阳离子脂质体介导的HSV-tk自杀基因疗法的体内外抗肝癌作用

为研究阳离子脂质体介导HSV-tk自杀基因系统的体内外抗肝癌作用,本课题用基因重组技术构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为pLXT。用Lipofectin介导转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选抗性克隆及流式细胞仪分析,获得了持续表达HSV-tk的克隆细胞SM/tk。~3H-TdR掺入法测定表明HSV-tk/ACV系统对SM/tk细胞具有强杀伤力。将Lipofectin-pLXT复合物直接注射于鼠肝癌细胞(H22)实体瘤内,ACV治疗后监测抑瘤率,发现脂质体介导pLXT、ACV治疗组及裸pLXT注射、ACV治疗组平均瘤体积均显著小于其它六组对照组(P【0.001,P【0.05),前两者比较亦有显著差异(P【0.02)。空载体转染组和阴性对照组平均瘤体积及平均瘤重均无显著差异(P】0.05)。这些结果表明阳离子脂质体介导重组逆转录病毒载体基因转染的方法简便、安全、有效,且可使目的基因获得持续表达;在体内HSV-tk/ACV系统具有强的细胞毒作用,提示存在着强的旁观者效应。此外,瘤体内直接注射裸HSV-tk基因的治疗也有效。

应用阳离子脂质体及裸HSV-TK基因瘤体内直接注射比较研究

目的 比较研究阳离子脂质体及裸HSV TK基因瘤体内直接注射治疗肝癌的效果 ,探讨较好的基因转移方法。方法 用阳离子脂质体Lipofectin tk基因复合物及裸pLXT于小鼠瘤体内直接注射 ,观察肿瘤的生长情况。结果 瘤体内基因转染后脂质体介导的pLXT、ACV治疗组及裸pLXT注射、ACV治疗组平均瘤体积均显著小于其它六组对照组 (P <0 0 0 1,P <0 0 5 ) ,前两者比较亦有显著差异 (P <0 0 2 )。结论 阳离子脂质体介导的HSV tk基因转移的方法简便、安全、有效。裸tk基因瘤体内直接注射效果亦很明显。

林县食管癌组织和非癌食管组织差异DNA片段的克隆研究

目的寻找食管癌发生的相关基因，为食管癌易感个体的筛查和早期诊断提供分子标志物。方法对来源于食管癌高发区河南省林县的１２例配对食管癌组织和非癌食管组织ＤＮＡ，应用随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）技术分离差异ＤＮＡ片段，进行克隆、测序和序列分析。根据序列的酶切位点分析，选择ＤｒａⅠ和ＨｉｎｄⅢ内切酶，对配对的食管癌组织和非癌食管组织ＤＮＡ酶切，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析。结果１２例配对食管癌组织和非癌食管组织中，３例癌组织有１．０ｋｂ左右的差异随机扩增片段，而相应的非癌组织缺如。其中的１１Ｔ差异ＤＮＡ片断经测序和序列的同源性分析，基因文库内无同源序列。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交显示，配对的食管癌组织和非癌食管组织有明显差异。结论１１Ｔ差异ＤＮＡ片段是食管癌变过程中所发生的改变。是否为一个新的候选癌基因或癌基因标志物。