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肾癌相关基因克隆——肾癌cDNA消减文库的构建
被引量:
7
1
作者
张强
毛泽彬
+2 位作者
张志文
辛殿旗
郭应禄
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000年第3期301-304,共4页
应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库 .分别从肾癌及正常肾细胞系中提取 poly (A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,经酶切成平均大小为 4 0 0~ 60 0bp的片段 ,将肾癌cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接...
应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库 .分别从肾癌及正常肾细胞系中提取 poly (A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,经酶切成平均大小为 4 0 0~ 60 0bp的片段 ,将肾癌cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与正常肾cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后 ,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 .构建成功具有高消减效率的人肾癌cDNA消减文库 ,非特异性cDNA片段被有效地消减 ,特异表达的cDNA得到富集 .文库扩增后得到 650 0个克隆 ,随机挑取 3 50个制备质粒 ,酶切分析均得到 4 0 0~ 60 0bp插入片段 .所构建的人肾癌cDNA消减文库为进一步大批量筛选。
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关键词
抑制性消减杂交
肾癌
CDNA消减文库
基因克隆
下载PDF
职称材料
Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达
被引量:
8
2
作者
臧桐
庄立岩
+2 位作者
张志文
辛殿旗
郭应禄
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000年第10期1057-1061,共5页
对Wnt5A,Wnt5A受体Frizzled5(hFz5)及其信号传导系统下游成分──致癌性β-连环蛋白(β-catenin)在肾癌细胞系 GRC-1中表达的变化进行了观察.半定量RT-PCR结果表明 GRC-1细胞系...
对Wnt5A,Wnt5A受体Frizzled5(hFz5)及其信号传导系统下游成分──致癌性β-连环蛋白(β-catenin)在肾癌细胞系 GRC-1中表达的变化进行了观察.半定量RT-PCR结果表明 GRC-1细胞系中Wnt5A和hFz5的mRNA水平明显高于正常肾细胞系,这一发现被原位杂交结果证实.进一步的研究发现β-连环蛋白mRNA水平在GRC-1细胞系无明显改变,但Western blot分析观察到胞浆中β-连环蛋白的含量明显高于正常肾小管细胞(P<0.01).应用特异性免疫细胞化学和SSCP等技术发现,GRC-1细胞中β-连环蛋白的高表达是由Wnt5A/hFz5高表达引起的,而不是该传导系统中结肠腺性息肉基因(APC)和β-连环蛋白基因突变的结果.上述结果提示:原癌基因Wnt及其受体的高表达可能是GRC-1细胞恶性增生的原因之一。
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关键词
Wnt/Frizzled
APC
信号传导
肾癌
细胞系
原文传递
β-环连蛋白在肾癌中的表达
被引量:
1
3
作者
臧桐
庄立岩
+2 位作者
张志文
辛殿旗
郭应禄
《中华泌尿外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第10期581-582,共2页
目的 探讨β环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用。 方法 采用免疫组织化学方法对26 例肾癌患者手术标本进行研究。 结果 癌组织细胞胞浆内β环连蛋白表达明显较正常组织内高,而且与肾肿瘤的临床分期有关,肿瘤分期越高,...
目的 探讨β环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用。 方法 采用免疫组织化学方法对26 例肾癌患者手术标本进行研究。 结果 癌组织细胞胞浆内β环连蛋白表达明显较正常组织内高,而且与肾肿瘤的临床分期有关,肿瘤分期越高,癌细胞内β环连蛋白的表达也越强,pT3 和pT4 肿瘤较pT1 和pT2 肿瘤表达明显增加( P< 0 .01) 。 结论 细胞内β环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关,而且可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。
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关键词
肾肿瘤
癌症
Β-环连蛋白
肾癌
基因表达
原文传递
题名
肾癌相关基因克隆——肾癌cDNA消减文库的构建
被引量:
7
1
作者
张强
毛泽彬
张志文
辛殿旗
郭应禄
机构
北京医科大学
第一
临床
医院
北京医科大学
生物化学与分子生物学系
北京医科大学
生理系
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000年第3期301-304,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 !(3 9870 841 )
文摘
应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库 .分别从肾癌及正常肾细胞系中提取 poly (A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,经酶切成平均大小为 4 0 0~ 60 0bp的片段 ,将肾癌cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与正常肾cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后 ,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 .构建成功具有高消减效率的人肾癌cDNA消减文库 ,非特异性cDNA片段被有效地消减 ,特异表达的cDNA得到富集 .文库扩增后得到 650 0个克隆 ,随机挑取 3 50个制备质粒 ,酶切分析均得到 4 0 0~ 60 0bp插入片段 .所构建的人肾癌cDNA消减文库为进一步大批量筛选。
关键词
抑制性消减杂交
肾癌
CDNA消减文库
基因克隆
Keywords
kidney neoplasms carcinoma, suppression subtractive hybridization, library
分类号
R737.11 [医药卫生—肿瘤]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达
被引量:
8
2
作者
臧桐
庄立岩
张志文
辛殿旗
郭应禄
机构
北京医科大学第一临床医院泌尿外科研究所
北京医科大学
基础医学院生理系
出处
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000年第10期1057-1061,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目!(批准号:39870841)
文摘
对Wnt5A,Wnt5A受体Frizzled5(hFz5)及其信号传导系统下游成分──致癌性β-连环蛋白(β-catenin)在肾癌细胞系 GRC-1中表达的变化进行了观察.半定量RT-PCR结果表明 GRC-1细胞系中Wnt5A和hFz5的mRNA水平明显高于正常肾细胞系,这一发现被原位杂交结果证实.进一步的研究发现β-连环蛋白mRNA水平在GRC-1细胞系无明显改变,但Western blot分析观察到胞浆中β-连环蛋白的含量明显高于正常肾小管细胞(P<0.01).应用特异性免疫细胞化学和SSCP等技术发现,GRC-1细胞中β-连环蛋白的高表达是由Wnt5A/hFz5高表达引起的,而不是该传导系统中结肠腺性息肉基因(APC)和β-连环蛋白基因突变的结果.上述结果提示:原癌基因Wnt及其受体的高表达可能是GRC-1细胞恶性增生的原因之一。
关键词
Wnt/Frizzled
APC
信号传导
肾癌
细胞系
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
β-环连蛋白在肾癌中的表达
被引量:
1
3
作者
臧桐
庄立岩
张志文
辛殿旗
郭应禄
机构
北京医科大学第一临床医院泌尿外科研究所
出处
《中华泌尿外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第10期581-582,共2页
文摘
目的 探讨β环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用。 方法 采用免疫组织化学方法对26 例肾癌患者手术标本进行研究。 结果 癌组织细胞胞浆内β环连蛋白表达明显较正常组织内高,而且与肾肿瘤的临床分期有关,肿瘤分期越高,癌细胞内β环连蛋白的表达也越强,pT3 和pT4 肿瘤较pT1 和pT2 肿瘤表达明显增加( P< 0 .01) 。 结论 细胞内β环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关,而且可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。
关键词
肾肿瘤
癌症
Β-环连蛋白
肾癌
基因表达
Keywords
Kidney neoplasms Carcinoma β catenin
分类号
R737.110.2 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肾癌相关基因克隆——肾癌cDNA消减文库的构建
张强
毛泽彬
张志文
辛殿旗
郭应禄
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000
7
下载PDF
职称材料
2
Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达
臧桐
庄立岩
张志文
辛殿旗
郭应禄
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000
8
原文传递
3
β-环连蛋白在肾癌中的表达
臧桐
庄立岩
张志文
辛殿旗
郭应禄
《中华泌尿外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999
1
原文传递
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