恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。

丙型肝炎IgM抗体检测及其临床意义

为探讨丙型肝炎ＩｇＭ抗体的临床意义，建立了间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ），该方法重复性好、特异性强、操作简便。检测２２例急性丙型肝炎和５０例慢性丙型肝炎患者的血清，结果单独使用核心区抗原检测ＩｇＭ抗体的阳性率大于用核心区和非结构区３抗原共同检测。抗－丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＩｇＭ在急性丙型肝炎患者中检出率为８６％，慢性丙型肝炎中检出率为６６％，但急性组中５０％患者ＩｇＭ出现（约于输血后７．０±３．７周即可在血清中测出）早于ＩｇＧ，而慢性组中无一例如此，两组间差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００５）。急性组血清丙氨酸转氨酶显著升高患者中８０％可测出ＩｇＭ；慢性组中６７％可测出ＩｇＭ。ＨＣＶＩｇＭ对急性丙型肝炎的诊断是一个有价值的指标，同时与疾病的活动性有一定相关性。

石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒的原位PCR检测

以丙型肝炎病毒（HCV）为研究对象探讨原位PCR这一新技术。用原位PCR和原位杂交检测石蜡包理肝组织中的HCV。7例肝硬变及8例肝细胞癌痛旁组织HCV的检出率分别为86％（6／7例）和50％（4／8例），明显高于同组原位杂交的42％（3／7例）和12．5％（1／8例），并且显示了良好的特异性。研究发现HCV主要分布于肝细胞浆中，并且在胆小管上皮细胞及单核细胞中也出现阳性信号。我们的研究表明原位PCR是一项敏感、特异的方法，它的广泛应用不仅可以提高丙型肝炎的诊断率，同时有助于其分子病理学的研究。