基金Supported by the National Programs for High Technology Research and Development of China(2006AA02Z250)the Key Project of China NationalPrograms for Fundamental Research and Development of the Ministry of Science and Technology of China(2004CB719606)~~
文摘【目的】了解野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)8004 GDSL(蛋白序列中甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和亮氨酸特征序列)酯酶的性质。【方法】利用PCR方法扩增Xcc_ est及其不同结构域的基因,这些基因以组氨酸标签融合蛋白的形式在大肠杆菌中获得表达。融合蛋白通过镍亲和色谱纯化。【结果】部分纯化的Xcc_ est在催化对硝基苯丁酸酯时,最适pH值为8.0 ,最适温度为52℃。Xcc_ est对于对硝基苯丁酸酯的Km值和Vmax值分别是47.6 ±4.6μmol/L,和67.6 ±7.8 U/mg,Xcc_ est的酯酶结构域(Xcc_ est N1-334)对于同一底物的Km值和Vmax值分别是469.4 ±9.8μmol/L和2.5 ±0.9 U/mg。Xcc_ est的成熟结构域(Xcc_ est N26-606)可以获得成功复性,但是成熟酯酶结构域(Xcc_ est N26-334)不能获得复性。复性后的Xcc_ est N26-606底物谱较广,在室温下具有较高稳定性。【结论】复性的成熟结构域蛋白(Xcc_ est N26-606)具有一定的生物转化应用前景。