衰老机理的分子生物学

衰老机理的分子生物学张宗玉，童坦君（北京医科大学生化与分子生物学系，北京１０００８３）子女的寿命常与双亲的寿命有关，各种动物的平均寿命和最高寿命都相当稳定，由此看来物种的寿命主要决定于遗传物质。衰老过程可能与分化、发育过程相似，系由早已安排好的遗传程...

衰老机理的分子生物学研究进展

衰老机理的分子生物学研究进展张宗玉，童坦君（北京医科大学生化与分子生物学系，北京１０００８３）ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＡｇｅｉｎｇＭｅｃｈａｎｉｓｍ￥／／健康与长寿是生命科学永恒的主题。子女的...

衰老生物学标志

确定衰老生物学标志是多年以来老年医学研究追求的目标。目前关键问题是，其判断标准是什么？本文即集中讨论衰老生物学标志的目的，衰老生物学标志的含义及判断标准，并简要评价细胞水平及分子水平的生物学标志。

STAT的转录调控作用及其生物学效应

ＳＴＡＴ的转录调控作用及其生物学效应刘云浩倪菊华贾弘（北京医科大学生化与分子生物学系，北京１０００８３）关键词ＳＴＡＴ转录调控ＳＴＡＴ（ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）是一族ＤＮＡ结合蛋白，与...

胃癌组织及胃癌细胞系中p53的免疫组化研究

用ｐ５３单克隆抗体，对１１７例胃癌和非癌组织的石蜡切片及５株胃癌细胞，进行了免疫组化研究。结果５６例进展期胃癌阳性核染２１例，４例早期胃癌无一例阳性，非癌组织均为阴性；５株胃癌细胞均显示阳性着色，通过ＦＡＣＳ分析，５株胃癌细胞均为非二倍体。说明ｐ５３突变主要在胃癌进展中起作用，可能提示癌肿恶性度高。

TNF-α基因转染对胃癌细胞系的生长抑制效应

本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显减慢,生长抑制率分别达71%和 66%.HTdR掺入率在TNF基因转染细胞明显降低.转染后的肿瘤细胞丧失了裸鼠体内成瘤能力.实验结果表明TNF基因导入胃癌细胞后,细胞生长及致癌能力受到明显抑制,为TNF最终能用于临床胃癌基因治疗提供了有意义的资料.

柠檬酸镧对人肺癌PG细胞、人胃癌BGC-823细胞的作用

采用噻唑蓝 (MTT)测定、3H TdR参入、流式细胞术、荧光偏振技术和软琼脂培养 ,观察了柠檬酸镧 (LaCit)对人肺癌细胞 (PG)、人胃癌细胞 (BGC 82 3 )的增殖、DNA合成、细胞周期、细胞膜脂流动性、软琼脂生长的影响。LaCit的浓度为 0 0 5 ,0 1,0 5 ,1mmol·L- 1 时可抑制肺癌细胞PG的增殖 :浓度为 0 5 ,1mmol·L- 1 时可抑制肺癌细胞PG ,DNA的合成 ,其G1 期细胞比例增加 ,S期细胞比例减少 ,细胞膜脂流动性降低 ,在软琼脂中的生长能力降低。而同样浓度的LaCit对胃癌细胞BGC 82 3除可降低其细胞膜脂流动性外 ,未见其他影响。

Alzheimer氏病淀粉样前体蛋白的研究进展

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ氏病（ＡＤ）是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经纤维缠绕（ＮＦＴ）及细胞外老年斑（ＳＰ）．构成ＳＰ的主要成分β淀粉样多肽（βＡ）为一由淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）剪切而来的分子质量约为４ｋｕ的多肽，其神经毒性可能由其氧化作用和在脂质双层中形成的Ｃａ２＋通道所致．ＡＰＰ的功能目前尚未完全明了，可能具有促进细胞粘附、维护突触膜稳定性等功能．ＡＰＰ主要通过两种途径进行加工修饰：一为分泌途径，由一些假定的分泌酶催化；另一为胞内体溶酶体途径．在形成ＳＰ的βＡ中，较长者比短者更易聚集，因此一些ＡＰＰ突变由于能够释放出更多的较长的βＡ或者使较短的βＡ生成量增加而致发家族性ＡＤ．一些可能在ＡＰＰ的代谢中起着重要作用的因素，如早衰蛋白的突变，也可通过增加βＡ的生成量而致发ＡＤ．

衰老与细胞凋亡

衰老过程(Ageing)是从生物生殖成熟后才开始或加速的，具有累积性、普遍性、渐进性、内生性和危害性的生命过程。在衰老过程中机体各组织器官功能逐渐丧失，易感染疾病，最终死亡。细胞凋亡(Apoptosis B)又称程序性细胞死亡(Programmed cell death)，是指为维护内环境稳态，由基因控制的细胞自主的有序性死亡。近年细胞凋亡与衰老关系的研究已成为热点。因细胞凋亡与衰老过程中组织器官功能的退化、衰老相关疾病的发生发展密切相关，本文仅就近年来的这些研究成果作一扼要综述。

固真方对老年大鼠肝脏原癌基因和抗癌基因表达的影响

用 Northem Blot 方法研究了固真方对老年大鼠肝组织与增殖有关的基因——原癌基因(C-Ha-ras、c-myc)和抗癌基因(P53)表达的影响。结果显示:(1)c-Ha-rds、c-myc 的表达:老年对照组较青年对照组分别降低了61.8％和58.3％;老年用药组较老年对照组分别增高了1.25和0.56倍。(2)P53的表达:老年对照组较青年对照组升高了0.89倍,而老年用药组较老年对照组降低了0.83倍。结果有助于揭示中药固真方补肾益精、延缓衰老作用的分子机理。

血管内皮生长因子受体的结构与功能

血管内皮生长因子 (VEGF)受体是存在于血管内皮细胞 ,介导内皮细胞增殖分化的跨膜受体 .研究较多的有两种VEGF特异受体 :Flt和KDR .Flt和KDR的基因结构及染色体定位已基本确定 ,这二者均属RTKⅢ型受体 ,结构相似 .细胞外区均有 7个类似免疫球蛋白结构 ,细胞内区催化域均有酪氨酸激酶插入区 .当VEGF与受体结合时 ,引起受体自身的磷酸化 ,发生细胞内反应 .在血管发生与生长、创伤修复、炎症。

胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞，随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ， ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导，将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ 分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，用６０ Ｕ／ｍ ｌ潮霉素Ｂ进行筛选，得到了可稳定传代的阳性克隆，分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ 分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ， ＢＧＣ－Ｈｙ 及ＢＧＣ－８２３，０．０２～２００ μｇ／ｍ ｌ 的ＧＣＶ 对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝ ０．０２ μｇ／ｍ ｌ），而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞ ２００μｇ／ｍ ｌ）．２０ μｇ／ｍ ｌＧＣＶ 作用９６ ｈ 后，仅存在２０％ 的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－ 的肿瘤细胞死亡，说明存在较显著的“旁观者效应”

载脂蛋白E与Alzheimer氏病

Alzheimer氏病(AD)是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经元纤维缠绕(NFTa)及细胞外老年斑(SP)。载脂蛋白(Apo)E的一个亚型．ApoE4，与AD具有密切相关性，它可以以较高的亲合力与βA结合而促进SP的形成．并因不能有效地维持tau与微管蛋白连接的稳定性而导致PHF的形成。此外．ApoE4与AD脑中胆碱能神经元的损伤也具有明显相美性。虽然ApoE4作为AD的一个易患因素与AD具有密切的联系．但目前将其作为单一的诊断标准以确定或排除AD显然是不可取的。

啤酒酵母DNA修复基因RAD24温度敏感突变株的分离及其特性的初步研究

以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒，用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现，ｒａｄ２４－ｔｓ３对紫外线敏感；同位素（３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ＵＲ，３Ｈ－Ｌｅｕ）参入试验表明，该突变株ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成均较野生型明显降低．

细胞周期负调控

调控细胞周期的关键是调节细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)的活性。细胞周期蛋白可结合并激活CDK,CDK活性还可通过磷酸化作用调节。因此细胞周期负调控包括以下3点:①细胞周期蛋白降解速度;②CDK磷酸化状态;③CDK抑制蛋白(CKI)。酵母中CKI包括FAR1,p40、PHO81,哺乳动物CKI有p21家族(包括p21、p27)及p16家族(包括p16、p15)。细胞周期负调控与抑癌基因密切相关,是不同抗肿瘤因子作用的共同途径。

Rb基因对人视网膜母细胞瘤株SO-Rb50的影响

目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验产生了0．5X105Cfu具有一次感染能力的重组逆转病毒。利用该病毒感染SO-Rb50，经G418筛选，获得了抗G418细胞群体。运用PCR及Southern杂交技术对转染细胞进行检测，结果表明该抗G418细胞中有完整的外源Rb1存在。Northern杂交发现其Rb1mRNA表达水平有所提高。对细胞群体生长速率、软琼脂集落形成能力的测定表明，外源Rb1的表达使SO-Rb50在软琼脂中集落形成能力降低，而群体生长速率无明显影响。结论：外源Rb1对SO-Rb50恶性表型有一定影响。

57kD肺癌抗原的分离纯化、免疫抗体的制备与各型肺癌免疫组织化学分析

目的制备肺癌抗原和抗体。方法用胰蛋白酶酶解肺癌细胞膜取得多肽混合物，经琼脂糖凝胶和纤维素层析柱分离、纯化，获取肺癌表面抗原，再用电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法确定其性质。用此抗原免疫动物制备相应抗体，并用免疫组织化学方法对８５例肺癌、１０例正常肺和１８例非癌性肺病进行测定。结果此抗原为等电点５．６、分子量为５７０００（５７ｋＤ）的膜蛋白。正常肺和非癌性组织中此抗原表达很低，呈阴性表达；肺癌阳性表达率为８０％，其中鳞癌、腺癌、小细胞肺癌的阳性表达率分别为９４．８０％、７８．２６％和２８．５７％，高分化型鳞癌和腺癌阳性表达率在９０％以上。结论此抗原为不带糖或含糖量很低的多肽，是肺鳞癌和腺癌的共同抗原。

非酶糖化反应与衰老

非酶糖化反应与衰老孙贺英，张宗玉（北京医科大学生化与分子生物学系，北京１０００８３）关键词非酶糖化，衰老近年发现，蛋白质、ＤＮＡ与还原糖之间形成的非酶促糖化产物不仅在糖尿病患者中增高，在老年人体内也明显增加。这些糖化产物经氧化反应进一步与蛋白质、脂类...