自杀基因治疗神经母细胞瘤的实验研究

目的 探讨自杀基因疗法对神经母细胞瘤的作用 ,为临床应用打下基础。方法 利用含胸苷激酶基因 (tk)与潮霉素磷酸转移酶基因 (hy)的融合基因的真核表达载体及仅含hy的空载体 ,以脂质体为介导 ,将这两种质粒分别转染神经母细胞瘤细胞系SH SY5Y。利用潮霉素药物敏感实验筛选SH SY5Y ,用不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)分别作用于SH SY5Y、SH SY5Y hytk及SH SY5Y hy。 结果 利用潮霉素药物敏感实验筛选SH SY5Y ,12d时SH SY5Y全部死亡的最低浓度为6 0 μg/ml,30 μm丙氧鸟苷可最大限度杀死SH SY5Y hytk。杀伤效应为 96h死亡率 >80 %。仅含有18%的SH SY5Y hytk就可使周围的 2 0 %的SH SY5Y细胞死亡 ,总死亡率为 38%。 结论 6 0 μg/ml潮霉素是筛选SH SY5Y hytk及SH SY5Y hy阳性克隆的最佳剂量。 30 μM丙氧鸟苷是作用于SH SY5Y hytk的最佳剂量。tk/GCV系统大于 18%SH SY5Y hytk具有旁观者效应 ,可极大地提高疗效。