ELISA法测定恒河猴血清中艾塞那肽衍生物的抗药抗体

目的:建立测定恒河猴血清中艾塞那肽衍生物抗药抗体(ADA)的ELISA方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体。方法:将药物包被在96孔板中作为捕获试剂,捕获猴血清样本中的抗药抗体,羊抗猴IgG辣根过氧化物酶偶联二抗作为检测试剂与被捕获的抗药抗体结合。阴性对照孔加入的血清样本为经筛选的空白基质,而阳性对照孔直接包被经筛选的空白恒河猴血清,其中的IgG被包被于板孔中,其余步骤与阴性对照孔一致。方法建立后进行筛选判断阈值,确证判断阈值,方法精密度验证。结果:筛选判断阈值为0.1,方法批内批间精密度小于25%,样品复孔A值变异小于15%,确证判断阈值为84%游离药物抑制率。艾塞那肽衍生物连续给药13周后在恒河猴体内产生抗药抗体,抗体阳性率与对照药相当。结论:成功建立及验证该方法,并用于艾塞那肽衍生物长期毒性研究伴随免疫原性测定中,成为该药申请临床试验的报批资料之一。