一例Wiskott-Aldrich综合征致病基因突变分析及产前诊断

目的研究1例Wiskott-Aldrich综合征(WAS)的致病基因突变类型,并以此为依据对该患者家庭做定制的产前诊断。方法采集该家系中患者及正常人血样,提取DNA,用聚合酶链反应扩增WASP基因,并对扩增产物进行直接测序,确定突变位点。患儿母亲再次妊娠12周时,取胎儿绒毛组织,进行定制的产前诊断。结果患儿存在WASP基因c.107-108delTT突变,其母亲为杂合子,胎儿不存在该位点的异常。结论该患儿发病是由WASP基因突变所致,胎儿不存在此位点异常。

一成人型多囊肾家系的遗传检测及产前诊断

目的对一常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)家系进行致病基因突变鉴定,并对先证者妻子首次妊娠进行产前诊断。方法用聚合酶链式反应,通过微卫星标记进行基因定位、DNA序列测定,确定基因突变;用AS-PCR对家系其他患者成员进行突变点检测和筛查;联合应用突变检测和连锁分析进行产前诊断。结果该家系中多囊肾疾病的致病基因为PKD2,突变为外显子5中c.1249C(T(p.R417X);胎儿产前诊断结果显示未获得致病突变。结论该家系的致病突变为c.1249C(T(p.R417X),成功进行了产前诊断。

经典型苯丙酮尿症家系基因突变分析及产前诊断

目的分析经典型苯丙酮尿症家系基因突变，并联合短串联重复序列（short tandem repeats，STR）连锁分析对经典型PKU家系进行产前基因诊断。方法采用分层测序的方法，对44个经典型苯丙酮尿症家系先证者进行外显子测序分析，并在其父母中进行验证。选择PAH基因内部及上下游区域的3个STR位点PAH-STR、PAH-26、PAH-32，采用多重荧光PCR技术分析3个STR位点在PKU家系及正常对照人群中的基因型分布；联合基因测序及STR连锁分析方法对44个家系的47例胎儿进行产前基因诊断。结果在44个经典型PKU家系经分层测序后明确了84个突变等位基因，突变检出率达95．45％（84／88），鉴定了31个突变位点，其中突变频率最高的是R243Q（21．59％），其次是EX6-96A〉G（6．82％）、IVS4-1G〉A（5．86％）、IVS7＋2T〉A（5．86％）、V399V（4．55％）、R400K（4．55％）等。3个sTR位点的多态信息量（polymorphism information content，PIC）分别是PAH-STR，PIC=0．71；PAH=26，PIC=0．48；PAH=32，PIC=0．40。47例胎儿均获得了产前诊断，其中11例（23．4％）为受累胎儿，12例（25．5％）未检测到与先证者相同的致病等位基因，24例（51．1％）为杂合性突变携带者。结论PAH基因外显子分层测序联合STR连锁分析可为经典型PKU家系提供高效、准确的产前诊断方法。

羊水细胞低密度脂蛋白受体基因突变分析在家族性高胆固醇血症产前诊断中应用

目的探讨羊水细胞低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)基因突变分析在家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)产前诊断中的应用价值。方法 3例曾生育FH重症患儿并再次妊娠的妇女及其核心家系成员,提取其外周血基因组DNA,筛查LDLR基因突变;于妊娠16～20周在超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取胎儿脱落细胞DNA,分别对家系存在的LDLR基因突变进行检测,判断胎儿是否为重症FH。结果 3个家系均符合FH诊断,并分别在LDLR基因检测到2个互不相同的杂合突变位点;胎儿LDLR基因核苷酸序列分析证实,1号家系胎儿仅携带该家系1个突变位点判断为杂合(轻症),2号家系胎儿携带该家系2个突变位点判断为复合杂合(重症),3号家系胎儿未检到该家系的突变位点推测为正常个体。结论 FH孕妇羊水脱落细胞LDLR基因分析安全有效,可尽早发现FH纯合子患儿。

产前基因诊断中差错的来源与对策

产前诊断是一项高风险服务，疾病情况复杂、检测过程环节多，稍有疏漏就会出现差错。产前基因诊断有更强的针对性，不是通常意义上的确定胎儿是否异常，而是确定胎儿是否获得与先证者一样的基因型。本文就导致产前基因诊断差错的因素，从不同的环节给予分析。

一例罕见7q11．23重复综合征的产前诊断

目的联合应用多种技术产前检测7q11．23重复综合征1例。方法采集1例孕中期胎儿的羊水及其父母的外周血样本，行染色体G显带分析，提取羊水DNA进行BoBs分析，同时用单核苷酸多态性微阵列芯片（single nucleotide polymorphism array，SNP array）进行全基因组拷贝数变异分析，最后用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）进行确诊。结果胎儿羊水细胞染色体G显带核型及父母染色体核型未见异常；BoBs分析检出胎儿7q11．23区存在重复；SNP—array Affymetrix CytoScan 750 KArray基因芯片分析结果显示胎儿染色体7q11．23区存在1．5Mb片段的重复；FISH检测确认胎儿为nucish7q11.23（ELN×3）。结论通过结合BoBs分析、SNParray以及FISH，产前诊断1例7q11．23重复综合征胎儿。

中国人DMD基因缺失检测多重PCR新体系的建立

目的建立新的适合中国人DMD特征的多重PCR体系，提高缺失突变的检出率。方法对经“一步到位”诊断程序和MLPA分析确定的355例缺失型DMD患者的缺失突变谱进行归纳总结，筛选出缺失高发的外显子区域，挑选代表性外显子，组装成扩增体系，优化多重PCR条件。结果经过对355例缺失型DMD患者的突变谱分析后，总结出两套新的多重PCR体系。第一套检测体系分两组，检测10个外显子（外显子5、8、17、44、45、47、49、50、51和52），可检出92％（326／355）的缺失；第二套检测体系检测另外5个外显子（外显子12、19、35、43和54），可进一步检测到5％（17／355）的缺失。在后续22例DMD患者的检测验证中，所有患者的多重PCR结果均与MLPA结果吻合。结论这两套新体系是在对355例中国缺失型DMD患者的缺失分析的基础上归纳而成，所涉及的DMD病例来源遍布全国，更适合于中国人群DMD患者缺失突变的检测。