HPLC法测定血浆中尿嘧啶和二氢尿嘧啶的含量

目的:建立人血浆中内源性尿嘧啶(U)和二氢尿嘧啶(UH2)的HPLC测定方法,为通过UH2/U比值评价体内二氢嘧啶脱氢酶活性提供方法学基础。方法:采用Shim-pack CLC-ODS柱(6mm×150mm,5μm),以0.05mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH值为4.0)为流动相,测定U的检测波长为260nm,测定UH2的检测波长205nm。以含3%牛血清白蛋白(BSA)的水溶液配制标准样品和质控样品。以溴尿嘧啶为内标,采用叔丁基甲醚/正丙醇(75:25)为提取溶剂进行两次提取,氮气吹干、复溶后进样分析。结果:U在5～200μg·L-1的范围内线性良好(r=0.9995,n=6),测定的批内变异RSD在1.73%～3.45%之间,批间变异RSD在1.76%～2.53%之间,回收率为96.15%～105.09%;UH2在10～400μg·L-1的范围内线性良好(r=0.9996,n=6),测定的批内变异RSD在3.67%～3.80%之间,批间变异RSD在3.40%～5.74%之间,回收率为101.51%～104.06%。结论:本方法灵敏度高,操作简便易行,为测定体内尿嘧啶和二氢尿嘧啶,进而评价二氢嘧啶脱氢酶活性提供方法学基础。

我院氟化嘧啶类药物治疗妊娠滋养细胞疾病的不良反应回顾性分析

目的:比较含氟脲苷(FUDR)方案与含5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗方案治疗妊娠滋养细胞疾病的不良反应发生率和严重程度。方法:采用回顾性分析方法,统计我院2000年和2005年氟化嘧啶类药物治疗妊娠滋养细胞疾病患者的恶心、呕吐、腹泻等胃肠道反应,及白细胞减少、中性粒细胞减少和血小板减少等骨髓抑制的发生率和严重程度。结果:二联疗法时,初治患者和外院转入患者组,使用含FUDR和含5-FU方案的Ⅲ/Ⅳ度腹泻、白细胞减少、中性粒细胞减少和血小板减少发生率无统计学差异,但初治患者使用含FUDR方案的Ⅲ/Ⅳ度恶心、呕吐发生率显著高于含5-FU方案。三联疗法时,初治患者组,含FUDR方案的Ⅲ/Ⅳ度恶心、呕吐、中性粒细胞减少显著高于含5-FU方案;外院转入组,含FUDR方案的Ⅲ/Ⅳ度白细胞减少、中性粒细胞减少和血小板减少症显著高于含5-FU方案。结论:氟化嘧啶类药物治疗妊娠滋养细胞疾病中,含FUDR三联疗法的严重恶心、呕吐和骨髓抑制发生率高于含5-FU方案。

130名妊娠滋养细胞疾病患者的二氢嘧啶脱氢酶活性分布及其与该酶基因多态性的关系

目的:对妊娠滋养细胞疾病患者进行二氢嘧啶脱氢酶(DPD)活性分析,并考察二氢嘧啶脱氢酶基因(DPYD)多态性与DPD活性的关系。方法:选择已确诊为妊娠滋养细胞疾病、使用含氟化嘧啶类药物治疗并签署知情同意书的患者作为化疗组患者;从住院病历中筛选出发生过严重不良反应或因不良反应而停药者,发出随诊函,在患者自愿回访时采集血标本,作为回访组;采用HPLC法测定患者DPD活性(以二氢尿嘧啶/尿嘧啶比值表示,即UH2/U),分析DPD活性分布特点。在前期研究DPYD基因型的基础上,考察DPYD多态性与DPD活性的关系。结果:共有130名妊娠滋养细胞疾病患者参加研究,化疗组105名,回访组25名。化疗组患者的UH2/U比值为(7.91±3.23),回访组比值为(7.46±2.00),均近似呈正态分布,但个体间变异程度较大。携带DPYD*2杂合子变异和C2303A杂合子变异患者的UH2/U比值低于DPD活性均值的70%,表明DPYD*2和C2303A杂合子变异与DPD活性缺乏相关;DPYD*9变异与DPD活性未见明显相关关系。结论:中国妊娠滋养细胞疾病患者中存在与DPD活性缺乏相关的DPYD*2和C2303A突变者,但发生频率可能低于1%;DPYD*9、A720C和A2670C在中国人群中呈多态性分布,但未见与DPD活性降低相关。

妊娠滋养细胞疾病患者的二氢嘧啶脱氢酶基因多态性分析

目的探索妊娠滋养细胞疾病患者的二氢嘧啶脱氢酶基因（DPYD）多态性。方法采用多聚酶链反应（PCR）一直接测序方法检测DPYD中A74G，T85C（DPYD^＊9），IVS14＋IG→A（DPYD^＊2），C2303A和A2846T等5个位点的突变频率，并对DPD活性缺乏以及使用氟化嘧啶类药物出现严重不良反应的回访患者的DPYD基因中外显子4、外显子5、外显子6、外显子7、外显子8、外显子10、外显子11、外显子12、外显子13、外显子21和外显子23进行分析。结果130名妊娠滋养细胞疾病患者中，化疗组患者105名，使用含氟化嘧啶类药物治疗发生严重不良反应的回访患者25名。患者中存在DPYD^＊2，DPYD^＊9，A496G，A1627G和C2303A等位点变异，新发现A720C和A2670C2种同义突变。化疗组患者DPYD^＊9等位基因发生频率为6．93％，C2303A发生频率为0．49％；未发现DPYD^＊2、A74G和A2846T位点变异。DPYD^＊2，DPYD^＊9，A496G，A720C，A1627G，C2303A和A2670C在DPD活性缺乏及曾出现严重不良反应的回访患者中的发生频率分别为1．14％，7．95％，3．41％，37．50％，18．18％，1．14％和15．91％。结论在中国妊娠滋养细胞疾病患者中发现DPYD^＊2，DPYD^＊9，A496G，A1627G等位点变异，首次在中国人群中发现C2303A，A720C和A2670C变异。DPYD^＊2和C2303A变异可能与DPD活性缺乏相关。