Colgalt2敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠CD4 T细胞记忆和归巢的影响

目的初步探索糖基转移酶Colgalt2基因敲除对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠模型中CD4 T细胞记忆和归巢的影响。方法随机抽取无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级6~8周的基因敲除(Colgalt2^(-/-))小鼠与野生型Colgalt2^(+/+)小鼠各18只,建立Con A诱导的AIH小鼠模型。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用体外磁珠分选脾脏CD4^(+)T细胞,采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏及分选后CD4^(+)T细胞亚型比例。结果与Colgalt2^(+/+)小鼠相比,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠血清ALT[(15610±2869)U/L vs(5009±1042)U/L;t=3.474,P=0.006]和AST[(16080±2631)U/L vs(4453±893.7)U/L;t=4.185,P=0.002]水平均显著升高。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠肝损伤分级显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠[(3.17±0.17)级vs(2.17±0.17)级],差异有统计学意义(t=4.243,P=0.002)。Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠脾脏CD4^(+)CD28^(-)[(97.80±0.46)%vs(88.85±3.35)%;t=2.650,P=0.024]和CD4^(+)CD62L^(-)[(97.98±0.46)%vs(88.68±3.38)%;t=2.669,P=0.023]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。体外脾脏实验表明,Con A刺激12 h Colgalt2^(-/-)小鼠CD4^(+)CD28^(-)[(94.88±1.20)%vs(82.97±2.70)%;t=4.295,P=0.002]和CD4^(+)CD62L^(-)[(99.95±0.02)%vs(99.24±0.26)%;t=2.731,P=0.021]均显著高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论Colgalt2基因敲除使脾脏CD4^(+)CD28^(-)和CD4^(+)CD62L^(-)细胞亚群表达上调从而加重Con A诱导的AIH。

人磷脂酰乙醇胺结合蛋白4在多发性骨髓瘤中的表达及其意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清人磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(hPEBP4)等因子的表达情况及其临床意义。方法以2016年9月至2018年9月北京朝阳医院西院收治的59例症状性MM患者作为研究对象。根据血钙升高、肾损害、贫血和骨损害(CRAB症状)将患者分为两组,其中具有活动性CRAB症状的44例为活动组,化疗后至少达到部分缓解且CRAB症状缓解的15例为反应组。活动组患者中,严重骨损害(SBL)组30例,非严重骨损害(NSBL)组14例;修订的国际预后分期系统(R-ISS)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期分别为26、11、7例。选取与患者年龄及性别匹配的健康体检者15名作为健康对照组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测hPEBP4、肿瘤坏死因子配体超家族成员14(LIGHT/TNFSF14)和激活素A在受试者中的表达水平。采用Pearson法分析活动组中各因子表达间的关系,依据受试者工作特征(ROC)曲线确定各因子诊断MM的最佳截断值,并依此分层,比较各分层患者间总生存(OS)差异。结果活动组、反应组、健康对照组hPEBP4水平分别为(1.48±0.64)μg/L、(1.49±0.75)μg/L、(0.31±0.10)μg/L,LIGHT/TNFSF14分别为(169±112)ng/L、(256±132)ng/L、(44±27)ng/L,激活素A分别为(383±266)ng/L、(223±79)ng/L、(234±85)ng/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。活动组中,R-ISSⅠ、Ⅱ、Ⅲ期患者hPEBP4水平分别为(1.06±0.60)μg/L、(1.15±0.50)μg/L、(1.73±0.68)μg/L,差异有统计学意义(F=3.287,P=0.032);激活素A水平分别为(219±55)ng/L、(247±117)ng/L、(450±215)ng/L,Ⅲ期患者均高于Ⅰ、Ⅱ期(均P<0.05)。活动组中,SBL患者的LIGHT/TNFSF14和激活素A水平均高于NSBL患者[(174±101)ng/L比(98±53)ng/L,(467±238)ng/L比(189±71)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05)。IgG型活动组患者hPEBP4水平与M蛋白水平(r=0.694,P<0.01)和激活素A水平(r=0.252,P<0.01)均呈正相关。经ROC曲线分析,hPEBP4、LIGHT/TNFSF14、激活素A诊断MM的最佳截断值分别为1.04μg/L、97.0 ng/L、156.2 ng/L。hPEBP4>1.04μg/L和≤1.04μg/L患者中位OS时间分别为57个月(95%CI 22~92个月)和未达到,差异有统计学意义(P<0.05);激活素A≥156.2 ng/L和<156.2 ng/L患者的中位OS时间分别为61个月(95%CI 24~98个月)和未达到,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hPEBP4高表达与MM进展有关,与M蛋白水平呈正相关,与OS呈负相关;其可能成为判断病情进展和肿瘤负荷的重要标志物。LIGHT/TNFSF14和激活素A协同hPEBP4可能参与MM肿瘤微环境的病理过程。