GDNF重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究

利用体内同源重组原理，构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ，其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后，用形态学方法、病毒ＤＮＡ酶切分析、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法进行鉴定正确．经测定病毒滴度达到１０１０ｐｆｕ／ｍｌ．用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的２９３细胞及其培养基上清中均检测到大量ＧＤＮＦ蛋白．用重组腺病毒直接感染或者用其条件培养基处理，分别使胚胎大鼠中脑原代多巴胺能神经元的数目增加８８．２％和９６．４％，明显增加多巴胺能神经元存活。

帕金森病遗传学研究进展

帕金森病（ＰＤ）已经成为常见的神经系统疾病之一，然而其病因不明。一个多世纪以来，围绕ＰＤ是由于环境因素、遗传因素或是两者相结合而致病的争论学方面的研究一直存在不少争论。最近一些与ＰＤ相关的致病基因的确定对我们认识遗传因素在ＰＤ发病中的作用提供了新的证据。

帕金森病因学研究

帕金森病已经成为常见的神经系统疾病之一。然而围绕ＰＤ 的病因一直存在不少争论。本文从环境因素、遗传因素和遗传易感性等方面探讨了ＰＤ 发生的原因。

多次100Hz TENS治疗慢性炎症痛的适宜参数和可能的神经化学机制研究

本工作在单发佐剂性关节炎慢性痛模型大鼠上比较观察了不同时间间隔和不同强度的多次１００Ｈｚ经皮神经电刺激（ＴＥＮＳ）的治疗效果，并对炎症和ＴＥＮＳ过程中Ｐ物质（ＳＰ）和强啡肽（Ｄｙｎ）的变化规律及其作用进行了初步探讨。结果表明：（１）用小量的油包水型完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）进行大鼠单侧踝关节腔内注射可造成单发性关节炎慢性痛模型。（２）刺激间隔时间和刺激强度均是影响多次ＴＥＮＳ治疗慢性炎症痛的重要因素。治疗的适宜间隔时间：急性期（１～３周），每周２次最优；稳定期（４～９周），每周１次较好。刺激强度：弱刺激的疗效较好。（３）多次较弱ＴＥＮＳ治疗慢性炎症痛的过程中脊髓ＳＰｉｒ基础释放量较致炎对照组减少，这可能是多次ＴＥＮＳ治疗慢性炎症痛的机制之一。（４）慢性单发性关节炎１周时，脊髓ＤｙｎＡ（１１７）ｉｒ的基础释放量升高，３周后持续低于正常水平。关节炎１周和９周时，脊髓鞘内注射ＮｏｒＢＮＩ均可剂量依赖性地引起炎症关节的痛敏加重，提示脊髓强啡肽κ受体系统在慢性炎症痛中发挥着对伤害性信息的紧张性抑制作用。

经皮神经电刺激治疗慢性炎症痛的适宜参数探讨之一:不同频度的疗效比较

在建立一种可靠的慢性炎症痛动物模型的基础上,用不同间隔的经皮神经电刺激(TENS)给予治疗,对其疗效进行比较观察,找出较适宜的TENS间隔时间。结果:多次刺激之间的间隔时间是影响多次TENS治疗慢性炎症痛的重要因素。在单发性关节炎发病的不同时期,治疗的适宜间隔时间有所不同。急性期(1～3周),每周2次效果最优;而在稳定的慢性迁延期(4～9周)内,每周1次较好。

芬太尼静脉与皮下病人自控镇痛用于心脏手术后镇痛疗效的随机对照研究

目的 :对经静脉与皮下芬太尼病人自控镇痛的疗效、安全性及实用性进行评价。方法 :将 64例ASAⅠ～Ⅱ级心脏手术后病人随机分为病人自控静脉镇痛 (PCIA)与病人自控皮下镇痛 (PCSA)组 ,其中PCIA组 31例 ,PCSA组 33例。药物为每毫升含芬太尼 2 5μg和利多卡因 1 0mg的混合液。PCA设置 :负荷量 2ml;单次剂量 1ml;背景剂量 0 .1ml/h ;小时限量 8ml/h ;锁定时间 3min。入选本研究的适应证是拔除气管导管后 8h内安静或咳嗽时疼痛视觉模拟评分在 3分以上 ,且无PCA禁忌证者。于负荷量注射完毕后记录镇痛起效时间 ,并于拔除气管导管后 2 4 ,48,72h记录各项指标。结果 :两组病人的一般情况及各项生命体征之间无显著性差异 (P >0 .0 5) ,两组间芬太尼用量、镇痛满意度及副作用无显著性差异。PCSA组镇痛起效时间显著长于PCIA组 (P <0 .0 1 ) ,PCSA组PCA报警次数百分率显著低于PCIA组 (P <0 .0 1 )。结论 :芬太尼PCIA与PCSA的疗效和副作用无显著性差异 ,但PCSA更方便简单 。

经皮神经电刺激治疗慢性炎症痛的适宜参数探讨之二:不同强度的疗效比较

通过比较观察不同强度的经皮神经电刺激(TENS)对慢性单发性关节炎症痛的疗效,借以寻找较适宜的TENS治疗强度。结果:刺激强度可影响多次TENS治疗慢性痛的效果。在每周1次和每周2次治疗的安排下,对3种刺激强度的疗效进行比较,发现:多次TENS治疗慢性炎症痛时,较弱刺激的疗效较好。

交感维持性神经源性疼痛

一、前言神经源性疼痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｉｎ或ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃｐａｉｎ）是指由中枢或外周神经系统损伤或疾病所引起的疼痛综合征，以自发性疼痛（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｐａｉｎ）、痛觉过敏（ｈｙｐｅｒａｇｅｓｉａ）和痛觉超敏（ａｌｏｄｙｎｉ...

中枢神经降压素对大鼠胃应激性溃疡的作用及多巴胺的关系

目的和方法：用双侧中央杏仁核微量注射等方法，观察中枢内神经降压素（ＮＴ）在大鼠束缚加水浸诱发的应激性胃溃疡中的作用及其与多巴胺（ＤＡ）的关系。结果：（１）双侧中央杏仁核内注射微量ＮＴ或ＤＡ可显著减轻水浸加束缚应激所诱发的胃粘膜损伤（Ｐ＜００１）；（２）双侧中央杏仁核内注射微量抗ＮＴ血清，可诱发非应激大鼠出现胃溃疡；（３）双侧中央杏仁核注射ＮＴ前，双侧中央杏仁核注射微量６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）或腹腔注射氟哌啶醇（ｈａｌ）均可逆转ＮＴ的胃粘膜保护作用。结论：中央杏仁核内ＮＴ对胃应激性溃疡的细胞保护作用主要是通过调节多巴胺能神经传递实现的。

急性吗啡耐受大鼠脑内孤啡肽含量和释放量变化的研究

目的：应用放射免疫分析方法检测急性吗啡耐受过程中大鼠脑室灌流液、中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）及杏仁核中孤啡肽（ＯＦＱ）免疫活性（ｉｒ）的动态变化。结果：（１）每２小时皮下注射盐酸吗啡１次（７ｍｇ／ｋｇ），连续注射８次，造成急性吗啡耐受。此组大鼠脑室灌流液中ＯＦＱｉｒ较生理盐水对照组升高４０％，差异显著（Ｐ＜０．０５）。（２）皮下注射吗啡１、６、８次的大鼠ＰＡＧ中ＯＦＱｉｒ含量呈逐渐增长趋势，分别较生理盐水组升高９％（Ｐ＞０．０５）、３５％（Ｐ＜０．０５）和６０％（Ｐ＜０．０１）。（３）皮下注射１次吗啡的大鼠杏仁核中ＯＦＱｉｒ与生理盐水组相比，降低１１％，但无统计学意义；至第８次吗啡注射后较对照组升高４１％（Ｐ＜０．０５）。结论：多次注射吗啡能引起大鼠脑内ＯＦＱ含量和释放增多，结合以往关于ＯＦＱ在脑内对抗吗啡镇痛的事实表明内源性ＯＦＱ可能参与急性吗啡耐受的形成。

体表电刺激在正常和麻醉状态下肌松作用的研究

目的：应用韩氏穴位神经刺激仪（ＨＡＮＳ）进行１００Ｈｚ体表电刺激，观察是否有肌松作用。方法和结果：（１）抬腿读秒试验：健康自愿受试者２０例，分别在０Ｈｚ、２Ｈｚ、１００Ｈｚ和２／１００ＨｚＨＡＮＳ刺激前后进行４５°抬腿试验。发现２／１００Ｈｚ和１００ＨｚＨＡＮＳ刺激３０ｍｉｎ后抬腿时间较刺激前减少２０．７％和４０．９％（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１）；（２）临床麻醉观察：选择需全麻的腹部手术ＡＳＡⅠ～Ⅱ级患者６０例，随机分成ＨＡＮＳ组（静脉全麻＋ＨＡＮＳ）和对照组（单纯静脉全麻），每组３０例。两组的首次全麻药和肌松药的用量及一般麻醉方法均一致，并全程进行肌松和生命体征监测，当肌松的ＴＲ值＞０．２５或麻醉机气道压力＞２ｋＰａ时，追加首次肌松药和全麻药量的半量，使手术始终处于良好的肌松和平稳的麻醉状态。ＨＡＮＳ组于全麻诱导前２０ｍｉｎ开始１００ＨｚＨＡＮＳ体表电刺激。结果表明，ＨＡＮＳ组的肌松药用量较对照组减少３５％（Ｐ＜０．０１），全麻药较对照组减少２０％（Ｐ＜０．０５）。结论：健康受试者抬腿读秒试验和腹部手术临床麻醉的观察结果表明，ＨＡＮＳ确有明显的肌松作用，具有临床应用前景。

穴位体表电刺激治疗肩关节周围炎和腰椎间盘突出症的临床对照研究

本文参照针灸理论和临床经验选取穴位,对53 名肩周炎患者和27 名腰椎间盘突出症患者采用韩氏穴位神经刺激仪( HANS) 进行体表神经电刺激(Transcutaneous Electric Nerve Stimulation , TENS) 治疗,观察其治疗效果,并随机选取同一时期肩周炎患者21 例、腰椎间盘脱出症患者24 例,采用常规理疗作为对照。结果表明,(1) 穴位TENS治疗对肩周炎和腰椎间盘突出症均有即时和长期的止痛作用,其即时止痛效果显著优于常规理疗;(2) 在改善关节功能及提高日常活动能力方面,TENS的疗效与常规理疗相近似。我们认为,鉴于HANS 治疗简便易行,建议在临床上得到更广泛的应用;该法如与常规理疗配合应用。

帕金森病基因治疗的研究进展

基因治疗帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)的研究是神经科学领域的热点之一。靶基因的导入可以增加多巴胺的合成 ,降低多巴胺神经元的死亡。靶基因编码多巴胺合成途径中重要的酶如酪氨酸羟化酶(TyrosineHydroxylase,TH)和芳香族氨基酸脱羧酶(AromaticL -AminoacidDecarboxylase,AADC)以及神经元保护分子如神经营养因子和抗凋亡蛋白。基因的导入主要有2种方式 :直接转移(InVivo)和离体转移(ExVivo)。本文综述了不同的基因转染系统。虽然目前PD的基因治疗还停留在实验室阶段 ,但现有的结果是令人鼓舞的。

GDNF重组腺病毒对损伤运动神经元的保护作用

目的：观察携带胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）基因的重组腺病毒（ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ）对损伤运动神经元的保护作用。方法：采用培养运动神经元的谷氨酸损伤模型，评价ＧＤＮＦ重组腺病毒对损伤运动神经元的影响，指标是运动神经元计数。结果：（１）建立了运动神经元谷氨酸损伤模型：当培养液中加入０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的谷氨酸，作用２４～４８ｈ后，运动神经元数目较对照组显著减少（Ｐ＜０．０１）；（２）携带ＧＤＮＦ基因的重组腺病毒可显著减轻谷氨酸导致的运动神经元损伤。结论：腺病毒介导的ＧＤＮＦ表达对损伤的运动神经元具有保护作用。

等高线法研究八肽胆囊收缩素与血管紧张素Ⅱ在拮抗大鼠吗啡镇痛中的协同作用

目的：探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８）与血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）在拮抗吗啡镇痛时是否相互协同。方法：大鼠皮下注射吗啡（５ｍｇ／ｋｇ）１０ｍｉｎ后，再向侧脑室单独注射ＣＣＫ８或ＡⅡ，以及同时注射二者不同剂量和不同比例的混合物，观察其对吗啡镇痛效应的影响。结果：联合应用ＣＣＫ８与ＡⅡ所产生的拮抗吗啡镇痛的作用明显大于单独使用ＣＣＫ８或ＡⅡ。结论：ＣＣＫ８和ＡⅡ以一定的比例联合应用，其拮抗吗啡镇痛的作用可以协同。

炎症痛敏大鼠背根神经节细胞I_h通道特征的变化及其参与痛敏的可能机制

目的 :超极化激活电流 (Ih)通道对神经元动作电位的爆发起重要作用 ,本工作检验其在炎症痛中的作用。方法 :用完全弗氏佐剂诱发关节炎模型 ,用全细胞电流钳、电压钳技术研究炎症后大鼠背根神经节 (DRG)细胞Ih 通道的特性。结果 :炎症大鼠DRG细胞Ih 通道的翻转电位、最大电流密度没有改变 ,说明Ih 通道的结构及表达的数量没有变化。但Ih 通道的半激活电位向去极化移动 ,说明Ih 通道的活性增加 ;电流钳记录表明 ,炎症大鼠DRG神经元中 ,具有Ih 的中、小型细胞动作电位增宽 ,小型细胞动作电位频率增加。结论 :上述变化可以加速细纤维传入神经递质的释放 ,从而放大了伤害性感觉信号 。

Neurturin:与GDNF相关的新的神经营养因子

１９９６年１２月，Ｐ．Ｔ．Ｋｏｔｚｂａｕｅｒ等在中国仓鼠卵巢细胞的条件培养基中发现一种新的神经营养因子Ｎｅｕｒｔｕｒｉｎ（ＮＴＮ），并成功克隆了人及小鼠ＮＴＮ基因。此神经营养因子能促进颈上神经节交感神经元存活，其氨基酸序列与胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）有４２％的同源性，二者共同构成转化生长因子β（ＴＧＦβ）超家族一个新的亚家族。ＮＴＮ受体α则是通过糖基化磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）连结于细胞膜表面的胞外蛋白，与ＮＴＮ有极高的亲和力，二者结合后激活细胞内原癌基因ｃｒｅｔ编码产物ＲＥＴ蛋白，使其酪氨酸磷酸化。

小鼠低频和高频电针镇痛阿片机制的探讨

目的 :探讨小鼠低频和高频电针镇痛的阿片机制。方法 :采用交叉耐受和受体药理学方法 ,以甩尾潜伏期增加的百分数作为评判电针镇痛效果的指标。结果 :( 1 )吗啡镇痛与 2Hz电针镇痛之间存在交叉耐受。 ( 2 ) 2 /1 0 0Hz电针镇痛分别与 2Hz、1 0 0Hz电针镇痛存在交叉耐受 ;而 2Hz电针镇痛与 1 0 0Hz电针镇痛不存在交叉耐受。 ( 3)CCK受体拮抗剂L36 5 ,2 6 0可显著加强 1 0 0Hz电针镇痛效应 ,对 2Hz电针镇痛无明显影响。 ( 4)L36 5 ,2 6 0 ( 0 .5mg/kg)可翻转小鼠 1 0 0Hz急性 ( 6h)电针耐受和慢性 ( 6d)电针耐受。结论 :( 1 )中枢阿片受体参与了小鼠电针镇痛 ,低频和高频电针镇痛分别由不同类型的阿片受体介导 ;( 2 )内源性CCK对小鼠 1 0 0Hz电针镇痛起对抗作用并参与电针耐受。由此可见 ,小鼠与大鼠电针镇痛机制基本相似。这一认识为应用基因敲除技术研究电针镇痛分子机制打下了基础。

大鼠踝关节疼痛试验评分指标的改进

目的：屈关节疼痛试验是测定关节痛的重要方法，通常以动物的嘶叫反应为指标，但结果不够稳定和全面。本工作将缩腿反应也作为踝关节屈关节疼痛试验评分的指标，在单发佐剂性关节炎慢性痛动物模型上观察了该种评分的稳定性以及对镇痛药的敏感性；对嘶叫、缩腿和总评分的均值和离散程度进行了比较分析。结果：（１）屈关节疼痛试验的缩腿评分在动物进入特制筒固定后３０ｍｉｎ开始测定，正常踝关节偶有缩腿反应，评分接近于０；炎侧踝关节评分较健侧和正常大鼠踝关节显著升高，显示出关节痛的存在；在观察的４ｈ内评分保持稳定；吗啡和消炎痛引起的评分变化具有良好的剂量依赖性。（２）嘶叫评分较低，个体差异较大；缩腿和总评分的变异系数较小。结论：缩腿反应可作为衡量关节痛的客观指标；但嘶叫和缩腿综合的总评分更为全面，可弥补两种评分各自的不足，建议用嘶叫和缩腿两者的总评分作为屈关节疼痛试验的评分标准。