电泳分析基因差异片段的方法学研究

提高不同长度基因片段的分辨率是基因分析的关键问题，我们对电泳分辨基因差异片段的方法在制胶、染色及凝胶保存技术上进行了三个方面的改进，建立了＂凝胶干燥长期保存法＂，能客观反映实验结果，重复性好，对一些目前尚未认识的片段，留下了原始档案资料，供将来进一步分析；干燥胶片还可照像、投影、复印和激光扫描。

淋巴系统肿瘤免疫球蛋白和T细胞受体重排基因的指纹图谱特征

目的确定淋巴系统肿瘤的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的特征。方法：用PCR和单链构象多态性等分析108例各类淋巴系统肿瘤。结果：不同患者各有特征性指纹图谱。54％的急性淋巴细胞白血病（ALL）和43％多发性骨髓瘤（MM）存在IgH或者TCRγ双等位基因重排，6例ALL和3例MM存在寡克隆性。结论：指纹图谱可判断恶性克隆之间的基因差异和寡克隆性。

分子杂交技术检测免疫球蛋白基因重排的意义

目的：探讨分子杂交技术检测免疫球蛋白基因重排的意义。方法：采用Ｊ＿Ｈ和Ｃ＿λ探针，经Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ印迹法检测１２例确诊或疑诊血液系统肿瘤患者的２０份淋巴结、血和骨髓细胞的Ｉｇ基因重排。结果：发现Ｂ－ＮＨＬ、ＣＬＬ、ＨＣＬ和ＭＭ均有不同于胚系的重排模式，而淀粉样变性、ＣＭＬ、Ｔ－ＡＬＬ和鼻咽癌为胚系模式。结论：克隆性Ｉｇ基因重排仅见于Ｂ细胞，可作为Ｂ细胞克隆性增殖的证据，用于Ｂ细胞恶性增生性疾病的诊断，也可以用于分析Ｂ细胞肿瘤的克隆来源。

检测IgH和TCRγ基因重排对NHL分期参考价值的探讨

目的:探讨以IgH和TCRγ基因重排为标志对NHL患者临床分期的参考价值.方法:多聚酶链反应(PCR)技术结合限制性酶谱分析患者骨髓和淋巴结细胞DNA IgH和TCRγ基因重排的克隆性.结果:形态学无骨髓浸润的23例NHL患者发现6例(26.1%)具单克隆基因重排.结论:IgH和TCRγ基因重排作为分子标志对形态学检查不能确认骨髓浸润的NHL患者的分期诊断有一定参考价值.

应用免疫球蛋白基因重排分析多发性骨髓瘤的克隆起源

多发性骨髓瘤(MM)曾长期被认为是以浆细胞浸润骨髓并分泌M蛋白为特征的浆细胞恶性疾病。免疫球蛋白(Ig)轻链表达和细胞免疫表型的研究发现,MM可能起源于比浆细胞更早的B淋巴细胞,提出MM可能是由B淋巴细胞克隆性增生引起的。80年代后期,随着分子生物学研究的进展,对MM克隆起源的研究也进入基因水平,同时随方法学的改进而不断深入。每一种Ig基因重排对于某种B细胞是特异的,克隆性的Ig基因重排可作为恶性增殖的B淋巴细胞所特有的克隆标记。

多发性骨髓瘤克隆起源的研究

为了解外周血中肿瘤克隆细胞的分化阶段，进一步研究ＭＭ（多发性骨髓瘤）发病机理，采用针对Ｂ细胞不同分化阶段抗原ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３８的单克隆抗体，用ＡＰＡＡＰ法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）同时检测１７例外周血中不含浆细胞的ＭＭ患者骨髓及外周血的免疫表型，其中１０例外周血表达浆细胞抗原增高（Ｐ＜０．００１）且与骨髓一致。９例外周血表达ＣＤ３８和ＣＤ４５ＲＯ，３例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ，１例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＡ和ＣＤ１０。此结果显示ＭＭ患者外周血的Ｂ系抗原表达既与骨髓具有一致性，又具多样性，提示ＭＭ的外周血中存在多分化阶段的肿瘤前体细胞，呈现自早期Ｂ细胞，经活化Ｂ细胞及晚期Ｂ细胞向前浆细胞的持续分化过程，并验证了文献关于ＭＭ发病途径的推测。

急性粒细胞白血病化疗与体内细胞凋亡的关系

为了解白血病患者化疗期间发生体内细胞凋亡的状况。利用原位末端转移酶（ＴｄＴ）双荧光细胞流式仪法及ＤＮＡ阶梯凝胶电泳法，对１０例临床白血病患者化疗前、化疗间、化疗后的外周血单个核细胞进行了细胞凋亡的研究。结果显示：化疗前均无明显的细胞凋亡（０～２．９％），获得完全缓解和部分缓解的患者化疗期间（化疗３０～７２小时）凋亡细胞明显增高（１１．４％～７２．０％），化疗后基本未检测到凋亡细胞（０～２．９％），而４例化疗期间凋亡细胞很少出现者未达到缓解，说明有效药物才能导致细胞凋亡。用ＤＮＡ阶梯凝胶电泳法患者化疗前、中、后均未检测到ＤＮＡ“阶梯”，所以这种方法检测体内的细胞凋亡不够敏感。用原位ＴｄＴ荧光流式细胞仪，分析观察体内细胞凋亡有可能成为早期观察临床患者用药疗效的指标。

铁粒幼细胞贫血家系致病基因的连锁分析和造血特征

目的分析铁粒幼细胞贫血家系的致病基因和研究患者骨髓造血特征。方法用ＰＣＲ扩增家系中２例患者和７例正常人的位于Ｘｐ１１．２－１１．２１的ＤＸＳ９９１和ＤＸＳ１１９９，以及位于Ｘｐ２２．１３的ＤＸＳ１２２６微卫星片段，经变性凝胶电泳后作连锁分析；培养患者骨髓造血细胞，观察红系、粒系和巨核细胞系集落生成的特征。结果该家系患者与ＤＸＳ９９１和ＤＸＳ１１９９连锁，而这两个片段代表附近的ＡＬＡＳ２基因；与ＡＬＡＳ２基因距离较远的ＤＸＳ１２２６则不连锁。造血细胞培养研究发现，患者红系集落的生成旺盛，不加ＥＰＯ等造血因子就可自发生长；一周后红系统集落萎缩，集落大小明显小于正常对照。结论本家系属于ＡＬＡＳ２基因异常的Ｘ性连锁遗传病。患者的干细胞功能大致正常。

白血病染色体易位断裂点区域微卫星的不稳定性和杂合性丢失

目的探讨白血病染色体微卫星不稳定性（ＭＳＩ）及杂合性丢失（ＬＯＨ）。方法用白血病易位断裂点区域附近的多个微卫星位点检测３０例不同类型白血病基因的不稳定性及杂合性丢失。结果２１例白血病存在ＭＳＩ或者ＬＯＨ。其中１５例急性白血病中１１例示１个以上位点有ＭＳＩ；６例慢性粒细胞性白血病中４例患者在３个以上位点有ＭＳＩ；１５例急性白血病中２例有ＬＯＨ，比其他白血病发生率高。结论白血病和骨髓增生异常综合征均存在较高的基因不稳定性。

真性红细胞增多症患者T细胞的克隆特点

目的 了解真性红细胞增多症（ＰＶ）患者外周血Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ２４ 个亚家族基因的表达及其克隆特点。方法 采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测３ 例ＰＶ 患者外周血单个核细胞ＴＣＲＶβ２４ 个亚家族基因表达情况；采用基因扫描分析Ｔ细胞的克隆特点。结果 ３ 例ＰＶ患者外周血仅表达４ ～１４ 个Ｖβ亚家族，主要为Ｖβ２ 、Ｖβ３ 、Ｖβ１６ 、Ｖβ２１ 和Ｖβ２３ ；２ 例患者表达的Ｖβ３ 和Ｖβ２３Ｔ细胞为克隆性增殖。结论 ＰＶ 患者外周血ＴＣＲＶβ亚家族的优势表达和克隆性增殖可能是患者体内对抗恶性细胞的免疫反应特征。

用PCR检测29例白血病患者微卫星杂合性丢失

许多肿瘤都发现存在微卫星的杂合性丢失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）现象［１］。基因丢失的部分往往存在抑癌基因。白血病常有染色体易位，形成易位的断裂点区域抑癌基因的丢失可能与血细胞恶变的发生有关。我们用分布在不同染色体上断裂点区域...