MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。

抗HBsAg人VH基因中异常序列对抗体活性影响的研究

目的:我们曾从噬菌体抗体库中克隆到一株VH第3骨架区中含有异常序列的抗HBsAg人Fab基因,本工作拟探讨该VH基因中异常序列对抗体活性的影响.方法:采用重叠PCR方法去除这段异常序列,构建表达载体,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab,测定了它们与抗原的结合活性.结果:与原抗体比较,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降,分子模建提示这段异常序列对VH CDR_1和CDR_2的部分氨基酸残基的位置有一些影响,测定改造前Fab的亲和力约为0.55×10~9M^(-1),改造后Fab因抗原结合活性过低,无法检测其亲和力.结论:提示这段异常序列在体内就可能存在于该VH之中.

白细胞介素4在异位性皮炎中的变化

目的：探讨ＩＬ－４在异位性皮炎发病机制中的意义。方法：采用ＥＬＩＳＡ试剂盒测定异位性皮炎（ＡＤ）、非典型性异位性皮炎（ＡＡＤ）患者和正常对照组ＰＨＡ刺激外周血单一核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液中ＩＬ－４水平，应用免疫组化技术观察ＡＤ皮损浸润单一核细胞中ＩＬ－４和ＩＦＮ－ｒ表达。结果：ＡＤ组ＰＢＭＣ培养上清液中ＩＬ－４水平显著高于ＡＡＤ组或正常对照组，并且ＩＬ－４与ＩｇＥ呈正相关。结论：异位性皮炎患者血清ＩｇＥ和ＩＬ－４呈正相关；异位性皮炎和非典型性异位性皮炎或对照组的免疫病理的不同，支持ＩＬ－４可以作为异位性皮炎的重要诊断指标。

视网膜增殖性疾病玻璃体中胰岛素样生长因子的放射免疫测定

用放射免疫分析测定正常人眼和各种视网膜增殖性疾病玻璃体中的胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＩ，ＩＧＦ－Ｉ）水平共６７例。测前用酸酒精提取法去除ＩＧＦ结合蛋白。结果显示：各疾病组玻璃体ＩＧＦ－Ｉ水平较对照组有不同程度升高。增殖性糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔ－ｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ，ＰＤＲ）组和视网膜中央静脉阻塞（ｃｅｎｔｒａｌｒｅｔｉｎａｌｖｅｉｎｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ＣＲＶＯ）组的ＩＧＦ－Ｉ水平显著高于对照组。ＰＤＲ组玻璃体ＩＧＦ－Ｉ水平升高，与其血清浓度增高呈显著正相关。玻璃体内ＩＧＦ－Ｉ水平增高可能在视网膜增殖疾病发生发展中起重要作用。我们对照了提取结合蛋白后与自然玻璃体直接测定的差异，结合蛋白显著影响ＩＧＦ－Ｉ的测定。

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,为用MAGE 1基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 4 5例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16例肝硬化组织和 12例正常肝组织的MAGE 1mRNA表达情况进行研究 ,对 6例RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定 ,并以测序证实为MAGE 1基因的cDNA片段为模板合成 [α32 P]标记的探针 ,进行Southernblot分析。同时用ELISA方法对其中 4 3例HCC患者进行人类白细胞抗原 (HLA)class1 A及B位点分型。结果 4 5例HCC患者中 ,3 2例表达MAGE 1mRNA ,而相应癌旁组织及非HCC患者肝组织均不表达 ;DNA测序 ,6例PCR产物中的目的基因片段均证明为MAGE 1cDNA序列 ,其中 3例均有 3个相同位置碱基的点突变 ,导致 2个氨基酸残基改变 ;5例电泳阳性癌组织的RT PCR产物Southernblot结果也为阳性 ,而癌旁组织均为阴性 ;HCC患者中常见HLA类型为A2 ( 5 3 5 % ) ,A11( 2 5 6% ) ,A2 4( 2 0 9% ) ,A33( 2 0 9% ) ,B13( 2 8 3 % ) ,B35( 2 3 2 % ) ;MAGE 1的表达与肿瘤直径、α FP水平等临床指标无相关关系。结论 MAGE 1在肝细胞癌中呈高比例表达 。

两种黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原MAGE 4和MAGE 10mRNA在中国人肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,为用这两种基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗提供依据。方法 用RT PCR方法对 48例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织、10例肝硬化组织和 10例正常肝组织的MAGE 4和MAGE 10mRNA表达情况进行研究 ,并对RT PCR扩增产物中目的基因片段进行cDNA序列测定。结果 48例HCC患者中 ,有 15例 (31.3% )表达MAGE 4,14例 (2 9.2 % )表达MAGE 10mRNA ;而相应癌旁肝组织、肝硬化和正常肝组织均不表达。cDNA测序进一步证明 ,PCR产物中的目的基因片段为MAGE 4和MAGE 10cDNA序列 ,两种MAGE基因的表达与肿瘤大小、甲胎蛋白 (α FP)水平等临床指标无相关关系。结论 MAGE 4和MAGE 10在HCC组织中呈特异性的表达 ,而在癌旁非瘤性肝组织中均不表达 ,这使得以此抗原用于HCC患者的免疫治疗成为可能。

MAGE—4基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 通过研究ＭＡＧＥ—４基因在肝细胞肝癌组织中的表达，并与患者临床资料进行分析，探讨ＭＡＧＥ—４基因与肝细胞肝癌（ＨＣＣ）患者临床指标及转移与复发的关系，为ＭＡＧＥ—４基因编码蛋白用于ＨＣＣ患者免疫治疗提供依据。方法 用ＲＴ—ＰＣＲ的方法对３１例ＨＣＣ患者癌组织及相应癌旁组织ＭＡＧＥ—４基因表达进行测定，对全部ＲＴ—ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ测序以证实其为ＭＡＧＥ—４基因，患者均测定并统计ＡＦＰ、ＡＦＵ、抗ＨＣＶ、ＨＢｓＡｇ、ＡＦＰ ｍＲＮＡ、肿瘤直径等临床指标。结果 ３１例ＨＣＣ患者肝癌组织中ＭＡＧＥ－４基因表达的阳性率 ３８．７％（１２／３１）明显高于癌旁组织中 ＭＡＧＥ—４基因表达的阳性率０％（０／３１），Ｐ＜０．０１。ＨＣＣ患者肝癌组织中ＭＡＧＥ—４基因表达的阳性率与患者ＡＦＰ、ＡＦＵ、抗ＨＣＶ、ＨＢＶ标志物、ＡＦＰ ｍＲＮＡ、肿瘤直径等临床指标均无关，Ｐ＞０．０５。结论 ＭＡＧＥ－４基因在ＨＣＣ患者肝癌组织中特异高表达，可能作为ＨＣＣ患者免疫治疗攻击的靶点，ＨＣＣ患者肝癌组织中ＭＡＧＥ—４基因表达的阳性率与ＨＣＣ患者肿瘤标忘物、转移、复发均无关。

恶性黑色素瘤抗原编码基因-MAGE-1在肝细胞肝癌中表达的研究

ｒｕｇｇｅｎ等［１］首先在恶性黑色素瘤中发现ＭＡＧＥ１基因，它在胃癌、食管癌等多种恶性肿瘤中都有较高程度的表达，而在正常组织中（除睾丸外）均不表达［２４］。ＭＡＧＥ１基因编码抗原ＭＺ２Ｅ可以被主要组织相容性抗原ＨＬＡＩ类分子提呈，活化并诱导...

抗HBs人V_H基因中异常序列对抗体活性影响的研究

目的 从噬菌体抗体库中克隆到 1株VH 第 3骨架区中含有异常序列的抗HBs人Fab基因 ,探讨该VH 基因中异常序列对抗体活性的影响。方法 采用重叠PCR方法去除了这段异常序列 ,构建表达载体 ,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab ,测定了它们与抗原的结合活性。结果 与原抗体比较 ,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降 ,分子模建提示这段异常序列对VHCDR1和CDR2的部分氨基酸残基的位置有一些影响 ,测定改造前Fab的亲和力约为 0 5 5×10 9mol/L ,改造后Fab因抗原结合活性过低 ,无法检测其亲和力。结论 提示这段异常序列在体内可能存在于该VH 之中。

HCV E1基因序列的原核高效表达及表达产物的初步应用

目的 在原核表达系统中对HCVE1基因进行克隆和高效表达 ,并初步探讨表达产物在抗 HCV筛选中的作用。方法 通过RT PCR法从HCVRNA阳性的血清标本中扩增出HCVEI片段 ,并在扩增用的引物中引入克隆所需的酶切位点 ,克隆产物经XbaⅠ和EcoRⅠ酶切后 ,在T4DNA连接酶的作用下克降入经同样双酶切的原核表达载体PMS 31b中 ,并用此连接产物转化大肠埃希菌POP2 136 ,挑取具有氨苄抗性的菌落扩大培养后提取质粒进行酶切鉴定 ,鉴定出的阳性菌经42℃诱导后用SDS PAGE检查其表达状况 ,并用Westernblot鉴定表达产物的特异性 ,同时用初步纯化的表达产物用ELISA法检测病人血清。结果 经SmaⅠ酶切后PCR产物被切成 144bp和 35 6bp的两个片段 ,在具有氨苄抗性的菌中提取的质粒经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了一 35 6bp的片段 ;42℃诱导后在SDS PAGE中出现了一条相对分子质量为 310 0 0的条带 ,其表达量约为 17% ,经West ernblot鉴定后在该处出现了阳性信号 ;ELISA实验显示在抗HCV阳性的血清中的阳性率约为2 9 8% (2 6 /90 ) ,而在抗HCV阴性的血清中其阳性率约为 3 9% (3/76 )。结论 通过RT PCR方法将HCVE1基因从HCVRNA阳性的血清标本中调出 ,构建了HCVE1的原核表达载体—PMS E1,其表达量为 17% ,表达产物具有良好的特异性 ,有?