发酵法转化乙二醇制备乙醇酸

研究了以乙二醇为底物,利用氧化葡萄糖酸杆菌发酵法制备乙醇酸的工艺过程。研究结果表明,当乙二醇浓度为80 g/L,添加40 g/L山梨醇为外加碳源促进菌体生长,以1.0 mol/L的氢氧化钠与氨水混合液为中和剂,控制过程的pH值为5.5,是最佳的发酵条件。经过40 h发酵,乙醇酸产量为97.4 g/L,乙醇酸得率达到96.8%。该方法为生物法生产乙醇酸打下了基础。

高效毛细管电泳法检测橘皮中橙皮苷的含量

应用毛细管电泳法对橘皮中橙皮苷的含量进行了检测,研究了缓冲液的种类、缓冲液的浓度、缓冲液的pH值以及分离电压等对橙皮苷测定的影响。在pH8.0的150 mmol/L硼砂缓冲液、12 kV分离电压下,橙皮苷的测定效果最佳。毛细管电泳法测定橙皮苷的最低检测限为1.25μg/mL,加样回收率是99.75%,相对标准误差是1.98%。

绿色屋顶技术控制城市面源污染应用研究进展

应用绿色屋顶技术控制城市面源污染在欧美国家已得到广泛认同和应用,但在国内尚处于起步阶段.根据国内外最近几年的研究情况,从绿色屋顶消减暴雨径流、绿色屋顶径流水质、绿色屋顶构建方法等方面详细介绍了绿色屋顶技术在控制城市面源污染中的应用研究情况.研究结果表明,建立绿色屋顶暴雨径流消减量与影响因子的映射关系仍需要大量的、长期的研究;植物生长介质的理化性质是影响绿色屋顶径流水质的关键.在国内构建绿色屋顶,应遵循构建目的多元化的原则,逐步建立起适合国内国情的新的绿色屋顶构建导则,其中,植物生长基质搭配方式和植物选取是需要重点明确的问题.

基于参考实验室网络定值的人血清样本量值传递效果评价

目的研究基于参考实验室网络定值的人血清样本对改进临床实验室丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、α-淀粉酶(Amy)、碱性磷酸酶(ALP)等7个酶学指标量值传递的效果。方法依托华北、华南、华东、西南4个区域的5家参考实验室辐射区域内的各级医疗机构,建立相应的常规实验室量值传递/溯源网络;北京航天总医院提供互换性良好、具有标准物质特性的冰冻人血清样品(校准品、评估样品1、评估样品2),由4个区域5家参考实验室联合赋值;将样品发送至全国48家实验室,各实验室按各自的标准操作规程先测量2个评价样品,再用提供的冰冻人血清样品作为校准品校准厂家系统后再次测量2个评价样品,依据WS/T 403-2012卫生行业标准判断各实验室测量结果正确度的变化,ALT、AST观察结果一致性的变化。结果 Amy、ALP、GGT、CK、LDH的校准品、样品1及样品2网络定值结果分别为138.7 U/L、278.5 U/L、68.3 U/L,265.3 U/L、94.5 U/L、134.4 U/L,195.8 U/L、89.0 U/L、158.9 U/L,393.7U/L、260.0 U/L、645.3 U/L,302.0 U/L、250.0 U/L、452.7 U/L;常规测量系统Amy、ALP、GGT量值传递前样品1及样品2满足WS/T 403-2012偏移要求的百分率分别为65.9%、61.0%,76.6%、78.7%,66.7%、70.8%,量值传递后分别为89.2%、83.8%,86.7%、80.0%,85.4%、91.7%,CK、LDH量值传递前样品2满足行标要求的百分率为64.6%、58.3%,量值传递后为93.5%、84.8%;ALT、AST实验室常规测量系统量值传递前后一致性:量值传递前样品1及样品2为12.9%、11.3%,10.2%、8.9%,量值传递后为9.3%、8.2%,5.6%、5.9%。结论基于参考实验室网络定值人血清样本建立的校准常规系统量值传递路径明显提高了我国各级医疗机构临床实验室Amy等7个酶学项目检验结果的可比性,值得进一步推广。

黑曲霉发酵产橙皮苷酶的工艺优化

目的:对黑曲霉WP124发酵产橙皮苷酶的工艺条件进行优化,旨在为利用酶法改造橙皮苷打下基础。方法:采用摇瓶培养,对培养基的成分和培养条件进行了优化。结果:黑曲霉WP124发酵产橙皮苷酶的最佳培养基组成是:蔗糖30g/L,酵母膏20g/L,磷酸二氢钾3g/L,桔皮粉50g/L;最佳培养条件是:起始pH为5.5,培养温度为30℃,摇瓶转速是180r/min。在上述条件下,经过72h的培养,橙皮苷酶酶活达到1 398U/mL。结论:该菌株发酵过程具有较好的工业化应用的前景。

某越野车驾驶员H点的设计及优化

为了能快速地确定95%人体的驾驶员H点位置,采用了整车高度、头部空间及腿部空间等设计目标对95%人体的驾驶员H点进行约束,将该点由一个大区域限制在一个较小的区域内;再依据驾驶员周边环境对驾驶员H点的约束,包括水切高度、转向盘位置和角度、外后视镜布置位置及视野等因素,以及根据满足法规和人机视野等要求,快速准确地确定了95%驾驶员H点位置,极大地缩短了反复设计的时间,提高了工作效率。

抗载脂蛋白A1抗体制备及其在免疫比浊试剂盒中的初步应用

载脂蛋白A1（apolipoprotein A 1,ApoA1）是高密度脂蛋白（HDL）的主要成分,是抗动脉粥样硬化的指标[1].目前ApoA1的检测多采用免疫比浊法[2],即ApoA1与特异的抗体反应形成不溶性的复合物,

脂蛋白(a)单克隆抗体制备与表位分析

目的:解决脂蛋白(a)抗体批间差大,以及试剂盒检测结果不一致的问题。方法:制备脂蛋白(a)单克隆抗体,筛选与Kringle IV-2无反应,且能自身配对的杂交瘤细胞株,并对抗体识别位点与检测特异性进行分析。结果:获得了一株识别Kringle IV-5的单抗,标记为LPa-3,该单抗能够实现自身配对,用LPa-3单抗作为包被抗体与标记抗体初步建立的夹心ELISA方法检测15份血清样品,检测结果与商品试剂盒具有较好的相关性:y=0.190 4 x-0.032 6,R2=0.922。结论:LPa-3单抗能实现自身配对,检测特异性好,是一种优良的体外诊断试剂盒原料,为胶乳增强免疫比浊试剂盒的开发奠定了基础。

血清葡萄糖参考方法的复现及一种避免校准品基质效应的赋值方法

目的根据国际医学检验溯源联合委员会(JCTLM)公布的血清葡萄糖参考测量程序复现血清葡萄糖参考方法,研究不具备互换性的水溶液校准品作为工作校准品时的赋值方法,以此实现对常规测量方法的量值传递。方法通过测定2022年RELA-A、B及有证参考物质SRM965b Level1~4对参考方法的精密度和正确度进行评估。首先,将参考方法测定样本浓度值与常规方法测定样本的信号拟合成直线方程。再把常规方法测定工作校准品的信号值代入方程中计算出工作校准品的浓度,并以样本比对的方式对工作校准品的赋值进行验证。结果葡萄糖标准曲线方程为:Y=0.04963X+0.04793,R^(2)=1.0000;测量样本的不精密度(CV)小于1.5%;测量SRM965b Level1~4偏倚均在±1.5%内;参考方法测定样本的浓度值与常规方法测定样本的信号值拟合方程为Y=500.74X-82.328,R^(2)=0.999。校准后的常规方法与参考方法同时测定49例样本,回归方程为Y=0.9945X+0.023,R^(2)=0.9995。结论复现了血清葡萄糖参考方法;通过以参考方法测定样本的浓度值与常规方法测定样本的信号值拟合成直线方程的方式给工作校准品赋值,避免了因工作校准品互换性差而导致的偏差;可实现常规测量系统血清样本结果的量值溯源,与传统方法相比,该方法减少了赋值过程,提高了常规方法测量结果的准确性。

尿液10项肾损伤标志物检测试剂的性能评价

目的 对尿液10项肾损伤标志物检测试剂进行性能评价,并评估其临床适用性。方法 对北京利德曼公司尿液α_(1)微球蛋白(u-α_(1)MG)、总蛋白(u-TP)、免疫球蛋白G(u-IgG)、微量清蛋白(u-Alb)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(u-NGAL)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(u-CysC)、视黄醇结合蛋白(u-RBP)、β_(2)微球蛋白(u-β_(2)MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(u-NAG)、转铁蛋白(u-Trf)检测试剂盒进行性能评价。正确度和精密度验证参考美国临床和实验室标准协会(CLSI) EP15-A3,验证物质采用ERM-DA470k、ERM-DA471、B2M-NIBSC等参考物质及纯度物质;线性验证参考CLSI EP06;抗干扰能力参考CLSI EP07;不同检测系统间比对参考CLSI EP09。结果 正确度方面,10项标志物检测试剂测定标准物质在低值、中值、高值的偏倚分别为-2.69%~4.67%、-3.60%~3.33%、-2.38%~3.02%;不精密度方面,重复性以不精密度表示,在低值和高值处分别为1.90%~5.43%、0.63%~2.42%,室内不精密度为2.27%~5.63%、1.09%~3.41%,均满足临床要求;10项尿液标志物线性范围在0.06~4.40 mg/L至21.83~2 146.77 mg/L之间。抗干扰方面,u-α_(1)MG、u-Alb、u-β_(2)MG、u-Trf、u-CysC、u-NAG分别在血红蛋白终浓度≤8 g/L、≤8 g/L、≤4 g/L、≤4 g/L、≤2 g/L、≤1g/L时,未受到明显干扰(百分偏差≤±10%),而u-TP、u-IgG、u-RBP、u-NGAL在血红蛋白终浓度≥0.125 g/L时即受干扰。不同检测系统间偏差超出临床允许范围。结论尿液10项肾损伤标志物的正确度、精密度、线性范围和抗血红蛋白干扰能力满足临床需要,不同检测系统间标志物测量结果可比性欠佳。

重组人α1-微球蛋白的毕赤酵母发酵与纯化工艺优化

目的:对肾脏损伤指标蛋白人α1-微球蛋白(alpha 1-microglobulin,A1M)的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵与纯化工艺进行优化,实现高纯度、高亲和性重组A1M的克级制备。方法:利用1 L摇瓶培养体系单因素实验优化A1M发酵最适pH,随后进行5 L规模化高密度发酵,优化关键补料点及发酵时间;根据A1M抗原特性建立蛋白纯化工艺并进行N-糖基化鉴定和纯度鉴定;制备A1M免疫亲和柱并进行载量评估。结果:重组人A1M毕赤酵母摇瓶发酵最适初始pH 6.0,1 L摇瓶培养体系中表达水平达888 mg/L,且糖基化程度相对最低;5 L规模发酵的48~120 h采用溶氧(dissolved oxygen,DO)≥30%反向关联甲醇补料4~6 mL/(h·L),可有效控制DO核心区>20%;发酵48、72和96 h为关键补料点,表达水平为12.5 g/L,发酵58~78 h时空收率可达160~210 mg/(h·L),5 L罐发酵120 h批量达49 g;选用超滤浓缩、阳离子交换层析和脱盐层析柱建立A1M纯化工艺,总收率为18%;A1M抗原亲和柱偶联率达96%,偶联密度为2.46 mg/mL,对A1M绵羊多抗的载量为37 mg/mL。结论:成功建立重组人A1M抗原5 L规模的酵母发酵及纯化工艺,实现高纯度并具有免疫亲和力的A1M抗原的克级制备。

化学发光试剂吖啶酯DMAE-NHS的合成新方法

研发了一种化学发光免疫分析试剂吖啶酯DMAE-NHS的合成新路线。它是以3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸为起始原料,经过5步合成反应,最终得到目标产物吖啶酯DMAE-NHS,各分步中间体及终产品的化学结构和纯度经过LC-MS或~1HNMR分析验证,产品纯度达到98%以上。