快速检测生鲜肉中三种食源性致病菌

为同时快速检测生鲜肉中鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌,降低检测成本,制备了特异性单克隆抗体和多克隆抗体,研制出能够同时检测以上3种致病菌的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本试验成功筛选出3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2E3、2E7和2E8,3种单克隆抗体效价均在128×10^6以上,3种多克隆抗体效价均在200×10^6以上。制备的胶体金免疫层析试纸条对鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌的特异性良好,灵敏度均为1×10^4CFU/g。

38%唑醚·啶酰菌悬浮剂在草莓和土壤中的残留及消解动态

为评价38%唑醚·啶酰菌悬浮剂（有效成分质量分数：12.8%吡唑醚菌酯,25.2%啶酰菌胺）在农产品和环境中的安全性,于2015年和2016年在中国北京及山东分别进行了该药剂在草莓及土壤中的残留及消解动态试验,建立了同时测定草莓及土壤中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺残留量的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。样品用乙腈提取,经N-丙基乙二胺（PSA）净化,电喷雾多反应监测模式HPLC-MS/MS检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明：在草莓和土壤中添加0.015～3.0 mg/kg吡唑醚菌酯,平均回收率分别为97%～107%和94%～106%,相对标准偏差（RSD）分别为1.8%～3.9%和2.2%～4.1%,定量限（LOQ）为0.015 mg/kg;添加0.03～6.0 mg/kg啶酰菌胺,平均回收率分别为90%～101%和92%～97%,RSD为4.6%～13%和2.9%～14%,LOQ为0.03 mg/kg。田间试验结果表明,吡唑醚菌酯和啶酰菌胺在草莓和土壤中的消解动态均符合一级动力学方程,在草莓中的半衰期分别为4.8～6.0 d和5.1～11 d,在土壤中为3.4～10.0和3.4～6.0 d。采用38%唑醚·啶酰菌悬浮剂,分别按有效成分228和342 g/hm2于草莓幼果期施药,最多施药4次,采样时间距离最后一次施药的间隔时间为3、5、7 d。吡唑醚菌酯在草莓中的最大残留量为0.13 mg/kg,低于欧盟规定的最大残留限量（MRL）（0.5 mg/kg）;啶酰菌胺在草莓中的最大残留量为0.78 mg/kg,低于中国的MRL值（3.0 mg/kg）。建议38%唑醚·啶酰菌悬浮剂在草莓上的安全间隔期为3 d,试验结果为农药在草莓中的安全使用和农产品的食用安全提供了数据支持。

植物乳杆菌Zhang-LL高密度发酵的研究

本试验旨在通过优化培养条件提高植物乳杆菌Zhang-LL发酵培养液中的菌体浓度,为获得高活菌数的益生菌产品奠定基础。对植物乳杆菌的发酵培养基中的氮源进行单因素筛选,选取501油菜籽蛋白胨作为MRS培养基的替代氮源。基于优化的培养基成分,采用单因素及4因素3水平L9(34)正交试验优化发酵条件,确定最优发酵条件为;501油菜籽蛋白胨含量为3.0%、温度34℃、p H 6.5、接种量7%,发酵罐流加15%Na2CO3,转速为150 r/min;在此优化条件下,发酵液活菌数可达1.07×1010CFU/m L。

散叶生菜多酚的提取工艺优化

【目的】研究散叶生菜多酚超声辅助提取的最佳工艺,并比较不同品种散叶生菜多酚含量的差异。【方法】通过单因素试验确定乙醇体积分数、料液比、超声时间和超声温度的条件,利用正交试验得到散叶生菜提取多酚的最佳工艺,并利用该提取条件测定不同品种散叶生菜多酚的含量。【结果】超声提取散叶生菜多酚的最佳工艺条件为乙醇体积分数75%、料液比1∶10、超声时间60 min、超声温度60℃。在此提取条件下测定5个品种散叶生菜多酚的含量,北紫生1号的多酚含量最高为(1 176±48.5) mg/kg。【结论】得到经济高效的多酚超声提取工艺,可应用于散叶生菜的多酚提取,同时筛选得到多酚含量高的散叶生菜品种。

植物乳杆菌SD26的筛选及对白色念珠菌的抑菌作用

[目的]从泡菜中成功筛选分离出1株乳酸菌并对其抑制白色念珠菌进行初步研究。[方法]采用涂布平板法从四川大凉山农家泡菜中分离筛选出1株乳酸菌,经形态学观察、生理生化试验及16S RNA基因序列对其进行鉴定。测定该筛选菌株对白色念珠菌的抑菌活性大小、生长曲线影响、最小抑菌浓度和细胞形态作用,初步研究其抑菌机理。[结果]菌株SD26为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其对白色念珠菌的抑菌圈直径可达到26 mm,共培养能显著抑制白色念珠菌的生长。该植物乳杆菌SD26对活菌数为3.0×10^(7) CFU/mL的白色念珠菌的最小抑菌活菌数为4.0×10^(8) CFU/mL。电镜观察结果表明该植物乳杆菌SD26能破坏白色念珠菌细胞膜的完整性。[结论]从泡菜中筛选的乳酸菌为植物乳杆菌SD26,其对白色念珠菌的抑菌活性是通过破坏其细胞膜起作用。

冷鲜猪肉中单增李斯特菌快速检测试纸条的初步研制

【目的】建立一种可快速检测单增李斯特菌的胶体金试纸条的制备方法。【方法】用自制的单核增生性李斯特菌作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,之后通过杂交瘤技术进行细胞融合制备出特异性良好的单克隆抗体,并通过双抗夹心ELISA体系筛选出2株稳定且配对最佳的抗体,利用胶体金免疫层析技术组装试纸条并分析其特性。【结果】筛选出的2株单抗命名为3B7、5C9,测得其灵敏度均为10~4 CFU/mL,抗体的最适pH值是8.0,最佳抗体标记是24μg,试纸条的灵敏度为10~6 CFU/mL且特异性良好。【结论】初步制备出可快速、准确检测冷鲜猪肉中单增李斯特菌的试纸条。

冷冻脱脂HPLC测定食用植物油中4种多环芳烃

【目的】针对食用油中4种多环芳烃(PAH4),建立一种快速,高效,低成本的多环芳烃检测方法。【方法】食用油样品使用乙腈-水(15+1)混合溶液提取,冷冻凝固脂肪,转移上清液并旋蒸至干后1 mL乙腈复溶,高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)进行检测,外标法定量。【结果】方法在1~100μg/L的验证浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9997),检出限、定量限分别为0.06~0.32μg/kg和0.19~1.07μg/kg。在10、20和50μg/kg三水平的加标回收率为77.09%~96.00%,相对标准偏差为3.65%~11.75%(n=6)。【结论】该方法样品前处理简单、成本低,检出限低,有可接受的准确度,可用于食用植物油中PAH4的测定。

新型农业经济发展背景下线下菜市场困境分析与对策

当前,新兴售菜模式“云买菜”深入人们的生活,同时线下菜市场却受到了一定的冲击。以大学生和菜贩为调研对象,深入分析其对线上线下买菜的看法发现,不同年级对线上线下买菜态度无明显差异;关于线上平台冲击线下菜贩趋于垄断,19.44%的样本表示很希望如此,44.51%的样本表示能接受;关于选择线上购菜的原因,消费者最看重“产品质量好、配送快购买方便、服务到位”;关于选择线下购菜的原因,48.31%的样本是享受买菜的乐趣,11.91%的样本无线上购菜条件。同时,实地了解了5位菜贩的卖菜现状,访谈了其对“云买菜”的看法与建议。最后,从建立合理的监管制度、保证菜类的质量安全、优化消费者买菜体验、共建现代化“买菜”模式等方面提出了促进线上线下售菜、买菜有序发展的对策建议。

植物乳杆菌素BM-1对大肠杆菌抑菌活性的研究

【目的】探究植物乳杆菌素BM-1对大肠杆菌的抑菌活性。【方法】通过管碟法检测植物乳杆菌素BM-1对12株大肠杆菌的抑菌活性,选取不同敏感型大肠杆菌5株,对大肠杆菌生长曲线、活菌数、生物膜的形成进行测定,并采用实时荧光定量PCR方法测定大肠杆菌中细菌素受体基因的表达。【结果】生长曲线、活菌数、生物膜的形成试验结果显示,大肠杆菌CGMCC1.8723对植物乳杆菌素BM-1敏感性最强;实时荧光定量PCR显示植物乳杆菌素BM-1显著影响大肠杆菌甘露糖磷酸转移酶系统编码基因的表达。【结论】植物乳杆菌素BM-1对大肠杆菌表现出不同水平的抑菌活性。

BasS/BasR双组分系统调控大肠杆菌对植物乳杆菌素BM-1敏感性研究

[目的]探究BasS/BasR双组分系统调控大肠杆菌对植物乳杆菌素BM-1敏感性的影响。[方法]通过免疫共沉淀技术筛选大肠杆菌中与植物乳杆菌素BM-1相互作用的互作蛋白;测定植物乳杆菌素BM-1处理下互作蛋白基因突变大肠杆菌的活菌数和电导率变化,分析其对植物乳杆菌素BM-1敏感性变化;并采用实时荧光定量PCR方法测定基因突变体大肠杆菌细胞膜上相关基因表达情况。[结果]筛选并鉴定出大肠杆菌中与植物乳杆菌素BM-1互作的蛋白为BasR蛋白,分别敲除basr基因和BasS/BasR双组分系统相关的bass基因后的大肠杆菌对植物乳杆菌素BM-1敏感性上升,但电导率无显著变化;实时荧光定量PCR显示BasS/BasR双组分系统缺失显著降低大肠杆菌中与细胞膜相关的基因dgka、mlaf、eco的转录水平。[结论]大肠杆菌BasS/BasR双组分系统缺失提高大肠杆菌对植物乳杆菌素BM-1敏感性,其机制可能是下调菌体细胞膜相关基因表达、降低细胞膜稳定性。

植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体的制备

【目的】制备植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。【方法】合成植物乳杆菌素BM-1蛋白并制备偶联抗原,免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并筛选阳性杂交瘤细胞。筛选得到阳性杂交瘤细胞后,进行小鼠腹水制备,并纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。【结果】植物乳杆菌素BM-1人工抗原免疫小鼠后,通过细胞融合筛选得到2株能稳定分泌植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名E5、E9,免疫球蛋白亚型均为IgM类。杂交瘤细胞E5诱发小鼠腹水后,经酶联免疫吸附试验检测腹水滴度为1∶212600。纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体为13.2 mg/mL,抗体纯度达到92%。经蛋白电泳检测纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体完整性好。【结论】制备得到高活性、高纯度的植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。

动物双歧杆菌A12的肠道动态分布规律及其对便秘缓解效果研究

[目的]检测动物双歧杆菌A12的肠道动态分布规律及其对小鼠便秘的缓解效果。[方法]采用大鼠动物模型,分别一次灌胃和7 d连续灌胃2.5×10^(9) CFU动物双歧杆菌A12活菌细胞,不同时间点收集肠道内容物,利用菌株特异性引物,应用叠氮溴化丙锭与聚合酶链式反应结合方法定量检测动物双歧杆菌A12在肠道各部位的存活数量;进一步采用小鼠便秘模型,评价动物双歧杆菌A12对便秘小鼠的排便及小肠蠕动情况的改善效果。[结果]一次灌服,动物双歧杆菌A12在胃、回肠、结肠和直肠的排空时间分别为6、24、36和48 h。连续7 d灌服,灌服结束7 d后大鼠盲肠和结肠均可检测到动物双歧杆菌A12活菌细胞,14 d后低于检出限;此外,动物双歧杆菌A12活菌细胞可以显著提高便秘小鼠的排便质量、数量、含水率,及其小肠推进率。[结论]动物双歧杆菌A12可通过胃肠道并在肠道内有至少7 d的留存能力,可以显著缓解便秘症状。

LC-MS/MS检测豆芽中的4种植物生长调节剂

【目的】建立豆芽中4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、6-苄基腺嘌呤(6-BAP)、赤霉素(GAs)和2,4-滴(2,4-D)等4种典型植物生长调节剂(PGRs)的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。【方法】豆芽样品经均质、乙腈提取、盐析和稀释后,液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)多反应监测(MRM)模式检测,基质标准曲线法定量。【结果】检测方法线性良好,R;>0.995,检出限(LOD)为0.07~5.62μg/kg,定量限为0.25~18.74μg/kg,加标回收率为73.81%~109.57%,相对标准偏差为3.71%~16.88%;对50个样本的实际检测显示,6-BAP检出率为88%,但含量小于LOQ,其他PGRs未检出。【结论】该方法样品处理简单,能够满足豆芽中4种典型PGRs监测的需要。

能量色散X射线荧光光谱法快速检测配方乳粉中的铁和锌

[目的]建立能量色散X射线荧光(ED-XRF)光谱快速检测配方乳粉中铁和锌的新方法。[方法]乳粉样品用70~100°C去离子水调成浆状,经ED-XFR扫描,标准加入法进行定量。[结果]在考察的浓度范围内,方法线性良好,R2>0.999,铁、锌的定量下限分别为5.90 mg/kg和3.43 mg/kg,加标回收率分别为98.88%~102.7%和99.66%~102.9%,相对标准偏差分别0.38%~1.12%和0.22%~0.75%。[结论]该方法样品处理简单,定量快速、准确,为使用ED-XRF光谱技术进行配方乳粉的质量控制与监测提供了有价值的借鉴。

发酵葡萄籽粕冻干粉工艺优化及产品开发

【目的】优化葡萄籽粕发酵液冻干保护剂配方,以发酵葡萄籽冻干粉为原料开发乳酸菌发酵葡萄籽功能性含片,为葡萄酒副产物的综合利用提供理论依据及实践基础。【方法】以葡萄籽粕发酵液为原料,经单因素试验筛选冻干保护剂基质与保护剂因子,以正交试验设计确定最佳冻干保护剂配方,制备发酵葡萄籽粕冻干粉。在此基础上,以发酵葡萄籽粕冻干粉为主要原料,通过模糊映射评价矩阵进行感官评价,优化并建立发酵葡萄籽粕咀嚼片最佳配方。【结果】葡萄籽粕发酵液冻干保护剂配方为:脱脂乳粉5%,山梨醇1.5%,聚葡萄糖2%,海藻糖3%,与发酵液比例为1∶1,乳酸菌冻干保护率为84.5%,发酵葡萄籽粕冻干粉的水分活度为0.028±0.002。发酵葡萄籽粕咀嚼片的最优配方为:发酵葡萄籽粕冻干粉添加量30%,赤藓糖醇添加量为20%、微晶纤维素添加量为20%、麦芽糊精添加量为17.5%、葡萄果粉添加量为10%、柠檬酸添加量为1.5%、硬质酸镁添加量为1%,产品感官评分为83.7,水分活度为0.119±0.002,乳酸菌活菌数为2.02×10^(7)CFU/g,其他理化指标均符合要求。【结论】筛选和优化的冻干保护剂可有效保持发酵葡萄籽粕冻干粉中乳酸菌的活菌数,开发出的发酵葡萄籽粕咀嚼片感官品质良好,水分活度较低。

能量色散X射线荧光光谱快速检测干木耳中的铁

建立能量色散X射线荧光(EDXRF)光谱法快速检测干木耳中铁的新方法。将干木耳样品粉碎,装入样品杯,经EDXRF扫描,通过铁的Kα荧光谱线进行识别,外标法进行定量。结果显示,在考察质量分数范围(20~310mg/100 g)内,方法线性良好(R^(2)=0.999 4),定量下限为1.73 mg/100 g,加标回收率为98.71%~101.4%,相对标准偏差为0.28%~1.07%。该方法简便、快速、无污染、定量可靠,能满足木耳质量评价中铁含量快速检测的需要。