穿膜肽引导的体外表达转录因子蛋白Sox2进入红鳍东方鲀精巢细胞系

为了探索适用于体外培养的鱼细胞外源基因转入方法,本研究通过构建红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)转录因子Sox2的重组表达载体p ET32a(+)-Sox2-11R-6His,诱导表达并纯化得到了C末端连接多聚精氨酸(11R)的重组蛋白Sox2-11R-6His,以其与红鳍东方鲀精巢细胞系细胞共孵育12 h后,光镜观察结合Western Blot检测发现重组蛋白进入细胞的效率与浓度呈剂量依赖关系且最佳孵育浓度为8μg/m L,当重组蛋白质量浓度达到10μg/m L时,表现出明显的细胞毒性。对外源蛋白进行免疫荧光标记定位,发现重组蛋白分布于细胞质,部分进入到细胞核中。证明了穿膜肽11R可以有效运载转录因子重组蛋白至红鳍东方鲀的细胞系细胞中。本研究旨在将广泛应用于哺乳动物的细胞基因递送载体穿膜肽应用于鱼类细胞系细胞。

黄芪菟箭合剂对糖尿病大鼠肾脏PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响

目的:观察中药黄芪菟箭合剂对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏PI3K-Akt-m TOR信号通路的影响,并与雷帕霉素的作用进行比较。方法:糖尿病大鼠分为糖尿病对照组(DM组)、黄芪菟箭合剂治疗组(CM组)、雷帕霉素治疗组(RAPA组),并设正常大鼠对照组(CON组),分别给予不同治疗,12周后用ELISA法检测大鼠的尿白蛋白排泄率,免疫组化法观察肾小球ZO-1、nephrin蛋白表达;Western-blot法检测肾脏磷酸化Akt(Thr308)、磷酸化PTEN、磷酸化S6K的蛋白表达;应用qRT-PCR检测肾脏Akt、PTEN、S6K的mRNA表达。结果:CM组与RAPA组大鼠尿微量白蛋白排泄率均显著低于DM组,ZO-1、nephrin阳性表达显著高于DM组,且CM组与RAPA组之间无显著差别;CM组与RAPA组肾脏磷酸化S6K蛋白表达、S6KmRNA表达均显著低于DM组;CM组磷酸化PTEN蛋白及PTEN mRNA表达显著高于DM组,磷酸化Akt(Thr308)蛋白、Akt mRNA则低于DM组;但RAPA组磷酸化PTEN蛋白及PTEN mRNA表达以及磷酸化Akt(Thr308)蛋白、Akt mRNA表达与DM差异无统计学意义,RAPA组体重显著低于DM组及CM组、死亡率显著高于DM组及CM组。结论:雷帕霉素和黄芪菟箭合剂都可以有效地保护STZ诱导的糖尿病大鼠足细胞的完整性、减少尿微量白蛋白排泄率,但雷帕霉素存在显著毒副作用。

女性骨盆骶前区血管和神经的应用解剖

目的探讨骶前区的血管和神经解剖特点,为阴道骶骨固定术提供解剖学基础。方法2007年6月至2008年1月在北京协和医院对10具国人成年女性尸体(防腐固定的7具和新鲜的3具)的骶前区血管和神经进行解剖、观察和测量。结果9具(9/10)尸体的骶前血管和神经分布有规律可循,每个椎体的盆面有一支横行的骶前横静脉支连接着两侧的骶外侧静脉(或髂内静脉)与中线附近的骶正中静脉,呈"楼梯"状分布,位于骶前区中线上、距离骶骨岬3 cm、边长也是3 cm的正方形的四个顶点附近为相对无血管区。结论大部分尸体的骶前血管和神经分布有规律可循,位于骶前区中线上、距离骶骨岬3 cm、边长也是3 cm的正方形的四个顶点附近为相对无血管区。为阴道骶骨固定术的适宜区域。

巨噬细胞集落刺激因子对喉鳞状细胞癌喉癌细胞株的作用

目的:了解和探讨巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)及其受体对喉鳞状细胞癌细胞株(Hep2)细胞系的作用。方法:使用氚标记胸腺嘧啶核苷(3HTDR)掺入法和MTT法测试MCSF作用于Hep2后细胞的增殖状况,并测试加入巨噬细胞集落刺激因子受体(MC-SFR)抗体后细胞生长情况。ELISA法测试M-CSF作用Hep2细胞后上清中的MCSF的浓度变化。结果:Hep2细胞培养后较培养前的上清中的MCSF的浓度升高。加入的M-CSF浓度越大,细胞增殖越差,加入MCSFR抗体浓度越大细胞增殖越好。结论:MCSF对喉癌细胞Hep2细胞的增殖具有抑制作用。

X连锁显性遗传性原卟啉症一家系及ALAS2基因突变分析

目的：报道中国人X连锁显性遗传性原卟啉症一家系，并对其5-氨基酮戊酸合成酶2（ALAS2）基因突变进行研究。方法收集该家系成员资料，进行临床调查。用二代测序方法检测后再行Sanger测序，测定该家系中患病者及部分表型正常者ALAS2致病基因。用皮肤镜观察皮肤卟啉皮损，根据Fotofinder系统和甚高频皮肤超声系统评估皮肤卟啉症的光损伤严重程度，对该家系成员做肝胆B超检查，同时检测血液学改变。结果该家系中所有患者X染色体的1706号到1709号碱基发生AGTG缺失，导致转录时移码突变，最终导致翻译得到的ALAS2酶C端19、20个残基替换或缺失，ALAS2酶活性升高。XLDPP患者皮肤光损伤显著，肝胆可出现卟啉损伤，随年龄增加而加重，可出现贫血和铁过载。结论 X染色体1706-1709碱基AGTG缺失突变可能是该ALDPP家系患者的发病原因。

肾上腺素受体自身抗体通过上调趋化因子CXCL16诱导心功能不全

目的 利用标记法芯片技术筛选β1肾上腺素受体自身抗体（β1-AA）致心功能不全的细胞因子,并对其中参与的信号通路进行分析.方法 收集67例冠心病患者和42例健康体检者血清,ELISA法检测血清中β1-AA水平;建立β1-AA被动免疫小鼠模型,采用小动物超声动态监测小鼠心脏功能及结构变化;苏木精-伊红（HE）及马松（Masson）染色观察小鼠心肌组织形态改变;标记法芯片技术筛选被动免疫模型鼠外周血清中β1-AA致心肌损伤的相关细胞因子;GO分析和KEGG通路富集分析对差异表达的细胞因子进行功能分类;ELISA法检测冠心病患者血清中该细胞因子水平,并进一步分析其与β1-AA之间的相关性.结果 冠心病患者血清中β1-AA滴度及阳性率明显高于对照组（P〈0.001）;β1-AA被动免疫8周诱导小鼠心功能不全;标记法芯片技术筛选出37个差异表达的细胞因子,其中趋化因子CXCL16的表达明显高于对照组（改变倍数〉20）;GO分析显示该细胞因子主要参与正向调节细胞死亡、迁移、运转及细胞组分改变等重要的生命过程,KEGG通路富集显示CXCL16显著富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路及趋化因子信号通路;ELISA结果显示,β1-AA阳性冠心病患者血清中CXCL16的水平显著高于β1-AA阴性组（P〈0.01）,且与β1-AA之间成正向相关（P〈0.01,r=0.43）.结论 趋化因子CXCL16可能是β1-AA诱导心功能不全的关键细胞因子.

STAT3激活促进K562细胞中AHSP的表达升高

近年对伴侣分子AHSP的研究结果表明,在?血红蛋白累积导致的病理状态下,大量存在的AHSP可以增强红系细胞的抗氧化能力.但是,氧化胁迫条件下内源性AHSP基因表达的调控机制仍未见报道.本研究探讨了一种抗氧化调控蛋白STAT3对AHSP表达的影响及其分子机制.在K562细胞中,STAT3信号通路的激活剂白介素6(IL-6)可以增加AHSP的表达水平.同时,本底水平干扰STAT3的表达后,AHSP的表达量下降.本研究在?珠蛋白过表达的K562稳定细胞株中检测了AHSP在氧化胁迫条件的表达水平.实时定量PCR的结果显示,AHSP与STAT3的表达都显著增强.进一步,染色质免疫共沉淀的实验证明,IL-6和过表达的?珠蛋白都可以诱导STAT3在AHSP启动子区的结合增强.野生型及突变的双荧光素酶报告基因检测结果显示,AHSP启动子区的SB3位点为一个IL-6应答元件,表明STAT3可以直接调控AHSP基因的表达.最后,通过凝胶阻滞实验再次确认了STAT3在SB3元件上的结合.本研究揭示了一个AHSP在细胞氧化还原状态改变时的补偿性调控机制,即AHSP受到STAT3信号通路的调控.本工作为地中海贫血症治疗中提高AHSP水平的研究方案提供了一些思路.