化学发光免疫分析技术在微生物检测中的应用

化学发光免疫分析技术凭借其化学发光的高灵敏性和免疫反应的高特异性在微生物快速检测中广泛应用。该文着重叙述了化学发光免疫分析技术核心检测体系在微生物检测中的研究进展,并对其涉及到的样品前处理和检测新方法进行了综述。化学发光免疫分析技术检测微生物用时短、成本低,但特异性识别方法和检测的灵敏度有待提升,新型的发光体系、发光放大方法、可替代抗体的识别分子以及相关的前处理技术是未来研究的重点。

用环介导等温扩增方法检测牛奶中致病微生物

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的基因扩增方法。本试验以牛奶为研究对象,采用LAMP方法检测其中沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157、志贺氏菌和单增李斯特菌,并与国标方法进行比较。结果表明,LAMP方法和国家标准方法检测结果一致,结果符合率为100%,重复性好,灵敏度≤2 CFU/25g,特异性高。LAMP方法可广泛应用于牛奶中致病菌的快速检测。

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。

天鹅蛋中主要致腐微生物的分离与鉴定

在贮藏期间,天鹅蛋容易被环境微生物通过蛋壳表面的气孔侵染而腐败,大大降低其市场价值。该研究从腐败天鹅蛋中分离得到5株细菌,对其进行形态、生理生化特性研究,并结合16s rRNA基因序列分析和系统发育树分析,最终分别鉴定为氧化节杆菌(Arthrobacter oxydansi)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、麦氏弧菌(Vibrio metschnikovii)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)。本研究为天鹅蛋的抗菌防腐贮藏提供了参考。

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线（T线）和质控线（C线）,T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果。试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3~5min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段。

农产品中典型化学污染物精准识别与检测关键技术

中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所王静团队牵头完成的“农产品中典型化学污染物精准识别与检测关键技术”获2019年度国家技术发明奖二等奖。项目成果中对硫磷、毒死蜱、三唑磷、克百威、β-内酰胺类、四环素、头孢类、林可霉素、泰妙菌素等快速检测试剂盒被北京三元食品股份有限公司、黑龙江完达山乳业股份有限公司等上市公司及龙头企业用于15万余份乳制品、果蔬等农产品的日常产品质量监督控制。

快速检测技术在食品安全监管中的应用及发展新方向

食品安全已经成为全民关心的热点问题,如何对食品进行快速、经济、准确的检测对于食品企业健康发展具有重要意义.通过列举食品安全事件案例介绍了食品安全快速检测技术在积极应对食品安全事件所起到的作用,并对快速检测技术的未来发展方向包括免疫胶体金技术与读卡器联用、酶联免疫技术的自动化和多领域化、化学发光免疫分析技术的精准化方面进行了综述,阐明了食品安全快速检测技术在食品安全监管中的重要作用.

兽药残留检测技术研究

从国内外食品安全兽药残留现状、制约食品安全的因素、兽药毒理性分析以及建立具有中国特色的食品安全快速检测体系4个方面论述了兽药残留对食品安全的危害以及应对措施,并对食品安全快速检测技术在未来的发展趋势进行了展望.

安定残留危害及其检测技术研究进展

安定作为一种镇静剂在畜牧业中的应用所导致的药物残留对人类健康危害严重,欧盟、美国、日本和我国等都禁止使用该药物。本文对安定在动物饲料及动物源性食品中的残留危害进行了介绍,并对该药物残留检测技术的进展进行了综述,为相关研究人员进行该药物的检测研究提供参考。

流式细胞仪在检测食品中微生物的应用研究

流式细胞仪（flow cytometer）是流式细胞术的商品化应用,它作为新型高科技仪器,已应用于临床医学、微生物学、海洋、渔业、酿酒、畜牧、体育科学、农业、林业、化工等领域,本文着重介绍了目前流式细胞仪在检测食品中微生物的应用研究。流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）是一项细胞分析技术,不仅能够快速定量分析和分选液流系统中单个细胞或其它生物微粒。

食源性致病微生物阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒的研究

食品安全问题一直是社会各界关注的重点。世界卫生组织曾报道称,食源性疾病是受全球关注的卫生问题,更是影响人类健康的重要因素,而病原微生物感染则是导致食源性疾病发生的主要因素。阪崎肠杆菌在2002年被国际食品微生物标准化委员会(ICMSF)确定为食源性致病菌,如被阪崎肠杆菌感染可能会引起婴幼儿尤其是新生儿患病,如脑膜炎、菌血症及坏死性小肠结肠炎等,更有甚者会引起严重的后遗症或死亡。

动物制品中磺胺类药物残留便捷式检测技术研究

[目的]研究动物制品中磺胺类药物残留的便捷式检测技术。[方法]比较ELISA法、毛细管电泳法、高效液相色谱法检测动物制品中磺胺类药物的残留。[结果]利用ELISA法检测磺胺类药物残留具有操作简便、成本低廉、检测速率快、检测时间短等优点。[结论]ELISA法能更符合快速检测的要求,满足对肉制品中磺胺类药物快速检测。

胶体金免疫层析技术在药物残留检测中的应用

“民以食为天，食以安为先”．生活水平迅速提高的今天，人们的饮食习惯已经从吃饱、吃好阶段过渡到吃安全、吃健康阶段。但食品中药物残留、违禁化合物添加等问题却不断发生．极大地威胁着消费者的生理健康和生命安全，同时也严重打击了我国相关产业的发展。因此．国家对食品安全进行大力整顿．加大监控力度，出台了一系列法律法规．提升国内食品安全环境．重建人们对各种产品的消费信心。

如何用好自检技术保证牛奶安全

奶业的上游产业主要包括畜牧业、饲料业、交通运输业、机械制造业、医药业等，下游产业主要包括食品加工业，并面向最终消费者。由此看出，奶业的上游产业较多，这种特点决定了其容易受到多种因素的影响，行业不确定性因素较多。现阶段，我国小规模散养户仍是生鲜乳生产的主体，其养殖水平低，缺乏安全意识，在牛奶中添加β-内酰胺酶、有害添加物以及饲养中滥用抗生素等情况时有发生。

运用农兽药残留快速检测技朮 为人们提供更加安全的食用农产品

食用农产品是人们赖以生存和发展的基础,涉及种植业、林业、养殖业等,与人们的生活饮食有着密切的联系。基于此,农产品安全问题对人们的健康会产生一定的影响。随着经济水平的不断发展和生活水平的日渐提高,人们对农产品安全也提出了更高的要求,食用农产品中农兽药残留快速检测技术也在不断更新和完善。

放心肉的“试金石”——勤邦生物瘦肉精快速检测三联卡

1肉类安全状况肉类含有丰富的营养，是人类重要的食物源。20世纪80年代中期以来，我国的肉类生产快速增长，到1992年已成为世界肉类生产大国。此后的十几年里，我国在全球肉类生产总量中所占的份额不断上升。我国肉类行业中，大规模的现代生产方式与传统的小生产方式并存，

国产沙门氏菌免疫磁珠的制备及其应用

目的优化免疫磁珠制备条件,获得捕获性能高、成本低的国产沙门氏菌免疫磁珠,为国产沙门氏菌免疫磁珠的产业化制备奠定基础。方法采用亚微米级羧基磁珠及沙门氏菌多克隆抗体,利用碳二亚胺缩合法制备2 mg级免疫磁珠。以目标菌捕获率、磁珠表面抗体偶联率为评价指标,对4种粒径(100、300、500、1000 nm)的磁珠原材料进行筛选;以目标菌捕获率、磁珠表面抗体偶联率、免疫磁珠表面FITC荧光强度为评价指标,对磁珠与抗体不同的投料比(100:1、100:1.5、100:2、100:2.5、100:3)进行优化;同时,对国产沙门氏菌免疫磁珠与进口免疫磁珠(Dynalbeads~?沙门氏菌免疫磁珠、Bac Trace~?沙门氏菌免疫磁珠)的性能进行比较分析,考察了捕获率、免疫磁珠与目标菌的结合情况、特异性捕获能力等,并在实际样品中进行了应用检测。结果以粒径为300 nm的磁珠为原材料制备的免疫磁珠对浓度为10~2 CFU/mL的目标菌的捕获率为99%、抗体偶联率为34.64%,明显高于其他粒径的免疫磁珠;当投料比为100:2(磁珠:抗体)时,制备的免疫磁珠对浓度为10~2 CFU/m L的目标菌的捕获率为100%,偶联率为52.34%,优于其他投料比;针对不同浓度的鼠伤寒沙门氏菌(10~0~10~6 CFU/mL),国产免疫磁珠的捕获率高于进口免疫磁珠(国产:83%~100%;Dynalbeads~?:57%~74%;Bac Trace~?:9%~40%);在25 mL牛奶中添加(11.9±3.7)CFU鼠伤寒沙门氏标准菌株,国产沙门氏菌免疫磁珠的检出率高于进口免疫磁珠(国产:100%;Dynalbeads~?:70%;Bac Trace~?:40%)。结论优化了制备条件后所制备的国产沙门氏菌免疫磁珠的捕获能力强、价格低、能够实现大体积实际样品中痕量目标菌的100%检出,具有广阔的应用前景,本研究为沙门氏菌免疫磁珠的国产化应用提供了科学数据。

4种方法建立大鼠糖性白内障模型的比较研究

试验旨在研究D-半乳糖饲喂及D-半乳糖、葡萄糖和链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射4种方法能否成功建立大鼠糖性白内障模型,并在此基础上探讨各种方法的优缺点,以期找出一种快速、有效、安全性高、实用性及可重复性强的大鼠糖性白内障模型建立方法,并为犬糖性白内障模型建立提供理论依据。本试验采用D-半乳糖饲喂(日粮30%)及50%D-半乳糖(15g/kg)、50%葡萄糖(15g/kg)和STZ(70mg/kg)腹腔注射4种方法对同日龄大鼠进行模型建立,试验周期为30d,给药48h后尾静脉穿刺测定血糖,72h后用裂隙灯检查晶状体变化情况,每隔3d测定体重变化,同时每天测定饮水量及摄食量。试验结果显示,D-半乳糖饲喂组晶状体无异常变化;D-半乳糖腹腔注射组和葡萄糖腹腔注射组血糖始终未达到糖尿病血糖标准,但均在第3天可见白内障发生;STZ腹腔注射组在72h动物出现糖尿病症状,4～5周诱发白内障。结果表明,D-半乳糖饲喂不能使大鼠产生白内障;D-半乳糖腹腔注射及葡萄糖腹腔注射仅需3d即可诱发白内障,快速且成模率高,适合进行白内障药物延缓效应的研究;STZ腹腔注射需4～5周建立糖性白内障模型,因而更适用于研究糖性白内障的发病机制。

猪β_2肾上腺素能受体基因克隆及穿梭表达质粒的构建

【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选后提取克隆质粒并对其作PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析。然后对所获得的基因及编码的氨基酸序列进行在线BLAST分析、系统进化树构建和疏水性分析。为了提高受体蛋白的表达量及受体配体间的亲和力,对该克隆基因作N端截短186个核苷酸改造;为使表达蛋白C端携带6×His标签,对克隆基因C端进行去除终止子改造。将改造后的克隆基因分别插入pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体,连接产物转入NovaBlue感受态细胞,经Amp抗性筛选,挑取单菌落提取质粒并进行鉴定。【结果】经分光光度计检测及琼脂糖凝胶电泳分析,所提猪肝细胞总RNA的纯度、浓度及完整性可满足后续试验要求。RT-PCR产物电泳结果显示,在1 200 bp左右出现1条特异性条带,与预期结果一致。克隆质粒pMD-18T-β2AR经鉴定,证实为阳性重组质粒。测序结果显示,所得猪β2AR基因cDNA序列全长1 257 bp,编码418个氨基酸。该序列已提交至GenBank,登录号为KF023571.1。Compute pI/Mw在线软件预测该蛋白分子质量为46.73 kD。与已发表的猪β2AR(AF000134)相比,基因序列一致性为99.68%,4处发生碱基突变,编码的氨基酸序列一致性为99.28%,3处发生突变,且配体与受体结合位点处的氨基酸均得到正确克隆。在线BLAST分析表明,猪与其它物种的β2AR及氨基酸序列一致性均在80%以上,具有较高的同源性。由系统进化树分析可知,所克隆的猪β2AR与领西猯Pecan tajacu(JN 633666.1)的亲缘性较近,与大仓鼠Tscherskia triton(AY683091.1)和草原田鼠Microtus ochrogaster(XM 005356183.1)的亲缘性较远。氨基酸疏水性分析表明,该受体蛋白N端以疏水性氨基酸为主,C端以亲水性氨基酸为主。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析证明,成功构建重组穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418。【结论】所获克隆基因与已发表猪β2AR高度一致,且活性位点处的氨基酸均得到正确克隆。此外,pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体适宜用作大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子,是研究目标基因在不同表达系统表达效果的良好材料。本文所构建的穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418均可用于以上3种表达系统中β2AR蛋白的表达纯化研究。

连翘酯苷在体外对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响(英文)

[目的]探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。[方法]将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg/ml),采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。[结果]与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量(P<0.05);而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。[结论]连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney cells,CEKs)上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。