白细胞介素2-乙型肝炎病毒前S抗原融合蛋白的免疫原性研究

为协同人白细胞介素与乙型肝炎病毒前Ｓ抗原的生物学功能，探索治疗慢性乙肝的特异性免疫药物。方法用聚合酶链反应和基因重组技术构建了ＨＢＶ完整前Ｓ抗原和ＩＬ－２的嵌合基因，并在大肠杆菌中高效表达了ＩＬ－２－前Ｓ抗原融合蛋白。结果该融合蛋白保留了ＩＬ－２和前Ｓ抗原天然分子的生物学活性，能维持白细胞介素２依赖株细胞增殖，其比活性１０＾７Ｕ／ｍｇ蛋白。

人源化IL-2免疫毒素的构建和鉴定

利用基因工程技术在大肠杆菌表达成功人白细胞介素２（ＩＬ－２）和人血管生成素（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）的融合蛋白（ＩＬ－２－Ａｎｇ）。活性检测证明，它具有ＩＬ－２免疫毒素的作用，在体外可以杀伤ＩＬ－２依赖性ＣＴＬＬ细胞株和经ＣｏｎＡ活化的小鼠脾脏ＩＬ－２Ｒ阳性细胞。在双相混合淋巴细胞培养试验中，ＩＬ－２－Ａｎｇ可抑制淋巴细胞的增殖。在体内实验中，ＩＬ－２－Ａｎｇ注射小鼠可使其抗原活化的脾细胞数量减少。由于ＩＬ－２和Ａｎｇ均为正常人体成分，ＩＬ－２－Ａｎｇ融合分子作为人源化免疫毒素可望具有更好的应用前景。

细胞因子佐剂

本文介绍了多种细胞因子的佐剂效应，介绍了细胞因子与抗原融合分子的构建和佐剂效应的优越性及其在抗病毒和抗肿瘤实验研究中所显示的应用前景。

高活性人重组双体GM-CSF在大肠杆菌的表达和鉴定

利用基因融合与基因工程技术,将两个粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)基因经白细胞介素—3(IL—3)的N端亲水序列串联起来,插入表达质粒载体,在大肠杆菌中高效表达出含凝血酶识别序列的MS2—双体GM—CSF融合蛋白。表达蛋白经凝血酶消化后,可去除MS2细菌蛋白,获高活性的双体GM—CSF分子(G2)。利用GM—CSF依赖性细胞株TF—1检测活性表明,G2的比活性高于单体GM—CSF的10倍以上,为研制新一代GM—CSF提供了新的途径。

人重组血管生成素对造血细胞生长促进作用的研究

为进一步研究人重组血管生成素（Ａｎｇ）的新生物学活性，利用ＭＴＴ法进行细胞增殖试验，发现人重组Ａｎｇ对白血病细胞株ＴＦ－１细胞和正常人骨髓细胞具有生长促进作用，１～１０００ｎｇ／ｍｌ浓度范围呈现剂量反应曲线，并且少至０．６２５Ｕ的肝素可使这种活性提高至１９３％。流式细胞仪分析证明荧光素标记的Ａｎｇ可特异结合ＴＦ－１细胞，阳性率为９９．４６％，而阴性对照的ＣＴＬＬ细胞阳性率为９．５３％。这些新的发现表明Ａｎｇ在造血细胞发育中可能起生理和病理作用。

重组人补体 C3 片段抑制小鼠内毒素休克

目的利用补体灭活片段ｉＣ３ｂ上含精氨酸－甘氨酸－天冬酰胺（ＲＧＤ）序列的重组蛋白，探索其抗炎治疗的应用价值。方法利用基因重组技术构建表达载体，在大肠杆菌中表达了含ＲＧＤ序列的重组蛋白（简称Ｃ３３），并进行体内外活性分析。结果电泳分析Ｃ３３分子量约１５０００，纯化后纯度可达９５％以上，氨基酸组成分析与理论计算值相符。低剂量醋酸苯汞刺激Ｕ９３７细胞可粘附于包被的Ｃ３３，抗ＣＤ１１ｂ的单克隆抗体可阻断这种粘附。提前静脉注射Ｃ３３可使小鼠内毒素休克的死亡率较未注射组明显降低。结论重组蛋白Ｃ３３可与ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８特异结合，Ｃ３３可降低小鼠的内毒素休克死亡率，作为预防性给药防治内毒素休克可能具有应用价值。