舒筋定痛片对斑马鱼胚胎发育的急性毒性研究

目的采用斑马鱼胚胎模型评价舒筋定痛片样品的急性毒性。方法以模式生物斑马鱼胚胎为实验对象,以不同硼砂含量的舒筋定痛片样品给药处理,野生型为阴性对照,于不同发育时间点观察给药后胚胎的发育情况,包括胚胎致畸、致死检测。结果舒筋定痛片4组测试样品在不同浓度下对斑马鱼胚胎发育有明显影响,高浓度时胚胎毒性以导致胚胎发育停滞为主,中浓度时可致发育滞后并出现心脏、脑、躯干等主要器官畸形,低浓度时大多数胚胎发育接近正常,少数胚胎出现胚胎发育中轻度的滞后。结论舒筋定痛片测试样品对斑马鱼胚胎发育的影响主要表现为高、中浓度下的胚胎发育停滞、滞后;同时,研究表明同一企业样品毒性作用与其中所含硼砂存在一定剂量依赖性正相关。

基于斑马鱼模式动物的心脑静片急性毒性研究

目的:利用斑马鱼模式动物考察心脑静片急性毒性。方法:心脑静片3份样品提取液分别给药斑马鱼胚胎处理,以野生型为阴性对照,主要检测其对斑马鱼胚胎致畸、致死的作用。结果:心脑静片3份测试样品在所测浓度范围内对斑马鱼早期发育具有明显的毒性和致死作用,其半数中毒剂量分别为0.0448 mg/ml、0.0857 mg/ml、0.1275 mg/ml,半数致死剂量分别为0.2123 mg/ml、0.2193 mg/ml、0.2511 mg/ml,半数异常剂量分别为0.0321 mg/ml、0.0419 mg/ml、0.0437 mg/ml。低浓度的胚胎异常主要为发育滞后,停药后表型和恢复接近正常。结论:心脑静片不同样品具有类似的胚胎发育毒性,并显示出急性致死效应,且其致死浓度窗口较窄。

针对不同靶点新型抗结核药物的药效和药动学性质研究

结核病作为危害人类健康最重大的传染病,近年来在全球范围内又死灰复燃。随着多药耐药菌株的不断增加,原有的抗结核药物已不能满足临床的治疗要求,新型抗结核药物的研发迫在眉睫。本文选取了最新进入临床研究或临床前研究的抗结核候选药物,按照其不同的作用靶点综述了各个药物的药效学及药动学性质,为今后抗结核药物的研发提供参考和依据。

组学方法在药物作用机制研究中的应用（英文）

药物作用机制的研究是药物研发的重要组成部分,具有重要意义。基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等组学研究方法近年来已经被应用到药物作用机制研究中。本文列举了这4种组学方法在抗感染药物作用机制和抗肿瘤药物作用机制等研究中的具体应用。

新型NDM-1酶抑制剂的筛选与研究

目的建立肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)新德里β-内酰胺酶1(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1)抑制剂的高通量筛选模型,从不同来源的样品中筛选该酶抑制剂,以期获得作用于NDM-1的新型抗耐药阴性菌的药物或药物先导物。方法克隆、表达并纯化肺炎克雷伯菌A TCC BAA-2146的NDM-1酶;基于在NDM-1作用下头孢硝噻吩溶液由黄色变成红色,且在486nm波长下具有光吸收的原理,建立酶活测定体系,构建和评价NDM-1抑制剂的高通量筛选模型;应用此模型筛选NDM-1抑制剂,评价其作为抗耐药阴性菌药物的可行性。结果得到了重组NDM-1酶,构建了NDM-1酶抑制剂高通量筛选模型,筛选得到5个NDM-1抑制剂,其中化合物IMB-XW2为该酶的非竞争性抑制剂,其Ki值为4.6μmol/L,IC50为10.3μmol/L;该化合物在4μg/m L时可以使表达NDM-1的大肠埃希菌对美罗培南的敏感度提高8倍。结论成功构建了稳定性好、灵敏度高的NDM-1酶抑制剂的高通量筛选模型,应用该模型可筛选到NDM-1抑制剂,该抑制剂有可能成为新型的抗耐药革兰阴性菌的药物或药物先导物。

基于精准医学的抗肿瘤靶向药物敏感性预测及其研发应用

抗肿瘤靶向药物已经成为临床肿瘤治疗的主要手段之一,这些药物的广泛使用也促进了精准医学的快速发展。基因组学及相关生物医学技术的广泛应用、肿瘤免疫疗法的突破使精准地预测对抗肿瘤药物敏感的患者成为可能。利用生物标志物筛选敏感患者进行富集设计,使成功上市的靶向新药克唑替尼的临床评价模式,与传统细胞毒类药物的研发模式明显不同,开创了临床精准抗肿瘤评价的新时代。此外,本综述还探讨了肿瘤的异质性、耐药性与准确预测靶向药物敏感性的关系。通过上述问题的深入探讨,对抗肿瘤靶向药物敏感性的预测及其新药研发提供了新视角。

干预衰老及老年性疾病的重要药物——白藜芦醇

我国已经进入了老龄化社会，老年人口每年正以3％的速度增长，到2007年底为止，60岁及以上的老年人为1．5亿。随着年龄增加，人体衰老，伴之而来的是老年性疾病的明显增多。例如：冠心病、糖尿病、神经退行性疾病、骨质疏松等疾病给老人带来了极大的经济和精神负担；这些老年性疾病是由多因素引起、多基因参与作用，而机体衰老是一个共同的因素。很显然，发展治疗老年性疾病的药物，其本身应该具有明显的抗衰老作用。近年来大量研究的白藜芦醇（Resveratrol，RES），不仅是抗氧化剂，

老年病的特征及其与衰老的关系

据国务院老龄办公室预计，到2013年底，我国内地年龄超过60岁以上的老年人口将达到2亿。庞大的老年人群、日益加重的养老负担以及各种高发的慢性病，对我国的社会和经济发展形成了巨大的挑战。面对快速人口老龄化的难题，我们需要从社会、医学等各个方面采取创新性的思路和对策。在慢性病防治方面，经过国内外的大量研究，

与HERG相关的红霉素和司帕沙星联合抗肿瘤作用

目的探讨与钾离子通道HERG相关的药物在肿瘤治疗中的靶向调节作用。方法采用Western blot检测相关蛋白的表达水平。采用MTT法观察SPFX-ERM对细胞增生的抑制作用;采用两药相互作用指数CDI评价是否存在协同作用。采用流式细胞术检测细胞周期。建立小鼠移植肝癌模型,观察连续灌胃给予SPFX-ERM的抑瘤效果。结果 HERG蛋白在人结肠癌细胞HCT116和HT-29中均高表达。MERG蛋白在小鼠肝癌H22细胞中也高表达。SPFX-ERM能明显抑制人结肠癌HCT116和HT-29细胞的增生,并且细胞对两药联合的敏感性要显著高于单用SPFX或ERM。高剂量的SPFX-ERM能抑制HERG蛋白的表达。SPFX-ERM可以引起G2期细胞阻滞。动物体内实验表明,SPFX-ERM能明显抑制小鼠移植性肝癌H22在体内的生长,协同作用显著,其CDI值均在0.7以下。结论联合SPFX-ERM作为与HERG有关的调节剂有显著的抗肿瘤作用。

结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂高通量筛选模型的建立与应用

目的建立1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,从不同来源的样品中筛选该酶抑制剂,以期获得作用于该靶点的全新作用机制的抗结核药物先导物。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,克隆基因dxr构建重组表达质粒pET28a(+)::dxr;IPTG诱导表达并经Ni2+亲和层析柱纯化得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶;基于该酶促反应底物NADPH在340nm波长下具有光吸收的原理,建立和优化酶活测定体系,构建并评价酶抑制剂的高通量筛选模型;应用此模型进行酶抑制剂筛选并进行抑酶活性及抗菌活性评价。结果成功得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶,构建了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型并得到3个抑酶活性较高的阳性化合物,其中化合物IMB-DXR-B1为该酶的反竞争性抑制剂,其Ki值为6.2μmol/L,IC50为29.5μmol/L,该化合物对于结核分枝杆菌H37Rv的MIC为32μg/mL。结论成功构建了稳定性好、灵敏度高的结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,筛选得到具有抗结核活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂,为获得全新作用靶点的新型抗结核药物奠定了基础。

对β-内酰胺抗生素中微量不稳定杂质研究策略与方法的思考

对药品中杂质的控制是保证药品用药安全的重要环节。β-内酰胺抗生素由于自身结构的不稳定,使得产品中杂质种类复杂、含量较低且结构不稳定,通常难以采用常规的方法进行研究。本文在已有的杂质研究相关指导原则的基础上,针对β-内酰胺抗生素中微量不稳定杂质的特点及研究中涉及的特殊问题,结合对β-内酰胺类抗生素杂质研究的实践经验,对研究中共性的策略与方法进行了讨论。

骨刺片对斑马鱼胚胎发育的急性毒性研究

目的研究两批骨刺片样品对斑马鱼胚胎发育的急性毒性作用。方法以斑马鱼胚胎为试验对象,观察骨刺片样品A(0.01、0.05、0.10、0.20、0.30、0.50、1.00 mg/mL)、样品B(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、10.00 mg/mL)对斑马鱼胚胎发育的影响,包括胚胎致畸、致死检测;同时采用超高效液相色谱法-四极杆飞行时间-质谱(UPLC-QTOF-MS)对两批样品所含化学成分进行定性分析。结果两批样品对斑马鱼胚胎发育的影响相似,主要表现为高浓度下的致死作用,低浓度下主要以发育滞后表型为主;但二者作用浓度存在一定差异,样品A的半数致畸剂量(TD_(50))为225.4 mg/mL,半数致死剂量(LD_(50))为292.0 mg/mL;样品B的TD_(50)为60.3 mg/mL,LD_(50)为1.382 mg/mL。UPLC-QTOF-MS分析结果显示,两批样品所含主要化学成分基本一致,但某些成分含量存在一定差异;初步分析显示既是有效成分又是毒性成分的士的宁含量与斑马鱼胚胎试验结果呈正相关。结论斑马鱼胚胎模型可用于评价骨刺片样品的急性毒性,两批骨刺片样品对斑马鱼胚胎发育影响均表现为高浓度下的致死作用,低浓度下,特别是样品B表现为轻度非正常表型,且均可逆。

高效液相色谱-单四极杆质谱仪结合同位素峰形校正检索技术快速确定头孢呋辛水溶液降解杂质

目的:探索一种利用同位素峰形校正检索技术(CLIPS),在低分辨率单四极杆液质联用仪上,实现对未知杂质元素组成的分析,进而快速推断降解杂质结构的方法。方法:头孢呋辛对照品经水浴降解获得未知杂质混合样品,用HPLC-MS进行分离,并获得降解产物的准分子离子和碎片离子的同位素峰形;用元素组成已知的同位素峰做校正,对未知降解杂质进行CLIPS校正分析,确定元素组成,再根据质谱谱图信息初步确定其结构式。结果:水浴降解溶液中7个降解杂质得到了有效分离。用CLIPS确定了降解杂质的准分子离子和部分碎片离子的元素组成,并初步推测出其中4个降解杂质的结构。结论:同位素峰形校正检索技术结合高效液相色谱-单四极杆质谱联用仪可以确定降解杂质的元素组成,进而帮助降解杂质的结构解析和确证。

结核分枝杆菌泛酸合成酶抑制剂的实验研究

目的:获得特异性靶向结核分枝杆菌泛酸合成酶的抑制剂,为开发针对该靶点的新型抗结核药物奠定基础。方法:重组表达结核分支杆菌H37Rv的泛酸合成酶,以酶活测定体系为基础构建高通量筛选模型,对筛选到的酶抑制剂进行酶促动力学研究,并运用分枝杆菌微量直观快速药敏试验法测定其体外抗结核活性。结果:得到了具有天然活性的泛酸合成酶,建立并优化了酶活测定体系及筛选模型,应用模型筛选得到了具有新结构的抑制剂。评价结果显示,该抑制剂具有显著的体外抗结核活性。结论:获得了具有显著体外抗结核活性的新型泛酸合成酶抑制剂。

河北九莲城淖尔可培养放线菌多样性及抗菌活性筛选

【目的】勘探干涸的九莲城淖尔土壤放线菌多样性并进行活性筛选,以期发现药用微生物资源,为新抗生素的发现奠定基础。【方法】采用15种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S rRNA基因序列同源性分析放线菌多样性;发酵液经乙酸乙酯萃取,菌丝体经丙酮浸提,获得提取浓缩物样品;样品通过纸片扩散法进行抗菌活性初筛;抗菌阳性菌株采用PCR技术进行Ⅰ型聚酮合酶(PKS I)KS域、Ⅱ型聚酮合酶(PKS II)KS域和非核糖体多肽合成酶(NRPS)A结构域抗生素生物合成基因的检测。【结果】从11份盐湖土壤样品中分离纯化到251株放线菌,其分布于放线菌纲的10个目15个科31个属,其中优势菌属为链霉菌属和拟诺卡氏菌属;251株放线菌中包括57株耐(嗜)盐放线菌,其优势菌属为拟诺卡氏菌属(22株)和涅斯捷连科氏菌属(15株)。基于16S r RNA基因序列的系统发育分析显示,菌株J11Y309为糖霉菌科潜在新属,菌株J12GA03为分枝杆菌科潜在新种。96株放线菌活性检测结果显示,56株至少对1株检定菌具有抗菌活性,阳性率为58.3%;56株有活性的放线菌中,47株至少含有1种抗生素生物合成基因,其中17株同时具有3种抗生素生物合成基因。【结论】干涸的九莲城淖尔土壤中含有较为丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力。

热量限制促进机体线粒体增殖的分子机制

氧化损伤致衰老理论认为机体的衰老是由活性氧自由基引起的。线粒体是细胞的能量源,同时也是机体产生活性氧自由基的最重要的场所。热量限制是除遗传操作以外广为接受的延长寿限并延缓衰老的方法,现已发现在多种生物体的热量限制过程中机体活性氧自由基的水平降低,而线粒体活性增加,呼吸作用加强。在哺乳动物热量限制过程中,SIRT1去乙酰化酶-PGC-1α信号通路对线粒体的生物合成发挥重要的调节作用。文中综述了热量限制促进机体线粒体增殖的分子机制及热量限制后呼吸作用与活性氧自由基水平的变化。

近红外特征谱段相关系数法中特征谱段选择方法的探讨(英文)

借鉴广义二维相关光谱法,以温度为扰动进行待测化合物的中红外-近红外(IR-NIR)二维相关谱分析,利用IR光谱峰归属明确的特点,通过IR-NIR光谱的相关分析,确定NIR光谱中与待测化合物结构关联密切并受干扰程度较小的典型特征波数区域作为NIR特征谱段相关系数法中的特征谱段。据此快速建立的筛查中成药/保健品中非法添加枸橼酸西地那非、他达拉非和盐酸二甲双胍的NIR特征谱段相关系数法的准确性均在90%左右,可以满足现场快速筛查的需要。

长春新碱对斑马鱼神经发育和行为的影响

目的以斑马鱼胚胎/幼鱼为实验对象,探索长春新碱对斑马鱼神经发育毒性和行为的影响及其毒性的分子机制。方法采用表型观察、触及逃避、幼鱼的自主运动、强光刺激惊恐反射能力等实验及RT-PCR,整体免疫荧光等手段。结果 (1)长春新碱具有斑马鱼胚胎神经和心脏发育毒性;(2)长春新碱具有幼体神经毒性,幼鱼呈浓度依赖性的侧卧体位;自主运动显示幼鱼呈长春新碱浓度依赖性的常规转弯能力下降,运动轨迹紊乱,平均运动速度降低,不活跃运动持续时间增加等神经抑制行为;(3)光刺激实验显示高剂量(30和40μg/ml)长春新碱处理组幼鱼被刺激后应激反应能力变弱,学习记忆能力下降;(4)长春新碱导致多巴胺能神经元相关基因th、dat的转录水平下调,诱导幼鱼间脑及下丘脑多巴胺神经元细胞数量减少。结论长春新碱具有多巴胺能神经元毒性,导致下丘脑多巴胺能神经元细胞丢失。

力达霉素产生菌球孢链霉菌C-1027中atrA同源基因的克隆及分析

目的:在天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中多效性调节因子AtrA(AtrA-c)可通过激活放线紫红素途径特异性的调节因子ActII-ORF4的转录来控制放线紫红素的产生。在灰色链霉菌Streptomyces griseus NBRC13350和阿维链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680中也发现了AtrA-c编码基因(atrA-c)的同源基因,分别影响链霉素和阿维菌素的生物合成。为探索球孢链霉菌C-1027(Streptomyces globisporus C-1027)中是否存在AtrA,克隆球孢链霉菌C-1027中atrA基因并进行生物信息学分析,为进一步确定其对力达霉素产生的调控作用及调控机制奠定基础。方法:采用在球孢链霉菌C-1027中异源表达AtrA-c,来确定AtrA-c对力达霉素产量的影响;通过Southern blot分析来判断在球孢链霉菌C-1027基因组中是否有atrA-c同源基因;PCR扩增方法获得球孢链霉菌C-1027 atrA基因(atrA-gl)并测序;通过多种生物信息学软件来分析atrA-gl及其与旁侧基因的组织结构、对已发现的AtrA蛋白进行同源性比对及亲缘关系分析。结果:在球孢链霉菌C-1027中异源表达天蓝色链霉菌AtrA-c蛋白,发现其对力达霉素的产量有影响。以atrA-c为探针,通过Southern blot分析显示球孢链霉菌C-1027基因组中存在atrA-c的同源基因。PCR扩增得到球孢链霉菌C-1027的atrA基因的全序列以及该基因上下游的旁侧序列(GenBank/EMBL/DDBJ登录号GU723707)。通过对球孢链霉菌C-1027、天蓝色链霉菌A3(2)、灰色链霉菌NBRC13350以及阿维链霉菌MA-4680 AtrA蛋白序列进行同源性分析发现,4种AtrA蛋白编码氨基酸序列一致性达到65%～87%,相似性高达70%～89%。并且,球孢链霉菌C-1027 atrA基因与相邻基因形成的组织结构与天蓝色链霉菌和灰色链霉菌完全一致。根据蛋白质同源性绘制进化树,发现球孢链霉菌AtrA蛋白与灰色链霉菌AtrA蛋白亲缘关系最近。结论:确定在球孢链霉菌C-1027中存在atrA同源基因并影响力达霉素的产量,克隆了首个力达霉素生物合成基因簇外的调节基因——atrA基因,通过生物信息学分析初步推测了该基因的功能,为进一步研究AtrA-gl对力达霉素途径特异性级联调控网络的调控关系奠定了基础。

牛黄镇惊丸对斑马鱼胚胎发育的影响

目的研究牛黄镇惊丸对斑马鱼胚胎发育的影响。方法以斑马鱼胚胎为实验对象,体视光学显微镜下观察牛黄镇惊丸不同给药浓度(40、200、400、800、1 200μg/m L)时斑马鱼胚胎的发育情况,包括胚胎致畸、致死检测。结果给药浓度不高于200μg/m L时,未见胚胎发育异常。浓度高于200μg/m L(约相当于成人用量30倍,远超出正常有效剂量)时对胚胎发育具有一定的毒性,胚胎出现头和眼发育较小,瞳孔无色;心脏畸形、心率较弱、血池充血-回心血流不畅;腹部透明度较差、尾干扭曲,卵黄囊延伸结构变粗,脊索变细,无正常胚动,体长变短;撤药后畸形表型未见恢复,且毒性呈浓度相关性;半数致畸浓度(TD50,受精后3 d)约373μg/m L,半数致死浓度(LD_(50))约为485μg/m L。浓度为1 200μg/m L时,胚胎在受精后1 d之内全部死亡。结论牛黄镇惊丸给药浓度大于200μg/m L时影响斑马鱼胚胎发育。其毒性作用发生在胚胎器官形成期,主要对胚胎的神经系统、心血管系统和骨骼等发育有影响。