凋亡细胞细胞膜和线粒体的动态变化

应用拓扑异构酶抑制剂VP-16及化学毒物叠氮钠分别诱导HL-60细胞凋亡及坏死,在0、2、4、8、16及24h各时间点,应用Hoechst33258染色,荧光显微镜及透射电镜对核形态进行观察,通过流式细胞术检测二乙酸荧光素(FDA)、罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)荧光强度的变化,观察细胞凋亡及坏死过程中细胞膜通透性和线粒体膜电位的动态变化。结果显示:HL-60细胞在VP-16处理4h时核形态开始变化,有核浓缩的细胞比例在8h达高峰,然后下降;核碎裂细胞的比例在24h达高峰,约占80%,表明核浓缩发生在核碎裂之前。线粒体跨膜电位在8h后渐渐降低,16h可见明显降低。坏死细胞的线粒体膜电位在4h降低50%,细胞膜通透性也在8h之后出现变化。随处理的时间延长,FDA荧光强度进一步降低,对PI的摄取渐渐升高。结果提示,细胞凋亡过程中细胞膜通透性逐渐增高,线粒体膜电位降低。这两个指标能反映细胞凋亡及其程度,结合对细胞核形态观察,能更准确、可靠地反映细胞凋亡的发展变化。