胚胎及新生期大鼠胃肠道胰岛淀粉样多肽与生长抑素的免疫组织化学定位

为探讨胚胎期及新生期大鼠胃肠道的胰岛淀粉样多肽（ＩＡＰＰ）与其他生物活性物质的关系，用免疫组织化学ＰＡＰ法，在相邻切片上分别显示第１５～２１ｄ大鼠胚胎及新生大鼠胃肠道的ＩＡＰＰ免疫反应性（ＩＲ）细胞和生长抑素（ＳＳ）ＩＲ细胞，观察了ＩＡＰＰ与ＳＳ在胚胎及新生大鼠胃肠道的定位分布。结果表明：第１５ｄ胚胎，胃肠道内未见ＩＡＰＰ－和ＳＳ－ＩＲ细胞。第１７ｄ胚胎，ＩＡＰＰ－与ＳＳ－ＩＲ细胞均很少，免疫染色较弱，着色较浅，免疫反应性细胞散布于分化未完全的肠上皮细胞间。胚胎１９ｄ，ＩＡＰＰ－和ＳＳ－ＩＲ细胞出现于胃和小肠，以十二指肠为多。胚胎第２１ｄ及新生期，胃肠道各段均可见到ＩＡＰＰ－和ＳＳ－ＩＲ细胞。经邻片比较证明，胚胎第１９ｄ始至新生期，十二指肠和空肠中部分ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞与部分ＳＳ－ＩＲ细胞的定位相同，表明ＩＡＰＰ与ＳＳ在十二指肠和空肠Ｄ细胞中有共存。胃、回肠、结肠和直肠未见到ＩＡＰＰ与ＳＳ有细胞内共存的现象。

下颌下腺切除对大鼠胃窦粘膜G、D细胞影响的免疫组织化学研究

用免疫组织化学方法观察了下颌下腺切除后，胃窦粘膜胃泌素细胞（Ｇ细胞）和生长抑素细胞（Ｄ细胞）的分布、形态和数量及Ｇ／Ｄ细胞比值的变化。结果显示：下颌下腺切除后１０～２１ｄ，Ｇ细胞密度增大，常三五成群，分布区域变宽。细胞计数显示，术后１０～２１ｄ，Ｇ细胞数量明显增多（Ｐ＜０．０１）。术后１４ｄ，Ｄ细胞数量明显减少（Ｐ＜０．０１）；术后２１ｄ，Ｄ细胞数量有所增加，但仍少于正常组（Ｐ＜０．０５）。术后１０ｄ，Ｇ／Ｄ细胞比值上升（Ｐ＜０．０５）；术后１４～２１ｄ，比值明显升高（Ｐ＜０．０１）。实验结果表明：下颌下腺切除可致Ｇ、Ｄ细胞的分布、数量和Ｇ／Ｄ细胞比值发生明显变化，这可能提示下颌下腺与Ｇ、Ｄ细胞之间有功能上的联系。

大鼠实验性腹膜炎自愈期间肾上腺皮质组织化学变化的研究

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，分为实验性腹膜炎组和空白对照组。实验组大鼠通过腹腔注射剂量为０．６５ｍｌ／ｋｇ的无菌松节油，制成大鼠急性腹膜炎模型；对照组大鼠未经任何处理。将动物于注射后１、３、５、７、１０ｄ处死，取其肾上腺做组织化学染色。注射后１、３、５ｄ，束状带和网状带细胞内脂滴和胆固醇的含量均降低，琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和３β－羟基类固醇脱氢酶（３β－ＨＳＤ）的活性增强。这些变化以注射后３ｄ最明显并以束状带显著，５ｄ后开始恢复，于注射后７ｄ、１０ｄ时恢复正常。结果表明，在大鼠实验性腹膜炎自愈过程中，类固醇激素特别是糖皮质激素的合成增强，提示糖皮质激素可能参与了腹膜炎自愈过程的调节。

一氧化氮与一氧化氮合酶(NO,NOS)在胎盘和脐带中的存在及其与妊娠的关系

本文概述了近年来有关一氧化氮（ＮＯ）及其合成酶（ＮＯｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）在子宫、胎盘、脐带内的存在及与妊娠生理、病理关系的研究进展。用ＮＡＤＰＨｄ酶组化法和免疫组化法、分子生物学技术等方法发现，正常子宫内膜、肌层、血管、神经束、脐动脉、脐静脉、胎盘绒毛血管及合体滋养层细胞均可见ＮＯＳ的表达。认为这些组织内ＮＯＳ产生的ＮＯ对于保持妊娠期子宫静息状态、降低母体血管及胎盘循环的阻力、维持母体正常妊娠状态及胎儿生长发育有重要作用。ＮＯ的产物异常可导致先兆子痫、胎儿宫内生长迟缓等并发症的发生。对子宫、胎盘、脐带内ＮＯ、ＮＯＳ与妊娠关系的研究，将为生育控制和妊娠疾病的研究和治疗提供新的思路和手段。

大鼠肾小管碱性磷酸酶动力学特征的组织化学研究

采用大鼠肾皮质新鲜冰冻连续切片，厚６μｍ。对相邻切片进行不同时间、不同ｐＨ值和不同底物浓度的Ｇｏｍｏｒｉ钙－钴法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。反应后的标本先用ＯｌｙｍｐｕｓＢＨ－２型显微镜Ｃ－３５ＡＤ－２型照相设备中曝光控制器，控制相同的入射光强度，对上述各不同组织化学反应条件的肾皮质，每一切片随机测定１０个视野曝光时间作为灰度参数。用图像分析仪测定同一切片的ＡＫＰ反应产物的平均灰度值和用曝光控制器显示的灰度参数进行相关、回归分析，结果如下：①随着反应时间的延长，灰度值相应增加，５分钟内，反应速度基本呈线性关系，３０分钟时，在光镜下发现反应产物有扩散现象；②在ｐＨ８时反应产物很弱，ｐＨ９和ｐＨ９．４时反应产物的灰度值最大；③随着底物浓度的增高，灰度值相应增加，而底物浓度０．５％～２％比３％～３０％时灰度值显著低；④灰度参数和图像分析的平均灰度呈明显的正相关，并计算出回归方程可以从灰度参数推算出图像分析的平均灰度值。根据实验结果绘制出不同时间反应曲线，不同ｐｈ值反应曲线，不同底物浓度反应曲线和直线相关曲线。可得出最佳反应时间。

显微曝光控制器对大鼠肾碱性磷酸酶组织化学进行定量研究的可行性探讨

采用大鼠肾皮质新鲜冰冻连续切片，厚６μｍ，对相邻切片进行不同时间、ｐＨ值和底物浓度的Ｇｏｍｏｒｉ钙—钴法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。反应后的标本用图像分析仪测试上述不同组织化学反应条件下肾小管ＡＫＰ反应产物的灰度值，进行定量分析。结果：①随着反应时间延长，灰度相应增加；②在ｐＨ７和ｐＨ１１条件下无反应产物，ｐＨ９和ｐＨ９．４时反应产物的灰度值最大；③随着底物浓度的增高，灰度值相应增加。根据上述实验结果绘制出不同时间、ｐＨ值、底物浓度的反应曲线，可得最佳反应时间、最适ｐＨ值和米氏常数。

大鼠生后发育期间胰岛D与A细胞相互关系的形态学观察

①目的观察正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠生后发育期间胰岛生长抑素细胞（Ｄ细胞）与胰高血糖素细胞（Ａ细胞）间形态学关系，以探讨两者间功能调节的机理。②方法正常雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只，分为生后７，１８，４５ｄ及成年组，每组５只。常规石蜡包埋，免疫组织化学ＰＡＰ双重染色，分别显示大鼠胰岛Ｄ细胞与Ａ细胞，光镜观察。③结果胰岛Ｄ细胞突起明显，与Ａ细胞形成胞体－胞体、突起－胞体间的紧密接触，并可见Ｄ细胞呈新月形或其长胞突呈半环状及环状，部分或全部包绕Ａ细胞。外分泌部也可见Ｄ细胞与Ａ细胞接触紧密。生后７ｄ与成年组相比Ｄ细胞与Ａ细胞的相邻百分数具有显著性差异（Ｆ＝４．０６，ｑ＝４．７５，Ｐ＜０．０５），其他各组间差异无显著性（ｑ＝０．６５～３．６２，Ｐ＞０．０５）。④结论Ｄ细胞可能通过旁分泌直接调节Ａ细胞的功能活动。

妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白定位、定量及对胚泡植入的作用

目的 研究妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白（ｌａｍ ｉｎｉｎ，ＬＮ）定位和定量变化及其对胚泡着床的作用。方法 应用间接免疫荧光法、免疫组织化学ＡＢＣ技术及图像分析法进行ＬＮ定位和定量测定；利用子宫内注射ＬＮ抗体的方法探讨ＬＮ对小鼠胚泡植入的作用。 结果 动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜内源性ＬＮ 在上皮和腺基膜及血管内皮基膜均有表达，并随着植入的发生基膜的ＬＮ 表达减弱，而内膜上皮中ＬＮ免疫染色逐渐增强；外源性ＬＮ 对小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜不产生明显影响，层粘连蛋白抗体明显抑制小鼠胚泡着床。 结论 动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜的层粘连蛋白主要存在于基膜，胚泡植入期间内膜上皮细胞内ＬＮ 的含量增加；ＬＮ在促进小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜过程中起重要作用。

EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠的制备

将Epstein－Bars病毒（EBV）膜抗原（MA）BLLF1基因用显微注射法导入昆明种小鼠受精卵的雄性原核以制备转基因小鼠模型。共注射受精卵450枚，存活291枚，植入假孕母鼠的输卵管使之发育，产出仔鼠12只。注射后卵的存活率和仔鼠出生率为65％和4％。用PCR法分析显示5只有BLLF1基因整合，整合率为42％。结果表明携带BLLF1基因的转基因小鼠已经制备成功。该转基因小鼠可作为研究EB病毒致病机理，特别是与自身免疫病关系的动物模型。

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛A细胞的结构和功能变化

目的 探讨胰岛Ａ细胞参与溃疡自愈调节的可能途径。 方法 应用形态计量、放射免疫测定及透射电镜方法，研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛Ａ细胞的面数密度、超微结构及血清胰高血糖素的变化。 结果 与正常组及盐水组比较，Ａ细胞面数密度于溃疡后６ｄ、１０ｄ 明显增加（Ｐ＜ ０．０１）。溃疡后１４ｄ 开始呈减小趋势，２８ｄ 基本恢复正常。Ａ细胞超微结构变化在溃疡后第６～１４ｄ 较明显，主要表现为：（１）细胞核增大，异染色质减少，核周隙扩张；（２）部分Ａ 细胞粗面内质网增多，有的呈板层状排列，有的扩张成囊泡；（３）部分Ａ 细胞内分泌颗粒增多，大小不等，密度不一。血浆胰高血糖素水平从溃疡后１４ｄ 到２１ｄ 呈增高趋势（Ｐ＜ ０．０１），２８ｄ 时接近正常。 结论 胰岛Ａ细胞的形态和功能变化表明，它通过增加其细胞数目及增强其合成与分泌胰高血糖素的功能，积极参与了胃溃疡自愈的调节过程。

大鼠生后发育期间胰岛内胰岛淀粉样多肽与胰岛素共存的形态计量学研究

用免疫组织化学PAP法,在相邻切片上分别显示生后不同时间大鼠胰岛内胰岛淀粉样多肽免疫反应(IAPP-IR)细胞和胰岛素免疫反应(Ins-IR)细胞,对胰岛内IAPP-IR和Ins-IR细胞的数密度(Nv)进行了形态计量学研究。结果表明,IAPP-IR细胞的Nv在生后1d较低,以后逐渐升高,至18d时出现高峰,以后渐降低,45d后趋于稳定。Ins-IR细胞的Nv始终较IAPP-IR细胞的Nv低,但两者在生后不同时期的变化基本呈平行关系,唯有18d时IAPP-IR细胞的Nv较Ins-IR细胞的Nv明显升高(p<0.01)。免疫组织化学法在相邻切片分别显示IAPP-IR和生长抑素免疫反应(SS-IR)细胞证明,IAPP也存在于一部分D细胞内。本研究用形态计量学方法证明了在生后发育期间IAPP与Ins在B细胞内共存,两者表达呈平行关系。同时还证明了IAPP与SS在一部分D细胞内共存。本文对上述结果的意义进行了讨论。

髓复康对脊髓半横断大鼠背根节CGRP表达的影响

目的研究中药髓复康对脊髓损伤后，背根节（ＤＲＧ）神经元降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）表达的影响。探讨髓复康效应的机理。方法造成下胸髓半横断损伤的Ｗｉｓｔａｒ大鼠模型，用免疫细胞化学法和定量图像分析法检查ＣＧＲＰ表达的变化。结果①脊髓半横断引起同侧首、尾侧各３个ＤＲＧ内，ＣＧＲＰ表达的明显和持续性下调；②损伤后给服髓复康冲剂，可以明显减轻，但不能完全阻止，脊髓损伤诱发的ＣＧＲＰ表达下调；③损伤后给服中药补阳还五汤（或用大剂量的氢化考地松）治疗，不能减轻脊髓损伤诱发的ＣＧＲＰ表达下调；④脊髓损伤后服用髓复康的大鼠，其脊髓损伤区有明显的修复再生。结论结果不仅表明ＣＧＲＰ表达的变化与脊髓组织的损伤和再生有一定的关联；而且也表明，髓复康通过对ＣＧＲＰｍＲＮＡ表达的调制，影响神经元ＤＮＡ的合成，可能是它促进脊髓损伤组织的修复再生的机理之一。此假设还需进一步确认。

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测胰岛素mRNA

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，用地高辛标记的ＣＲＮＡ探针在胰腺切片上进行原位杂交，以检测胰岛Ｂ细胞胰岛素基因表达产物ｍＲＮＡ，同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞，进行比较。胰腺经４％多聚甲醛灌注固定，经Ｂｏｕｉｎ液再固定２０ｈ，常规石蜡包埋和切片。经胰岛素ＣＲＮＡ探针杂交的胰腺切片中胰岛Ｂ细胞的胞质和核仁呈阳性反应，阳性信号为蓝色颗粒。瞩岛其他细胞及胰腺腺泡细胞为阴性。方法对照切片中均无阳性信号出现。经与免疫组织化学染色的相邻切片比较证明，原位杂交显示的阳性细胞与胰岛素免疫反应阳性细胞相一致。本研究所用原位杂交方法简单，结果可靠，重复性好。

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_B自发产生低水平IL－6

本室所建立的小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣＢ以５．０×１０５细胞／ｍｌ的浓度在含１０％小牛血清的ＤＭＥ培养液中，５％ＣＯ２３７℃条件下，培养６ｄ，离心收集上清液。以ＩＬ－６依赖细胞株采用ＭＴＴ法对ＭＴＥＣＢ的上清液进行ＩＬ－６活性检测。结果发现ＭＴＥＣＢ能自发产生低水平的ＩＬ－６，其活性单位为１９．２Ｕ／ｍｌ。ＭＴＥＣＢ的ＩＬ－６产生量低于文献报道的其他胸腺上皮细胞株，说明我们建立的胸腺上皮细胞株有新的特点，反映出胸腺上皮细胞存在高度异质性。

人胰腺导管上皮表达胰岛淀粉样多肽

目的 观察人胰腺导管上皮胰岛淀粉样多肽的分布。 方法 4例正常成人胰腺组织石蜡切片 ,用免疫组织化学 PAP方法显示 IAPP- IR细胞 ,Mayer苏木素复染。 结果 发现胰腺小叶间导管、小叶内导管、闰管上皮细胞至泡心细胞均呈胰岛淀粉样多肽免疫反应性 ,阳性物质主要分布于核上方及两侧。 结论 本研究证明人胰腺导管上皮细胞表达胰岛淀粉样多肽 。

甘油蔗糖液对哺乳动物桑椹胚的渗透反应及冻存效果研究

为了提供快速冷冻前胚胎发生部分脱水的科学依据，我们观察了家兔桑椹胚在冷冻保护液中的体积变化。当桑椹胚置于仅含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油液中，桑椹胚立即皱缩，２ｍｉｎ时体积为等渗时体积的５８．９％或５９．６％，１０ｍｉｎ时桑椹胚体积达到等渗时的９０．８％或７６．９％，将这些桑椹胚接着移入含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油加０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖保护液中，桑椹胚再次发生皱缩及膨大变化，１０ｍｉｎ后，桑椹胚体积为等渗体积的８０．８％或８１．９％。在这种脱水状态下将桑椹胚进行超快速冻存，解冻后有７３．６８％或８０．５６％在体外发育至囊胚。将经３．０ｍｏｌ／Ｌ甘油及３．０ｍｏｌ／Ｌ甘油加０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖预处理的小鼠桑椹胚超快速冻存后，有９４．１％可在体外发育。结果表明：冷冻前桑椹胚的脱水状态有助于超快速冻存的成功进行。

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛素原mRNA原位杂交的形态与计量研究

为了探讨胰岛素水平与消化道溃疡的关系，将成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成胃溃疡动物模型，用地高辛标记的ｐｒｏ－ＩｎｓｃＲＮＡ探针原位杂交方法，观察大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛Ｂ细胞内ｐｒｏ－ＩｎｓｍＲＮＡ的变化，并对其杂交信号进行定量分析。结果显示，在胃溃疡模型术后第６和第１０ｄ，胰岛Ｂ细胞内的杂交信号增强，表明在溃疡愈合早期ｐｒｏ－ＩｎｓｍＲＮＡ的表达量增加。结合本室以往的研究结果。

胸腺细胞在胸腺外凋亡的形态学证据

本文采用的胸腺外植块培养法实验既能够模拟胸腺微环境中胸腺细胞的发育周期又能够切断血液流通,理论上造成一种胸腺封闭状态(产生的胸腺细胞不能迁出胸腺外,假如某些胸腺细胞有迁出倾向,它也只能堆积于胸腺血管内)。培养3天后,在透射电子显微镜下观察到胸腺外植块血管内存在有胸腺细胞,并且处于不同的凋亡时期。本文的实验结果,在形态学上首次为胸腺外死亡假说找到了直接证据,说明胸腺细胞不必一定在胸腺原位死亡,它也可以获得死亡信号之后进入血管,随血液循环至外用最终死亡。但是这决不是意味着否定胸腺内死亡假说,因为我们同时观察到在胸腺基质细胞表面原位凋亡的胸腺细胞数量远超过进入血管后凋亡的胸腺细胞(但是在基质细胞表面凋亡的胸腺细胞并没有被基质细胞有效吞噬),所以我们的观点是:胸腺细胞同时存在胸腺内死亡和胸腺外死亡两种方式,一部分胸腺细胞在胸腺原位死亡的,而另一部分胸腺细胞是迁出胸腺后死亡溶解的。

大鼠胃窦十二指肠粘膜胰岛淀粉样多肽免疫反应细胞的定位研究

大鼠胃窦十二指肠粘膜胰岛淀粉样多肽免疫反应细胞的定位研究北京医科大学组织学胚胎学系梁文妹，李占淳，黄岩，石爱荣胰岛淀粉样多肽（ＩｓｌｅｔＡｍｙｌｏｉｄＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，Ｉ－ＡＰＰ）是Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ等于１９８６～１９８７年分离提纯的一种新的...