DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷的抗胃肠道肿瘤机制研究

目的 观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-2＇-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对胃癌细胞生长的影响.方法 将野生型P53人胃癌细胞株AGS细胞,加入不同浓度的5-Aza-CdR,体外培养至不同时间.MTT法检测细胞增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测细胞长期增殖活性（0 ～2.5 μM）;流式细胞仪检测细胞周期变化（25 μM,0、12、48、96 h）;Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡情况（2.5 μM,0、12、48、96 h）;比色法检测Caspase-3活力、Western blot检测Caspase-3前体蛋白及PARP（poly ADP-ribose polymerase,PARP）蛋白的含量（2.5 μM,0、12、48、96 h）.结果 随着5-Aza-CdR浓度增加,对肿瘤细胞的抑制作用亦增强,在50 μM作用72 h时,细胞存活率达最低值（31.9％）;随着药物处理时间的延长,胃癌AGS细胞凋亡增多,96 h的2.5μM 5-Aza-CdR作用下,细胞的生长抑制达到了最高峰（44.4％）,且其抑制作用表现为浓度和时间依赖性.5-Aza-CdR对肿瘤细胞长期生长有影响,克隆形成抑制率呈线性增加.流式细胞仪分析结果显示,随5-Aza-CdR作用时间延长,G2期细胞比例从0h的（5.7±0.2）％增加到96h的（28.5±0.2）％.随着药物作用时间的累加,其凋亡率逐渐增加,各时间组的细胞凋亡率与空白对照组之间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）.与空白对照组比较,Caspase-3活力在药物处理48、96 h后显著提高（P＜0.05）,但12 h AGS细胞的Caspase-3活力无变化;48 h Caspase-3前体比12h和未用5-Aza-CdR时明显减少,96 h减少最为明显;PARP在AGS细胞内经5-Aza-CdR作用48 h后亦被活化,96h后几乎检测不到PARP的存在.结论 5-氮杂-2＇-脱氧胞苷,能增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性,可作为一种有效的抗胃肠道肿瘤药,.