈临床治疗中总结出疏肝解郁和清热解毒的主要治则。蒲公英作为一种药食同源的中药,其根、茎、叶和花含有多种活性成分,蒲公英及其配伍处方在奶牛乳痈的临床治疗中发挥了抗菌、消炎、提高免疫等作用。论文基于中医辩证论治的思想对奶牛乳痈病因及病症进行系统整理,并对中药蒲公英防治乳痈的相关研究进展进行总结,为中医药防治奶牛乳痈的相关研究奠定基础。

10批金银花有效成分的高效液相色谱测定

【目的】用高效液相色谱建立金银花中有效成分含量的检测方法。【方法】采用梯度洗脱方法,对金银花75%甲醇提取液中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、芦丁和木犀草苷8种成分的含量进行研究。【结果】8种成分在各自范围内线性关系均良好(R^(2)>0.9990);平均回收率为98.98%~102.84%(n=6);相对标准偏差为0.90%~4.11%。10批金银花样品均表现为绿原酸含量最高,含量为26.93~31.90 mg/g,且8种成分含量的RSD均符合标准。【结论】该方法简单稳定,适合金银花中有效成分的定量测定。

天然植物源黄酮类化合物作为畜禽饲料添加剂的开发应用研究进展

良好的饲料质量对于畜禽的生长和健康至关重要。全球对食品安全和环境保护的关注日益增加,安全绿色的饲料添加剂能够帮助减少抗生素、激素和化学药物等有害物质在畜禽产品中的使用,提高食品的质量和安全性,同时降低环境污染。开发高效、安全、多来源、精准应用的植物源饲料添加剂是目前畜牧行业的首要问题之一。天然草本植物含有丰富的黄酮类化合物,广泛存在于植物的皮、根、茎、叶、花、果实和种子等部位。植物源黄酮类化合物具有抗菌、抗毒素、抗氧化、抗炎等多种生物活性,具有提高畜禽生产性能的潜在开发价值。本文综述了植物源黄酮类化合物的种类和结构分类、生物活性及其作为饲料添加剂在畜禽养殖中的应用,旨在为不同天然植物源黄酮类化合物作为畜禽饲料添加剂的开发及精准应用提供参考。

非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的功能研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性出血性猪传染病,自2018年传入我国以来,使我国生猪养殖业规模急剧减少,并对社会经济造成了巨大影响。由于非洲猪瘟病毒过于复杂,使疫病防治成为难点,目前尚无有效防控疫苗及治疗药物,其中由E183L基因编码的p54蛋白参与病毒组装、诱导细胞凋亡及中和抗体等过程,并且是血清学检测诊断技术与疫苗免疫研究方面的重要靶点之一,此外,p54基因型可作为辅助指标,对追踪病毒演变过程有着重要意义。因此,通过分析p54蛋白在非洲猪瘟病毒感染过程中的作用,为阐明非洲猪瘟病毒致病机制、探索非洲猪瘟疫病防控方法及疫苗研发等方面提供参考。

基于高效液相色谱法的金银花指纹图谱研究

【目的】旨在建立金银花高效液相色谱指纹图谱方法,并将其应用于不同批次的金银花样品检测。【方法】色谱条件:YMC-Pack ODS-A C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.6%乙酸(0~30 min,92%~72%)和乙腈(0~30 min,8%~28%),梯度洗脱,检测波长330 nm;流速1.0 mL/min;色谱柱温度25℃。方法学考察合格后,检测14批金银花样品,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立指纹图谱,进行相似度评价。用SPSS 20.0软件进行聚类分析和主成分分析。【结果】建立金银花的高效液相色谱指纹图谱,14批金银花样品的相似度在0.971~1.000之间,共标定出11个共有峰。通过对照品指认其中的8个,分别为异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁和木犀草苷。14批金银花共有峰峰面积占总峰面积的平均值为96.31%,RSD为0.47%。聚类分析将14批金银花样品分为4个,但主成分分析后缩减为3个,其中主成分1包括异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和2个未知成分,主成分2仅包括1个未知成分,主成分3则包括芦丁和木犀草苷。【结论】该方法快速可靠,稳定性和重复性好,可用于金银花的质量控制检测。

壶瓶碎米荠用于蛋鸡饲料添加剂的研究进展

功能性饲料添加剂有利于改善蛋鸡生产性能及蛋品质,被越来越多地应用于集约化养殖过程,而抗生素作为添加剂长期应用导致药物在产品中残留及细菌耐药性等问题。随着减抗替抗政策的实施,开发天然中草药作为畜禽饲料添加剂受到广泛关注。壶瓶碎米荠的有效成分为硒蛋白、黄酮类、多糖类、氨基酸和维生素等化合物,具有抗氧化、降血糖、抗炎止痛、抗菌、抗癌、提高机体免疫力以及改善肠道菌群等功能,作为富硒饲料添加剂可以显著提高蛋鸡的生产性能。本文通过对壶瓶碎米荠的有效成分和功能进行总结分析,为壶瓶碎米荠在蛋鸡饲料添加剂的进一步研究及大规模应用提供参考依据。

木香薷挥发油对金黄葡萄球菌的抑制作用

【目的】旨在开发天然植物木香薷植株的药用价值,为木香薷挥发油的抗菌机制研究及替抗产品的开发奠定基础。【方法】水蒸汽蒸馏法提取木香薷挥发油,气相色谱-质谱联用法分析木香薷挥发油的主要活性成分,琼脂扩散法检测其对金黄色葡萄球菌的抑菌效果;对金黄色葡萄球菌感染的小鼠伤口模型进行为期7 d的治疗,对伤口皮肤组织进行HE染色,评价其抗炎作用。【结果】从木香薷植株中提取木香薷挥发油的平均得率为0.146%,其主要活性成分分别为邻伞花烃、对伞花烃、苯乙酮、环己基乙酸、芳樟醇、萜品烯、β-石竹烯、α-石竹烯和石竹素等9种;木香薷挥发油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为0.992 cm;对小鼠伤口治疗,其愈合率达到95%,伤口皮肤组织呈现出较低的炎性细胞浸润、充血和水肿程度。【结论】木香薷挥发油主要由环己基乙酸、β-石竹烯及伞花烃等9种成分组成,对金黄色葡萄球菌引起的创口感染具有一定的抑菌抗炎作用。

猪链球菌耐药现状分析及感染防控措施

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)感染长期困扰我国养猪业的健康和可持续性发展,尤其耐药性菌株的出现阻断原本的链球菌病防治策略。针对近年来国内外S.suis的耐药性流行情况的总结,可以为防治S.suis感染提供有效措施。因此,作者首先总结近五年来在国内外多个地区规模化猪场S.suis感染情况(阳性率普遍>40%),其中我国各省市中流行范围最广的是血清2型菌株。随后,作者归纳了猪场中耐药性S.suis流行现状及其感染特点,发现规模化猪场中的耐药性S.suis集中出现在亚洲大陆以及欧洲且多数地区耐药性高达80%以上,以四环素类耐药菌株为主。而我国规模化猪场中耐药性S.suis主要以四环素类和大环内酯类耐药为主。此外,S.suis是人畜共患的病原,可以经呼吸道和血液造成全身感染。最后,针对S.suis菌株变异多的特点,作者提出了精准检测对于防控S.suis感染的重要性并总结了目前常用的快速检测手段。强调以疫苗接种为主的防控手段和联合用药及宿主导向的新型抗菌药物研发的防治措施,为后续S.suis的耐药性菌株感染的防治提供数据支撑。

乳鼠心肌膜微血管内皮细胞的体外培养

目的改进心肌膜微血管内皮细胞的体外培养方法,为进一步研究其结构和功能提供实验数据。方法选取10-15d龄的SD大鼠,采用植块法培养原代心肌膜微血管内皮细胞,在继代培养中通过差速消化和差速贴壁方法、结合倒置显微镜下形态学的观察进行继代培养和纯化,利用免疫细胞化学方法检测第Ⅷ因子相关抗原对培养细胞进行了鉴定。结果成功培养了大鼠心肌膜微血管内皮细胞,细胞呈多边形或鹅卵石状;免疫细胞化学染色第Ⅷ因子相关抗原显阳性。结论改良了心肌膜微血管内皮细胞的体外培养方法,获得了较高纯度的心肌膜微血管内皮细胞,可用于进一步的科学研究。

白头翁汤通过保护微血管内皮细胞的完整性及PMNs迁移杀菌功能的影响

本研究旨在研究白头翁汤(PD)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤的保护作用,从而揭示白头翁汤的药理作用。分别采用水溶性四氮唑(WST^(-1))、乳酸脱氢酶(LDH)、苏木素伊红(HE)和Hoechst33342染色法检测PD和LPS对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)增殖、细胞毒性、细胞连接和细胞核变化的影响;建立中性粒细胞(PMNs)跨RIMVECs迁移的Transwel模型,检测PD对LPS损伤的RIMVECs后PMNs细胞内和细胞外细菌数量的影响。结果显示,LPS(1μg·mL^(-1))致RIMVECs细胞核萎缩、细胞膜损坏,细胞毒性百分比达53.2%;细胞连接破坏导致细胞脱落,脱落率为39.6%。PD(20μg·mL^(-1))对上述损伤有明显的保护作用。在20μg·mL^(-1)PD作用下,LPS诱导的跨内皮迁移的PMNs细胞内外细菌的存活明显减少(P<0.01)。结果揭示PD可以有效保护LPS损伤的RIMVECs从而增强PMNs的杀菌能力,为临床治疗动物细菌性疾病用药提供理论依据。