天坛生物疫苗生产企业经营资金循环问题与对策研究

在这个现代化、飞速发展、复杂多变、竞争激烈的新时代，大型疫苗企业要想求得生存和发展，必须要与时俱进、强化企业资金管理意识、加速企业资金周转速度。保证企业资金循环的连续性，对于企业正常生产经营，提高经济效益存在重大实践意义。企业资金的规划、管理应处于企业经营管理的核心位置，资金管理是保证企业未来持续、正常的生产经营所必需的能量源泉、是企业经营管理的重中之重，特别是对于大型国有疫苗生产企业，在外国进口疫苗大量进驻的前提下，企业自身组织规模大、结构复杂、本身就负担重、问题多，则现金流对于企业的生存、发展、壮大则尤为重要。未来企业规模的扩大、市场占有率的提高等都需要资金基础，实践证明资金的管理、控制、预测已成为企业经营的重中之重。本文在分析疫苗生产企业经营资金循环的重要性基础上，深入探讨了当前疫苗生产企业经营资金循环存在的问题，并从改善外部经营环境、加强企业内部管理、提高疫苗研发技术水平、提高产销率、加速资金回笼、降低制品积压库存、等方式提出了提高资金使用效率的对策措施。

医药企业生产执行系统(MES)网络安全规划设计

通过分析生物医药企业生产过程执行系统(MES)功能及通讯要求,结合国家现有工业控制系统信息安全标准,设计一套安全、稳定、可靠的工控网络安全体系。满足生产过程执行系统(MES)的安全要求,并为企业下一步实现工业4.0打下良好的基础。

篮式生物反应器培养Sabin株脊髓灰质炎病毒工艺的建立

目的建立篮式生物反应器培养Sabin株脊髓灰质炎病毒的工艺。方法对细胞接种密度、载体装量、培养基种类、病毒培养温度、pH、MOI等培养条件进行优化,通过测定葡萄糖消耗量、病毒滴度、宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量,分析并确定脊髓灰质炎病毒的最适培养工艺参数。结果载体装量400~600 g,细胞接种密度1×10^6个/mL时,葡萄糖消耗量最大,平台期持续2~3 d,此时细胞接种病毒最佳。以0. 01~0. 3 MOI接种Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒,采用199培养基于(33±0. 5)℃,pH 7. 4~7. 6条件下培养时,病毒滴度最高,HCP残留量较低,为最适培养工艺。结论初步建立了基于篮式生物反应器的脊髓灰质炎病毒高效制备工艺。

企业材料核算及管理相关问题探讨

在企业生产过程的各项成本组成中,最重要的一个环节当属材料成本,特别是对建筑施工企业与制造企业,怎样做好企业材料的核算与管理工作,强化物资管理水平,对于加快企业资金运转、控制成本价格、提高纯收益有着决定性意义。本文便对企业材料核算及管理有关问题展开探讨,提出针对性建议,旨在为提高企业受益出谋划策,使其市场竞争力得以提高。

医药园区安防系统的实现与使用探讨

在园区建设初期就要进行完整的、系统的规划,通过覆盖园区的统一网络平台,利用网络的扩展性和带宽、性能的冗余,进行各种安防系统的实现;通过长期使用经验来探讨原有安防系统优缺点及适合本企业的安防系统类型。

脊髓灰质炎灭活疫苗数字化车间设计与应用

依据数字化疫苗车间建设指引的要求,通过对现有脊髓灰质炎灭活疫苗(简称:IPV)全部车间工艺、公用工程设备建立SCADA、PCS系统,建立整个车间管理级MES系统,实现电子批记录、车间绩效、自动排产、工单分解、过程追溯等功能,并改造现有MRP、WMS、QMS系统同时集成其输出数据到MES系统,形成以MES系统为核心的数字化车间。

除菌过滤器在疫苗制备领域的作用及前景

随着医药领域的科技水平不断提升,过滤除菌技术在生物制药领域得到了广泛应用,主要结合相关疫苗的特性去选用适宜的除菌过滤器,确保疫苗能够达到无菌水平。除菌过滤器作为疫苗制备领域中保证疫苗无菌的关键保障,文章则主要针对于此,对除菌过滤器的疫苗原理、类型及其在疫苗制备领域的作用和发展前景展开分析。

细胞工厂在麻腮风系列疫苗生产中的应用

目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15 L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照《中国药典》三部(2015版)方法进行病毒滴度检测。结果细胞工厂制备的麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液滴度分别为大于5.2、6.1和5.7 lgCCID_(50)/mL,高于转瓶工艺,且符合《中国药典》三部(2015版)相关规定;1个40层细胞工厂制备的病毒原液量相当于1个转瓶的4至8倍,产量较高。细胞工厂制备的多批次麻腮风各单价及联合疫苗的病毒滴度均符合《中国药典》三部(2015版)相关标准,且病毒滴度热稳定性下降均不超过1个lg。结论利用细胞工厂制备麻腮风各单价及联合疫苗的工艺稳定,重复性好,质量可控,可用于规模化生产。

新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响

目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率。根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度。结果SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5×10~6个/mL,活细胞数不低于2.1×10~6个/mL,细胞存活率不低于60%;2BS细胞总细胞数不低于7.0×10~5个/mL,活细胞数不低于4.2×10~5个/mL,细胞存活率不低于60%。腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为6.28 lgCCID_(50)/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为5.8 lgCCID_(50)/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致。结论新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小。

流感病毒裂解疫苗接种人体后的安全性和免疫原性研究

目的评价流感病毒裂解疫苗经工艺改进后的安全性和免疫原性。方法采用非劣效性研究，选择3～〈18岁受试者240人随机分为2组，接种试验疫苗与进口疫苗，比较其安全性和免疫原性；另选择18～〈60岁受试者360人随机分3组，接种3个连续批次试验疫苗，评价试验疫苗批间免疫效果的一致性。结果试验疫苗接种后不良反应发生率为4.17%，与进口疫苗比较，两组反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）；试验疫苗和进口疫苗各型别抗体阳转率、免疫后血凝抑制（HI）抗体几何平均滴度（GMT）和保护率差异无统计学意义（P〉0.05）；3个连续批次试验疫苗各型别抗体阳转率和免疫后HI抗体GMT差异无统计学意义（P〉0.05）。结论经工艺改进后的试验疫苗安全性和免疫原性良好，批间免疫效果稳定。

疫苗用氢氧化铝佐剂的质量研究

目的 建立与国际标准一致的氢氧化铝佐剂的质量标准。方法 制备10批疫苗用氢氧化铝佐剂，按照中国药典2015年版进行外观、氯化钠含量、渗透压摩尔浓度、氢氧化铝含量、pH值的检测。参照欧洲药典第8版开展溶解度和内毒素含量检测，鉴别试验、沉降试验、无菌检查、牛血清白蛋白吸附力试验以及氯化物、硫酸盐、硝酸盐、铵盐、铁盐、砷盐、重金属等7项杂质13个检测项目的测定。参照丹麦铝佐剂对粒径、比表面积、等电点、黏度和抗原吸附率进行检测。对检定结果进行统计分析，初步确定与欧洲药典相关联的质量标准。结果 10批氢氧化铝佐剂的外观、无菌试验、内毒素含量、溶解度、鉴别试验、沉降试验、牛血清白蛋白吸附力、杂质和抗原吸附率的检测结果均合格。佐剂的氯化钠含量均值为1.01%，渗透压摩尔浓度均值为309 mOsmol/kg，氢氧化铝含量均值为4.7 mg/ml；佐剂灭菌前、后的pH值均值分别为6.3、5.8；佐剂的粒径DV50全部〈10 μm；平均比表面积为1 386 m^2/kg，等电点为10.3，黏度为1.2 mPa·s。检测结果均符合质控合格范围。结论 初步建立了符合欧洲药典第8版的氢氧化铝佐剂质量控制标准。

2种去除Vero细胞DNA工艺的研究

目的建立并比较2种去除Sabin株脊髓灰质炎疫苗Vero细胞DNA工艺方法。方法采用不同终浓度的鱼精蛋白和非限制性核酸内切酶在不同条件下分别处理Sabin株脊髓灰质炎病毒浓缩液,采用荧光染色法检测宿主细胞DNA、酶联免疫法检测D抗原和宿主残余蛋白含量。结果鱼精蛋白的终浓度为1 g/L^1.5 g/L,病毒浓缩液中Vero细胞DNA的去除率达98%以上,抗原回收率达85%以上,宿主细胞残余蛋白去除率可达30%左右;非限制性核酸内切酶的终浓度为100 U/ml^150 U/ml,37℃孵育2 h转入2℃~8℃孵育18 h^20 h,病毒浓缩液中Vero细胞DNA的去除率达95%以上,抗原回收率达98%以上,宿主细胞残余蛋白基本无去除。结论 2种工艺均可用于去除Sabin株脊髓灰质炎疫苗中Vero细胞残余DNA,非限制性核酸内切酶法操作更简便快捷。

铝佐剂及佐剂吸附疫苗质量标准的探讨

1926年,Glenny首次以铝盐吸附白喉类毒素,发现其免疫效果远超过液体类毒素,标志着铝佐剂出现,佐剂疫苗诞生。随着生物技术的迅速发展,重组亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到开发,这些疫苗抗原纯度高,相对分子质量小,疫苗的不良反应少,而这些抗原的免疫原性普遍较弱。为提高抗原的有效性,须在抗原中添加佐剂,以增强其诱导免疫反应能力.

第1代百日咳毒素国家参考品的标定

目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。

《中国药典》水痘减毒活疫苗质量标准浅析

水痘减毒活疫苗系采用水痘-带状疱疹病毒（varicella—herpes zoster virus，VZV）接种人二倍体细胞，经培养，收获病毒，加入适宜稳定剂冻干制成，用于预防由VZV感染引起的急性传染病，目前属于国家免疫规划管理中的二类疫苗。该产品于2000年在我国批准上市，

腮腺炎减毒活疫苗工作代毒种工艺优化

目的优化腮腺炎毒种制备工艺,控制麻腮风联合减毒活疫苗(measles,mumps and rubella combined vaccine,live,MMR)中腮腺炎分型基础滴度和稳定性。方法应用全自动细胞计数仪提高鸡胚活细胞计数精度,确定MOI并按最适MOI制备腮腺炎病毒工作种子批,选取病毒最适收获时间,优化腮腺炎病毒工作种子批制备工艺。采用优化后的毒种连续制备3批次腮腺炎病毒原液,检测原液病毒滴度及由其制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度与(37±1)℃1周热稳定性。结果优化后的毒种制备的腮腺炎病毒原液滴度稳定在6.5～7.0 lg CCID_(50)/m L,较优化前提高了0.5～0.7个log。采用优化后腮腺炎病毒原液制备的MMR中的腮腺炎病毒分型基础滴度在5.2～5.8 lg CCID_(50)/m L,热稳定性在4.8～5.5 lg CCID_(50)/m L;80%的MMR中麻腮风各组分病毒比均能达到1∶>20∶1。结论优化后的腮腺炎病毒工作种子批制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度和稳定性均显著提升。

乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）蛋白质分析

流行性乙型脑炎国际上统称为日本脑炎（Japanese encephalitis）,简称乙脑,是由黄病毒科虫媒病毒——乙脑病毒引起的一种侵害中枢神经系统的传染病.接种乙脑疫苗是预防流行性乙型脑炎的有效措施.目前国内使用的乙脑疫苗有减毒活疫苗和灭活疫苗[1].本文应用液相色谱-电喷雾质谱联用（LC/ ESI-MS）方法就本公司生产的乙型脑炎灭活疫苗（Vero 细胞）蛋白质成分进行了初步分析,以期对该类疫苗的研发及生产有所参考,同时希望能在疫苗类蛋白质成分分析及基因工程疫苗的构建方面提供方法学上的参考.

注射用重组人干扰素β1b规模化分离纯化工艺的建立及其产品质量的检定

目的建立注射用重组人干扰素β1b(recombinant human interferonβ1b,rh IFNβ1b)规模化纯化工艺,并对该工艺制备产品的质量进行检定。方法采用高压均质机对rh IFNβ1b/BL21菌体进行破碎,离心提取包涵体,经有机抽提及酸化沉淀获得粗制rhIFNβ1b;通过Sephacryl S-200和Sephadex G-25层析纯化获得rhIFNβ1b原液,连续生产3批。将原液稀释,加入保护剂,经分装、冻干制备成品。同时对原液及成品的质量进行检定。结果 3批rhIFNβ1b原液蛋白产量可达6~7 g,平均回收率可达15.1%,平均效价为1.1×10~7 IU/mg,HPLC纯度和SDS-PAGE纯度均超过97%,一级序列和二级结构具有良好的一致性。每批rhIFNβ1b原液可制备出20 000~30 000支成品,且各项检定项目均合格。结论建立了rhIFNβ1b规模化分离纯化工艺,制品的产量、纯度及活性均较高,符合rhIFNβ1b工业化生产的要求。

3种中和剂对常用消毒剂在Vero细胞上的中和效果

目的 研究0.5%硫代硫酸钠、10%胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)培养基、10% Letheen肉汤培养基对实验室常用的4种消毒剂的中和效果,为疫苗生产和检定中科学选择中和剂提供依据.方法 取生长良好的Vero细胞接种于96孔培养板,每组8个复孔,置于37℃、5% CO2培养箱培养过夜.将3种中和剂分别与杀孢子剂、0.5%“84”消毒液、酸性苯酚盐、碱性苯酚盐4种消毒剂中和后,接种于单层生长的Vero细胞,显微镜下观察细胞生长情况.结果 0.5%硫代硫酸钠分别与杀孢子剂、0.5%“84”消毒液中和后接种细胞,8孔细胞全部存活;而0.5%硫代硫酸钠分别与酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的中和产物接种细胞后,细胞全部死亡.10% TSB培养基分别与酸性苯酚盐、碱性苯酚盐中和后接种细胞,8孔细胞全部存活;而10% TSB培养基分别与杀孢子剂和0.5%“84”消毒液的中和产物接种细胞后,细胞全部死亡.10% Letheen肉汤培养基接种细胞后,8个孔细胞全部死亡.结论 0.5%硫代硫酸钠可中和杀孢子剂和0.5%“84”消毒液的消毒作用,10% TSB培养基可中和酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的消毒作用.10% Letheen肉汤培养对Vero细胞有毒性作用.

检测黄热病减毒活疫苗中乳糖和山梨糖醇含量的HPLC的建立

目的建立检测黄热病减毒活疫苗中乳糖和山梨糖醇含量的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),并验证该法。方法建立的HPLC的色谱条件确定为:离子排斥色谱柱Aminex?HPX-87H(300 mm×7.8 mm),流动相0.004 mol/L硫酸、流速0.8 ml/min、柱温50℃,进样量20μl。检测该法的系统适用性,并验证该法的线性、准确度、精密度、专属性、稳定性和耐用性。结果该法的乳糖与山梨糖醇峰间的分离度为6.68,乳糖和山梨糖醇标准曲线的线性良好,线性的决定系数分别为0.999 98和0.999 87。该法的准确度良好,乳糖和山梨糖醇的回收率分别为100.2%~100.4%和101.0%~101.7%,均符合规定的要求。6次重复检测的乳糖和山梨糖醇结果相对标准偏差分别为0.00%和0.08%;2名分析员于不同时间检测12次的乳糖和山梨糖醇结果相对标准偏差分别为0.30%和0.99%。该法检测乳糖和山梨糖醇质量浓度的定量限分别为0.05 mg/ml和0.06 mg/ml。结论建立的HPLC可用于检测黄热病减毒活疫苗中的乳糖和山梨糖醇含量。