TT病毒感染的肝炎患者外周血单个核细胞中TT病毒复制的研究及克隆测序

目的 了解TTV阳性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)TTV DNA存在及复制情况。方法 采用巢式PCR技术和绿豆芽核酸酶消化方法研究其存在及复制情况,并克隆测序分析证实。结果 16例TTV阳性肝炎患者PBMC中有14例TTV DNA阳性,并同时用绿豆芽核酸酶消化所提取的PBMC DNA,有2例为TTV DNA阳性。这3个序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列同源性大于95％以上(95～98％)。结论 我们在国内外首次报道TTVDNA可在TTV阳性肝炎患者PBMC中存在及复制,表明肝细胞并非为TTV感染和复制的唯一场所。

北京地区TT病毒分离株全基因的克隆及序列测定

目的 克隆和测定北京地区TT病毒 (TTV)分离株全基因序列。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)技术从 1例临床非甲～庚型肝炎病人血清中分段扩增TTV全基因 ,获得 5个互相重叠的片段 ,分别长 199bp(1 199) ,12 6 7bp(90 135 6 ) ,878bp(135 4 2 2 31) ,112 9bp(2 178 330 6 ) ,434bp(330 6 3739) ,用标准的分子生物学方法测定了这 5个序列 ,从而得到全长TTV基因序列。结果 北京地区TTV分离株全基因长 3739个核苷酸 ,含 2个开放读码框架 (ORF)。第 1个ORF位于 5 89至 2 90 2位核苷酸 ,编码 770个氨基酸 ,第 2个ORF位于 10 7至 715位核苷酸 ,编码 2 0 2个氨基酸。TTV基因的 5′和 3′末端为非编码区 ,分别有 10 6和 837个核苷酸。在该基因中A占 31 2 % ,C占2 5 4% ,G占 2 2 5 % ,T占 2 0 9%。北京地区TTV分离株与日本分离株的核苷酸和氨基酸同源性均在 95 %以上。结论 北京地区TTV分离株和日本株属同一基因型。

19例SARS死亡病例免疫学特征分析

目的 总结 19例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例的免疫学特点。方法 分析SARS死亡病例的一般临床特征 ,并用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对计数 ,并与艾滋病 (AIDS)患者及正常对照组比较。结果 SARS死亡病例的淋巴细胞总数、T、T4和T8淋巴细胞绝对数均显著低于AIDS组及正常对照组(P <0 0 0 1) ,4项指标最低值分别为 85个 /mm3 、3 8个 /mm3 、2 6个 /mm3 和 14个 /mm3 ;SARS组的T4/T8淋巴细胞比值高于AIDS组 (P <0 0 0 1) ,与正常对照组无显著性差异 (P =0 8663 ) ;NK和B淋巴细胞低于正常组 (P <0 0 0 1) ,最低值分别为 2个 /mm3 和 17个 /mm3 。结论 SARS患者的细胞和体液免疫功能明显低下。检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对数有助于判断SARS患者的病情和预后 。

101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测

目的 研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒 (SARS CoV)RNA的情况。方法 采用荧光定量聚合酶链反应法 (FQ PCR)检测 10 1例病程为 10～ 5 5d的SARS患者、2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群粪便中SARS CoVRNA。结果 10 1例SARS患者的粪便标本中 5 8例 (5 7 4 % )SARS CoVRNA阳性 ;2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群的粪便标本均为阴性。SARS患者发病后 10～ 19、2 0～ 2 9、30～ 39和 4 0～ 5 5d ,粪便中SARS CoVRNA阳性率分别为 10 0 % (8/ 8)、6 7 7% (2 1/ 31)、4 7 4 % (2 7/ 5 7)和 4 0 0 % (2 / 5 )。粪便中SARS CoVRNA载量对数值分别为 6 0 6± 2 0 5、4 5 1± 1 2 3、3 82± 1 4 4和 3 5 7± 1 2 5。结论 SARS患者急性期粪便中SARS CoVRNA阳性率和载量对数值最高 。

人源抗人免疫缺陷病毒1型噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）特异性噬菌体抗体库，制备人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体。方法以半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）从ＨＩＶ－１感染者外周血单个核淋巴细胞中扩增抗体重链Ｆｄ和轻链（ｋ）基因，与噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３连接，构建噬菌体抗体Ｆａｂ组合文库。对抗体库进行３轮吸附－洗脱－扩增的亲和选择后，以ＥＬＩＳＡ法筛选抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体，并进行ＤＮＡ序列分析和Ｆａｂ的可溶性表达。结果半巢式ＰＣＲ有效地扩增出Ｆｄ和ｋ基因，以此构建成容量为１９５×１０７的噬菌体抗体库。３轮亲和选择使特异性抗体得到高度富集，抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体阳性克隆占３２％。对一阳性克隆抗体基因ＣＨ１和ＣＬ部分ＤＮＡ序列进行了测定，并在大肠杆菌表达出可溶性Ｆａｂ。结论抗ＨＩＶ－１特异性噬菌体抗体库的构建和人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体的制备为今后筛选抗ＨＩＶ中和抗体奠定了基础，具有重要的应用价值。