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凋亡分子——生命科学研究的一个新热点 被引量:7
1
作者 马大龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期145-147,共3页
马大龙,男,教授,博士生导师,中国免疫学会常务理事,《中国免疫学杂志》编委。根据国际互联网上在1998年11月24日的MedLine统计,近10年发表有关凋亡的论文共20539篇,其中近1年发表有关凋亡的论文6669... 马大龙,男,教授,博士生导师,中国免疫学会常务理事,《中国免疫学杂志》编委。根据国际互联网上在1998年11月24日的MedLine统计,近10年发表有关凋亡的论文共20539篇,其中近1年发表有关凋亡的论文6669篇,占32.5%;而近10年发表有... 展开更多
关键词 细胞凋亡 凋亡分子 死亡功能区 受体 配体
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人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应 被引量:55
2
作者 张颖妹 徐秀珍 +2 位作者 刘红涛 宋泉声 马大龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期8-11,共4页
目的:对一种新发现的凋亡相关基因TFAR19进行蛋白质水平的促凋亡效应研究,并对其作用机理进行初步的探讨。方法;利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组TFAR19蛋白进行纯化,将其加入到培养的白血病细胞株HL-60,... 目的:对一种新发现的凋亡相关基因TFAR19进行蛋白质水平的促凋亡效应研究,并对其作用机理进行初步的探讨。方法;利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组TFAR19蛋白进行纯化,将其加入到培养的白血病细胞株HL-60,通过DNA片段化、PI及AnnekinV标记进行流式细胞仪分析,观察TFAR19蛋白的促凋亡效应。利用FITC标记TFAR19蛋白,分析其与细胞的结合及定位。利用Caspase-3抑制剂DEVD-fmk研究TFAR19的凋亡信号转导途径。结果:高纯度的重组TFAR19蛋白剂量依赖性地促进撤除血清的HL-60细胞的凋亡,最高可使82%细胞凋亡,对照为30%。荧光标记的TFAN19蛋白能与HL-60细胞结合,主要定位于细胞核。DEVK-fmk可部分抑制TFAR19蛋白的促凋亡效应。结论:TFAR19蛋白能够直接进入HL-60细胞,发挥其促进细胞凋亡的效应。这一效应部分地与Caspase-3的凋亡执行效应有关。 展开更多
关键词 HL-60细胞 白血病 TFAR19蛋白 细胞凋亡
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凋亡相关新基因 TFAR19 的 cDNA 克隆、表达和功能研究 被引量:26
3
作者 刘红涛 王玉刚 +5 位作者 张颍妹 宋泉声 狄春晖 陈光慧 汤建 马大龙 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第5期6-10,共5页
利用RDA技术从人白血病细胞TF-1中克隆成功一个与凋亡相关的新基因TFAR19。序列分析表明,TFAR19cDNA全长559bp,其中25—399bp编码125个氨基酸的蛋白质。mRNA斑点杂交分析表明TFAR19... 利用RDA技术从人白血病细胞TF-1中克隆成功一个与凋亡相关的新基因TFAR19。序列分析表明,TFAR19cDNA全长559bp,其中25—399bp编码125个氨基酸的蛋白质。mRNA斑点杂交分析表明TFAR19在50种组织中均有不同程度的表达。在大肠杆菌中表达并纯化了重组TFAR19蛋白质,制备了多克隆抗体,WesternBlot发现TFAR19蛋白在凋亡的TF-1细胞中高表达。瞬时转染TFAR19正义基因后,TF-1细胞去细胞因子后凋亡速度增加。研究表明它能抑制胃癌细胞株803细胞和Hela细胞的生长,促进它们的去血清所致的凋亡。 展开更多
关键词 TF-1细胞 凋亡 CDNA 免疫学
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TF-1细胞凋亡相关基因的研究 被引量:18
4
作者 刘红涛 王玉刚 +4 位作者 张颖妹 宋泉声 敬保迁 袁勇 马大龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第1期38-43,共6页
利用近年来发展起来的代表差异分析(cDNArepresentationaldiferencesanalysis,cDNARDA)技术研究了在人红白血病细胞株TF1细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因.发现了... 利用近年来发展起来的代表差异分析(cDNArepresentationaldiferencesanalysis,cDNARDA)技术研究了在人红白血病细胞株TF1细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因.发现了6个新基因片段.其中有三个经与GenBanknr和dbEST查询均没有发现同源性,已经向GenBank进行登记,登记号分别为U83208,U83279,U83397.此外还发现一批已知基因的表达与凋亡相关,其中包括Hou和人硫氧还原蛋白等,提示它们在凋亡中可能起作用.这项工作为进一步研究凋亡相关基因打下了良好基础.通过RDA的研究结果,有可能发现人白血病细胞凋亡的特异标记蛋白或发挥作用的重要蛋白,以期为白血病治疗提供理论基础. 展开更多
关键词 TF-1细胞株 代表差异分析 细胞凋亡
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IL-10基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响 被引量:2
5
作者 杨高云 袁勇 +3 位作者 姜学义 张颖妹 马大龙 李世荫 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 1998年第4期197-199,共3页
目的:为了观察白细胞介素10(IL-10)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法:通过基因工程方法构建了真核表达载体pcDNA3-IL-10,采用基因给药方式先后两次将质粒DNA直接肌注于3.5月龄雄性BXSB狼疮小鼠.同时给对照组小鼠注... 目的:为了观察白细胞介素10(IL-10)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法:通过基因工程方法构建了真核表达载体pcDNA3-IL-10,采用基因给药方式先后两次将质粒DNA直接肌注于3.5月龄雄性BXSB狼疮小鼠.同时给对照组小鼠注射等量空载体质粒pcDNA3。结果:发现IL-10在该鼠体内过表达可导致其血清ANA滴度、IL-6水平及肾脏IgG沉积明显增加,而尿蛋白和血清GPT水平及肾脏C3沉积无明显差异。结论:提示IL-10在SLE发病中可能具有病理性作用,阻止或减少IL-10的分泌及作用,也许有助于SLE的治疗。 展开更多
关键词 小鼠 BXSB 系统性红斑狼疮 IL-10 基因 给药
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人Nmi mRNA编码区存在变异形式 被引量:2
6
作者 王玉刚 刘红涛 马大龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期680-683,共4页
Nmi基因编码一种可与Myc相互作用的蛋白质.在人红白血病细胞系TF-1细胞去细胞因子GM-CSF后8h,发现NmiRNA表达水平升高.利用PCR方法从中扩增NmicDNA编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比... Nmi基因编码一种可与Myc相互作用的蛋白质.在人红白血病细胞系TF-1细胞去细胞因子GM-CSF后8h,发现NmiRNA表达水平升高.利用PCR方法从中扩增NmicDNA编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比公布核酸序列小约100~200bp的扩增片段.序列分析表明该片段为编码区第337~509位的碱基缺失,由GTTCCATTGCG11个碱基取代,形成一个开放读码框架,编码254个氨基酸,比野生型Nmi编码的307个氨基酸少53个氨基酸. 展开更多
关键词 Nmi基因 变异体 凋亡 TF-1细胞
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人高血压相关基因(HRG-1)编码蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定 被引量:1
7
作者 王露 陈光慧 +1 位作者 汤健 马大龙 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第11期4-7,共4页
为了研究一个新的人高血压相关基因HRG 1的编码蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性 ,使用PCR的方法扩增人HRG 1基因ORF的编码序列 ,构建了原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中诱导表达及进行体外活性鉴定。实验结果证明得到了具有生物学活性... 为了研究一个新的人高血压相关基因HRG 1的编码蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性 ,使用PCR的方法扩增人HRG 1基因ORF的编码序列 ,构建了原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中诱导表达及进行体外活性鉴定。实验结果证明得到了具有生物学活性的人HRG 1原核表达蛋白。且人HRG 1原核表达蛋白具有与真核表达蛋白一致的生物学活性。 展开更多
关键词 高血压 原核表达 克隆 相关基因 HRG 编码蛋白 大肠杆菌
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细胞因子研究进展 被引量:10
8
作者 马大龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第3期164-166,共3页
一、概述 机体的各种细胞能合成和分泌小分子的多肽类因子,它们调节机体的生理功能,参与多种细胞的增殖,分化和行使功能,这些因子统称为细胞因子(Cytokine).本文重点介绍与免疫有关的细胞因子.包括:1.白细胞介素(IL):包括IL-1~IL-18-2... 一、概述 机体的各种细胞能合成和分泌小分子的多肽类因子,它们调节机体的生理功能,参与多种细胞的增殖,分化和行使功能,这些因子统称为细胞因子(Cytokine).本文重点介绍与免疫有关的细胞因子.包括:1.白细胞介素(IL):包括IL-1~IL-18-2.集落刺激因子(CSF):包括Multi-CSF(IL-3).GM-CSF,C-CSF,C-CSF.红细胞生成素(Epo),干细胞因子(SCF),白血病抑制因子(Leukermia inhibitory factor,LIF),血小板生成素(Tpo)等.3.干扰素(IFN):包括IFN-a,IEN-β,IFN-γ.4.肿瘤坏死因子(TNF):包括TNT-α.TNF-β(LTα).(LTα),LT-β.5.趋化素(Chemokine):根据分子结构分为4个亚家族,包括C-X-C,C-C,C和C-X_3-C亚家族.6.生长因子(Growth factor):对细胞具有促生长作用的细胞因子. 展开更多
关键词 细胞因子 白细胞介素 集落刺激因子 基因疗法
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利用cDNARDA技术研究BXSB狼疮小鼠差异表达的基因
9
作者 韩文玲 李莹 +5 位作者 杨高云 宋泉声 张颖妹 狄春辉 马大龙 sun.bjmu.edu.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期305-308,共4页
利用近年来发展起来的代表性差异分析cDNA RDA (cDNA representationaldifferenceanalysis)技术筛选BXSB红斑狼疮小鼠发病相关基因 .发现了 3个新的表达序列标签 (EST)片段 ,在GenBank中的登录号分别为AF0 60 113 ,AF0 60 111,AF0 60 11... 利用近年来发展起来的代表性差异分析cDNA RDA (cDNA representationaldifferenceanalysis)技术筛选BXSB红斑狼疮小鼠发病相关基因 .发现了 3个新的表达序列标签 (EST)片段 ,在GenBank中的登录号分别为AF0 60 113 ,AF0 60 111,AF0 60 110 ,同时发现了一些已知与自身免疫病相关的基因如逆转录病毒衣壳蛋白、Line 1逆转录酶等 .通过RDA技术可能发现系统性红斑狼疮发病相关新基因 。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 CDNA-RDA 发病机理 基因表达
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SLE患者PBMC中IL-6mRNA和IL-10mRNA的表达
10
作者 杨高云 姜学义 +2 位作者 李世荫 刘红涛 袁勇 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期141-143,共3页
为了进一步了解TH2型细胞因子IL-6和IL-10在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(PBMC)中的基因表达情况,对7例SLE患者和4例年龄相匹配对照PBMC中IL-6mRNA和IL-10MRNA表达进行了原位杂交检测,并对检测结果进行计算机图象灰度... 为了进一步了解TH2型细胞因子IL-6和IL-10在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(PBMC)中的基因表达情况,对7例SLE患者和4例年龄相匹配对照PBMC中IL-6mRNA和IL-10MRNA表达进行了原位杂交检测,并对检测结果进行计算机图象灰度扫描分析、结果SLE患者PBMC中IL-6mRNA和IL-10mRNA均明显高表达,并与患者ANA滴度及抗(ISDNA抗体有一定的相关性尤以IL-6为著。提示IL-6和IL-10作为B细胞刺激因子在SLE发病中具有重要病理性作用,阻止或减少其分泌可能有助于SIE治疗。 展开更多
关键词 SLE 红斑狼疮 系统性 白细胞介素 mRNA
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人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建、表达和其体内外生物学活性研究 被引量:5
11
作者 李芳 莫晓宁 +6 位作者 张颖妹 袁岚 饶严 范中玉 袁勇 曹志敏 马大龙 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期319-322,共4页
目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子(humanrecombinantgranulocytecolony-stimulatingfactor,rhG-CSF)的稳定性和活性,对rhG-CSF进行改造和体内、外活性研究。... 目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子(humanrecombinantgranulocytecolony-stimulatingfactor,rhG-CSF)的稳定性和活性,对rhG-CSF进行改造和体内、外活性研究。方法利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第17位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,DNA序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用G-CSF依赖细胞株NFS-60,对在不同温度及在人血浆中保存的G-CSF蛋白(G-CSF-Ala17)和野生型的G-CSF进行活性测定。腹腔注射后小鼠外周血白细胞计数检测其体内生物学活性。结果DNA序列分析表明17位半胱氨酸突变为丙氨酸,并在大肠杆菌中表达成功G-CSF-Ala17。纯化的突变蛋白对NFS-60细胞具有刺激活性;与野生型G-CSF相比,在各种温度储存的突变蛋白保留更高的活性,与人血浆孵育50小时后突变蛋白仍保持活性;小鼠一次性体内注射突变蛋白后外周血白细胞数明显高于野生型G-CSF。结论G-CSF突变体(G-CSF-Ala17)较野生型的G-CSF具有更高的体外稳定性和体内造血刺激活性。 展开更多
关键词 定点突变 zhG-CSF 表达 生物学活性
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利用抑制性减数杂交技术(SSH)研究IL-10抑制表达的新基因 被引量:12
12
作者 韩文玲 李莹 +4 位作者 张颖妹 徐秀珍 宋泉声 狄春辉 马大龙 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期128-131,共4页
目的 利用抑制性减数杂交 (SSH)技术筛选IL 10抑制表达的新基因。方法 以PHA刺激的U937细胞为tester,以PHA刺激同时IL 10抑制的U937细胞为driver,提取mRNA ,反转录构建cDNA文库 ,利用SSH技术筛选IL 10抑制表达的新基因。结果 通过SS... 目的 利用抑制性减数杂交 (SSH)技术筛选IL 10抑制表达的新基因。方法 以PHA刺激的U937细胞为tester,以PHA刺激同时IL 10抑制的U937细胞为driver,提取mRNA ,反转录构建cDNA文库 ,利用SSH技术筛选IL 10抑制表达的新基因。结果 通过SSH技术 ,发现了 15个可能的IL 10抑制表达的基因 ,其中 6个与GenBank中已公布的表达序列检签 (expressedsequencetag ,EST)片段没有明显同源性 ,为新基因 ,其中之一经EST拼接 ,得到全长cDNA ,为一种新的C C家族趋化因子 ,已被GenBank收录 ,收录号码为AF0 96 985。挑选 4个新基因进行Northernblot分析 ,发现IL 10可抑制其中 3个新基因表达。结论 SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法 ,IL 展开更多
关键词 白细胞介素10 U937细胞 抑制性减数杂交
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一个人类凋亡相关新基因TFAR15的cDNA克隆化与表达 被引量:6
13
作者 王玉刚 刘洪涛 +1 位作者 张颍妹 马大龙 《中国科学(C辑)》 CSCD 1999年第3期331-336,共6页
运用cDNA RDA(cDNA Representationaldifferencesanalysis)的方法 ,已获得了在细胞因子依赖性红白血病细胞系TF 1中撤除GM CSF(Granulocytemacrophage colonystimulatingfactor)后表达增高的多个基因片段 ,其中一个经GenBank检索为新基... 运用cDNA RDA(cDNA Representationaldifferencesanalysis)的方法 ,已获得了在细胞因子依赖性红白血病细胞系TF 1中撤除GM CSF(Granulocytemacrophage colonystimulatingfactor)后表达增高的多个基因片段 ,其中一个经GenBank检索为新基因 .利用RACE (rapidamplificationofcDNAends)和EST (expressedsequencetags)重叠片段拼接的方法克隆了该基因的cDNA全长序列 ,命名该基因为TFAR1 5 (TF 1cellapoptosisrelatedgene 1 5 ) .TFAR1 5全长cDNA由 1 2 1 8个碱基组成 ,其分布十分广泛 .随着GM CSF的去除 ,TF 1细胞中TFAR1 5的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的增高 .体外活性研究发现 ,重组TFAR1 5蛋白片段可抑制人胚肾细胞 2 93的自然凋亡 . 展开更多
关键词 cDNA-RDA TFAR15 克隆 细胞凋亡 人类 基因表达
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人重组C3片段通过IL-2自分泌效应对CTLL-2细胞产生促增殖作用 被引量:2
14
作者 宋泉声 张颍妹 +2 位作者 梁红梅 韩文玲 马大龙 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期207-209,共3页
目的研究补体C3片段的体外生物学活性及其作用机理,进一步探讨C3片段与免疫细胞的关联。方法利用重组DNA技术表达纯化C3活性片段(命名为C33),观察其对IL-2依赖性的小鼠杀伤性T细胞株CTLL-2细胞的促增殖效应... 目的研究补体C3片段的体外生物学活性及其作用机理,进一步探讨C3片段与免疫细胞的关联。方法利用重组DNA技术表达纯化C3活性片段(命名为C33),观察其对IL-2依赖性的小鼠杀伤性T细胞株CTLL-2细胞的促增殖效应,并通过抗体封闭途径和分子杂交技术研究C33作用的机理。结果发现C33蛋白对CTLL-2细胞具有明显的促增殖作用,并呈剂量依赖关系;这一作用能够部分地被抗小鼠CD11b抗体所封闭,能够完全被抗小鼠IL-2抗体所封闭;分子杂交显示C33蛋白能够明显刺激CTLL-2细胞的IL-2mRNA表达。结论人重组C3片段C33可通过IL-2的自分泌效应对CTLL细胞产生促增殖作用,补体受体CR3参与这一作用。 展开更多
关键词 补体3 受体 CTLL细胞 白细胞介素-2 增殖
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白介素I受体拮抗剂基因治疗小鼠Ⅱ型胶原关节炎的疗效观察 被引量:7
15
作者 杨高云 狄春辉 +5 位作者 蒋明 李芳 张颖妹 袁岚 宋泉声 马大龙 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第14期990-994,共5页
目的 探讨白细胞介素I受体拮抗剂 (IL 1ra)基因治疗小鼠Ⅱ型胶原关节炎效果 ,为临床开展类风湿关节炎基因治疗奠定基础。方法 通过基因工程方法将人IL 1racDNA插入真核表达载体pcDI中 ,构建成在真核细胞内表达IL 1ra的质粒pcDI IL 1r... 目的 探讨白细胞介素I受体拮抗剂 (IL 1ra)基因治疗小鼠Ⅱ型胶原关节炎效果 ,为临床开展类风湿关节炎基因治疗奠定基础。方法 通过基因工程方法将人IL 1racDNA插入真核表达载体pcDI中 ,构建成在真核细胞内表达IL 1ra的质粒pcDI IL 1ra。经酶切、PCR和DNA测序鉴定均证实了插入片段的正确性。体外和体内转染真核细胞后 ,分别用ELISA和免疫组织化学方法检测到了IL 1ra的高效表达。将小鼠分成 4组 ,每组 8只 ,1组、2组用基因枪给药法 (2 0 μg 只小鼠 ) ,3组、4组用肌肉注射法 (2 0 0 μg 只小鼠 ) ,一次性将这一构建质粒注射于Ⅱ型胶原诱导的DBA 1小鼠关节炎模型肌肉组织中。结果 用两种方式IL 1ra基因给药后第 4天 ,小鼠肌肉组织中IL 1ra表达结果经计算机图像分析 ,吸光度 (A) 4 90值 :基因枪组为 0 5 2± 0 0 3,肌注组为 0 4 8± 0 0 2 ,对照组 0 4 1± 0 0 2。基因枪组与于对照组比较P <0 0 1,肌注组与对照组比较P <0 0 5。给药后第 6天和第 12天 ,小鼠血清IL 1ra水平 ,与对照组比较基因枪组于第 6天和第 12天均显著升高 (P <0 0 1)。肌注组小鼠血清IL 1ra水平在第 6天和第 12天也显著高于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。两种治疗组的小鼠病情从第 6天开始缓解 ,关节红肿较对照组减轻。 展开更多
关键词 白细胞介素受体 基因疗法 小鼠 类风湿关节炎
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人肺癌相关抗原的基因克隆 被引量:4
16
作者 曹志敏 范慕贞 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期122-124,共3页
目的克隆人肺癌相关抗原的基因。方法用λgt11Sfi-Not定向克隆载体构建人肺鳞癌细胞系L-78的cDNA文库,并以抗人肺癌单抗ALT-04为探针进行了筛选。对名为hlc-14的cD-NA克隆作了测序分析与进一步研... 目的克隆人肺癌相关抗原的基因。方法用λgt11Sfi-Not定向克隆载体构建人肺鳞癌细胞系L-78的cDNA文库,并以抗人肺癌单抗ALT-04为探针进行了筛选。对名为hlc-14的cD-NA克隆作了测序分析与进一步研究。用重组的pXJ41-hlc14质粒转染NIH3T3细胞,通过免疫组化法对克隆基因进行了表达检测与鉴定,还观察了转染细胞的软琼脂集落形成能力。结果建成1.4×106pfu/ml人肺癌cDNA文库,经过四轮免疫学筛选获得6个cDNA克隆,最大的cDNA克隆为hlc-14,长954bp。对该克隆的测序结果与基因库资料比较,未发现同源序列。hlc-14cDNA转染的NIH3T3细胞有明显的肺癌相关抗原表达,并且在软琼脂中的集落形成能力增强。结论hlc-14是一个新的肺癌相关抗原的cDNA序列。这一序列的发现为阐明肺癌的发病机理。 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤相关抗原 CDNA文库 基因克隆
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