免疫亲和柱净化—高效液相色谱法同时检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物

建立脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）及其衍生物3-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-ADON）和15-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-A-DON）的免疫亲和柱净化—高效液相色谱同时检测方法。小麦样品经超纯水提取、免疫亲和柱净化、吹干、定容后,用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行DON、3-A-DON和15-A-DON三种毒素的同时检测,并与液相色谱质谱法比对。结果表明：该方法检出限,DON、3-A-DON和15-A-DON均为100μg/kg,样品加标回收率范围86.6%～96.5%,变异系数小于10%,具有较好的准确性和精密度。该方法简单、快速、灵敏度高、选择性好,适用于小麦中DON、3-A-DON和15-A-DON的同时检测。

表面等离子体振谐生物传感器检测饲料中黄曲霉毒素的研究

本试验制备了用于AFB_1检测的SPR芯片,建立了检测饲料中黄曲霉毒素SPR检测方法,用于玉米样品中AFB_1的快速定量检测。将偶联抗原AFB_1-OVA通过卵清蛋白的氨基酸结合到羧基修饰的IB-CM SPR芯片上,进行表面活化。根据抗原包被的结合区间优化和确定芯片检测条件,确定使用乙酸盐缓冲液、最合适的包被浓度、单抗最适浓度,建立了直接竞争SPR检测法。AFB_1线性区间在0.78-2ppb之间,检测限为0.78ppb。通过实际检测玉米数据分析,SPR法符合正态分布,但与HPLC法检测存在一定的差异。可能与SPR检测方法有关,也可能与样本的不均一性有关。样本中AFB_1浓度越低,表现出的检测差异越大。但使用这种全新的SPR法检测AFB_1,无需标记、实时的检测使得免疫分析更加简单和快速,分析过程可以完全自动化,能避免和减少引入误差。

食品中四环素类残留的酶联免疫检测试剂盒的研制

目的:基于定量检测动物源性食品中四环素类抗生素的残留量,开发研制四环素类抗生素竞争酶联免疫(ELISA)检测试剂盒。方法:采用杂交瘤技术,筛选并克隆稳定分泌抗四环素(CEL)的杂交瘤细胞株,利用免疫BALB/c小白鼠制备抗四环素单克隆抗体。结果:logit/log拟合标准曲线为y=-2.3x+2.79,相关系数r=0.9971,线性检测范围为0.05～4.05ng/mL,半数抑制剂量(IC50)为0.293ng/mL,灵敏度为0.05ng/mL,检测限为3～5ng/mL;组织、牛奶、蜂蜜的添加回收率分别为(90±10)%、(85±10)%、(90±10)%;平均批内和批间变异系数均小于15%;四环素与金霉素等同类抗生素的交叉反应率大于60%,与其他类抗生素无交叉反应;此试剂盒在4℃可保存180d以上。结论:建立的试剂盒是符合技术指标的要求,可用于动物源性食品中四环素类抗生素残留的定量检测。

超高效液相色谱检测奶及奶制品中的M族黄曲霉毒素

目的：建立一种免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法同时测定奶及奶制品中M族黄曲霉毒素的方法。方法以乙腈为提取剂和蛋白沉淀剂,采用涡旋混合及超声提取,免疫亲和柱净化。结果经 Welch Ultimate XB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,应用大体积流通池荧光检测,流动相为水和乙腈/甲醇(1：1)。线性范围在0.01~5.00 ng/mL之间,线性系数均大于0.999,黄曲霉毒素M1、M2的检出限为0.003μg/kg。免疫亲和柱对黄曲霉毒素M1、M2的回收率均在80%以上,液态奶中添加0.05、0.2、1.0μg/kg的回收率在85.6%~106.4%之间,奶粉中添加0.5、2.0、10.0μg/kg的回收率在81.5%~93.4%之间。结论该方法可以适用于奶粉、液态奶中M族黄曲霉毒素检测。

酶联免疫法检测酱油中的黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。

间接竞争酶联免疫吸附法检测蜂王浆中链霉素

目的:基于定量检测蜂王浆中链霉素的残留量,建立快速检测蜂王浆中链霉素的间接竞争酶联免疫吸附方法。方法:采用制备链霉素人工抗原、筛选杂交瘤细胞、利用体内诱生腹水法制备抗链霉素单克隆抗体。结果:Logit/Log拟合标准曲线为y=-2.1x+0.8,相关系数r=0.9943,线性检测范围为4～324μg/kg,半数抑制浓度(IC50)为79μg/kg,检测限为4μg/kg,灵敏度为0.1μg/kg,蜂王浆样品的检测值符合率大于90%;采用方法二的样品前处理方法,链霉素阴性样品的添加回收率为67.7%～86.7%,样品重复检测结果的变异系数为4.3%～5.6%。结论:建立的间接竞争酶联免疫吸附法具有较好的特异性、检测符合率、回收率和重复稳定性,可用于蜂王浆中链霉素残留的检测。

2010—2019年欧盟食品和饲料快速预警系统对华通报食品真菌毒素污染分析及应对策略

欧盟是世界第一大经济联合体,也是我国食品出口的主要市场之一。本文就2010—2019年欧盟食品和饲料快速预警系统(RASFF)对我国食品通报信息进行统计分析和总结,重点分析了真菌毒素污染类食品通报近十年的发展变化趋势,发现真菌毒素污染在所有危害类型中排第一位,是我国食品出口欧盟的最大阻碍;进一步分析了欧盟RASFF对华通报食品真菌毒素污染数量居高不下的原因,并就如何减少相关通报提出了一些应对策略和建议。研究数据将为我国食品出口提供参考,为我国食品安全体系建设尤其是真菌毒素防控体系建设提供科学依据和重要借鉴。

抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备

制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱。利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件。免疫亲和柱的有效柱容量为500 ng,经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%,变异系数2.3%~7.2%。利用高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B制备的免疫亲和柱可应用于乳制品等食品中黄曲霉毒素M1污染度测定的样品快速前处理。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸的研制及应用

采用合成脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Dexynivalenol,DON）人工抗原,制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体（mAb）,并以此为基础建立胶体金免疫层析检测试纸,于胶体金读数仪配合使用,用于进行玉米和小麦样品中DON的快速定量检测。通过检测玉米和小麦样品,脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金试纸方法检测限为87μg/kg,定量限为290μg/kg,线性范围400~5 000μg/kg,相关系数r=0.998。以国家标准（GB/T23503—2009）免疫亲和柱-高效液相色谱法检测样品的结果为认定值,胶体金检测法的准确度在80.7%~143.6%,变异系数范围4.7%~16.4%。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与国标液相方法无显著性差异。

玉米赤霉烯酮胶体金检测试纸的研制及定量检测的应用

目的：合成玉米赤霉烯酮（ZEN）人工抗原,制备抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体（mAb）,并以此为基础建立胶体金免疫层析检测试纸,于胶体金读数仪配合使用,用于玉米和小麦样品中ZEN的快速定量检测.结果：检测玉米和小麦样品,玉米赤霉烯酮的检测限为4.7 μg/kg,定量限13.9 μg/kg,线性范围14.5～500 μg/kg,相关系数r=0.9964.以GB/T 23504-2009免疫亲和柱-高效液相色谱法检测样品的结果为认定值,胶体金法检测样品的准确度在80.1％～149.7％,变异系数范围7.3％～19.6％.采用配对t-检验分析,2种方法无显著性差异.

分子印迹亲和净化—高效液相色谱法测定玉米中玉米赤霉烯酮

考察了分子印迹亲和净化-高效液相色谱法测定玉米试样中玉米赤霉烯酮的效果,并与免疫亲和柱净化-高效液相色谱法进行了对比,结果表明玉米样品中60μg/kg和500μg/kg 2个添加水平的玉米赤霉烯酮,两种净化方法的回收率均分别达到90.4%、90.1%和92.9%、90.7%,且分子印迹亲和柱多次重复使用后回收率仍不低于80%。

黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备及使用条件优化

黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）后在体内经羟基化而形成的产物,主要存在于动物的可食部分,如乳、肝、蛋类等,其中以乳最为常见。AFM1毒性主要表现在致癌性和致突变性，

牛布鲁氏杆菌病的间接酶联免疫快速检测

本文通过制备布鲁氏杆菌菌壁抗原,建立了牛布鲁氏菌病的间接酶联免疫检测方法,应用虎红平板凝集试验方法、补体结合试验、间接酶联免疫吸附试验方法对145份牛血清进行了布鲁氏菌病的检验,间接酶联免疫吸附试验检出率最高,虎红平板凝集试验与补体结合试验的结果符合率为95.6%,虎红平板凝集试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为96.7%,补体结合试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为92.7%。结果表明间接酶联免疫吸附试验方法特异性较强,具有检测快速、灵敏、准确等优点。

金黄色葡萄球菌肠毒素ELISA检测方法的建立及应用

采用金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）和金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）免疫Balb/c小鼠制备相应的单克隆抗体（m Ab）,并以此为基础建立SEA和SEB的ELISA检测方法,用于牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。SEA双抗体夹心法ELISA的曲线范围是1~16μg/L,相关系数R2=0.9996,检测牛乳的检测限是0.431μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为89.18%和97.62%。SEB双抗体夹心法ELISA的曲线范围是0.5~8μg/L,相关系数R2=0.9998,检测牛乳的检测限是0.335μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为107.83%和89.88%。

粮食中重金属镉定量快速检测方法的建立

开发了一种重金属镉的胶体金快速检测方法。利用IEDTA螯合镉离子,并与匙孔血蓝蛋白KLH偶联,合成镉离子抗原。经过免疫小鼠及细胞融合后筛选到镉离子的单克隆抗体细胞株。通过亲和层析的方法制备得到镉单克隆抗体,并建立了粮食样本中竞争法原理的重金属镉胶体金免疫层析定量检测方法。该方法检测灵敏度为50μg/kg,定量检测范围为50~400μg/kg。检测特异性良好,与其他常见的5种重金属离子无交叉反应。利用该检测方法与原子吸收法进行了大米样本检测对比。在20个样本中除1个样本由于检测灵敏度问题结果不符外,其余样本的检测结果均与原子吸收法符合,无显著差异。该研究为粮食中重金属镉检测提供了一个有效的途径。

金黄色葡萄球菌肠毒素A胶体金定量检测方法的建立及应用

采用金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）免疫Balb/c小鼠,制备相应的单克隆抗体（m Ab）,并以此为基础建立SEA胶体金检测方法,通过胶体金读数仪进行牛乳样品中SEA的定量分析。SEA胶体金试纸方法检测限为0.339μg/L,定量限为0.844μg/L,线性范围为1~16μg/L,相关系数R2=0.9933。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与ELISA法无显著差异。

金黄色葡萄球菌蛋白A在大肠杆菌中的自诱导表达以及单克隆抗体的制备

利用大肠杆菌表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白(SPA)基因进行密码子优化。SPA基因插入p ET28a表达载体中,利用自诱导培养基诱导SPA表达,表达量达8.2 mg/L。通过Ni亲和层析纯化SPA蛋白,纯度达到95%。纯化的SPA蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,抗体效价可达1∶40000,采用Protein G亲和层析纯化SPA单抗,纯度达98%。纯化后的SPA单抗检测与食品中常见的致病菌无交叉反应。结果显示,SPA单抗特异性良好,与其他致病菌无交叉反应。

单增李斯特菌内化素A单克隆抗体制备及胶体金免疫层析试纸条的研制

将单增李斯特菌的内化素A（InlA）基因片段进行密码子优化后，合成基因并插入到质粒载体DET28a中，构建原核表达重组质粒。经过乳糖自诱导表达后，获得了大小为48kD的重组蛋白。用Ni亲和层析方法纯化重组表达后的InlA蛋白片段。用该蛋白免疫BALB／C小鼠，筛选高效的InlA单克隆抗体细胞株，并制备单克隆抗体，共筛选出3株亲和力较高的单克隆抗体，筛选得到的InlA单克隆抗体经过ProteinG亲和层析纯化。研制双抗夹心法胶体金免疫层析试纸条，并对其敏感性、特异性等指标进行评价。该试纸条灵敏度达到1x10^6CFU／mL，用实际样本加标后，对该胶体金试纸条进行验证，并用国标方法做了对比。结果表明，该试纸条能满足样本中单增李斯特菌的检测要求。

酶联免疫吸附法快速测定玉米粉中伏马毒素

选用国产、进口2种品牌试剂盒对阴性样品加标实验及对FAPAS样品的检测，验证试剂盒的准确度。通过对标准物的检测，测试试剂盒的灵敏度；通过对阴性样品的检测，测试试剂盒的检出限。结果表明：酶联免疫吸附法（EusA）测定伏马毒素灵敏度高、快速、准确，可以用于定性定量分析。其中，国产和进口品牌FB，试剂盒的IC卯分别是15μg／kg和50μg／kg，检测限分别是300μg／kg和500μg／kg，通过FAPAS样品检测验证，国产、进口2种FB1试剂盒的准确度分别是84．80％～96．43％和79．75％-94．73％。

ELISA试剂盒法 值得推广的孔雀石绿、结晶紫类物质检测法

酶联免疫分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)是将抗原与抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术。具体是将抗原或抗体结合到某固相载体(保持其免疫活性),使受检标本和酶标抗体或抗原与固相载体表面的抗原或抗体起反应,然后洗涤,使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开。因最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例,所以可根据加入底物后,酶催化反应产生有色物质颜色的深浅进行定性或定量分析。如今,尽管各种新型食品安全检测技术不断涌现,ELISA技术仍因其操作程序的规范化、简单化和检测的高灵敏性,表现出独特的优势,并在药物残留、生物毒素、食品添加剂和人畜共患疾病病原体的快速检测与分析等食品安全检测领域中得到广泛应用。