TT病毒感染的肝炎患者外周血单个核细胞中TT病毒复制的研究及克隆测序

目的 了解TTV阳性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)TTV DNA存在及复制情况。方法 采用巢式PCR技术和绿豆芽核酸酶消化方法研究其存在及复制情况,并克隆测序分析证实。结果 16例TTV阳性肝炎患者PBMC中有14例TTV DNA阳性,并同时用绿豆芽核酸酶消化所提取的PBMC DNA,有2例为TTV DNA阳性。这3个序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列同源性大于95％以上(95～98％)。结论 我们在国内外首次报道TTVDNA可在TTV阳性肝炎患者PBMC中存在及复制,表明肝细胞并非为TTV感染和复制的唯一场所。

汉防己甲素对大鼠实验性肝纤维化胶原蛋白合成的抑制作用

结果表明汉防己甲素对ＣＣｌ＿４诱发的大鼠肝纤维化有明显的抑制作用。

实验性矽肺纤维化组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达

在制备人和小鼠的Ｐｒｏαｌ（Ⅰ）、Ｐｒｏαｌ（Ⅲ）前胶原ｃＤＮＡ探针的基础上，采用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ斑点杂交及原位杂交技术，观察了二氧化硅诱导二个月和四个月的矽肺纤维化大鼠肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原基因的ｍＲＮＡ水平和分布情况。实验结果表明，肺纤维化组织中Ｐｒｏαｌ（Ⅰ）、Ｐｒｏαｌ（Ⅲ）ｍＲＮＡ含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），两型ｍＲＮＡ在正常肺组织主要分布于肺泡间隔的成纤维细胞中，而在病变组织主要分布于细胞性结节和增厚间质的成纤维细胞中。我们认为二氧化硅诱导的矽肺纤维出组织中胶原纤维的增生和积聚与胶原基因的表达密切相关。

19例SARS死亡病例免疫学特征分析

目的 总结 19例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例的免疫学特点。方法 分析SARS死亡病例的一般临床特征 ,并用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对计数 ,并与艾滋病 (AIDS)患者及正常对照组比较。结果 SARS死亡病例的淋巴细胞总数、T、T4和T8淋巴细胞绝对数均显著低于AIDS组及正常对照组(P <0 0 0 1) ,4项指标最低值分别为 85个 /mm3 、3 8个 /mm3 、2 6个 /mm3 和 14个 /mm3 ;SARS组的T4/T8淋巴细胞比值高于AIDS组 (P <0 0 0 1) ,与正常对照组无显著性差异 (P =0 8663 ) ;NK和B淋巴细胞低于正常组 (P <0 0 0 1) ,最低值分别为 2个 /mm3 和 17个 /mm3 。结论 SARS患者的细胞和体液免疫功能明显低下。检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对数有助于判断SARS患者的病情和预后 。

北京地区TT病毒分离株全基因的克隆及序列测定

目的 克隆和测定北京地区TT病毒 (TTV)分离株全基因序列。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)技术从 1例临床非甲～庚型肝炎病人血清中分段扩增TTV全基因 ,获得 5个互相重叠的片段 ,分别长 199bp(1 199) ,12 6 7bp(90 135 6 ) ,878bp(135 4 2 2 31) ,112 9bp(2 178 330 6 ) ,434bp(330 6 3739) ,用标准的分子生物学方法测定了这 5个序列 ,从而得到全长TTV基因序列。结果 北京地区TTV分离株全基因长 3739个核苷酸 ,含 2个开放读码框架 (ORF)。第 1个ORF位于 5 89至 2 90 2位核苷酸 ,编码 770个氨基酸 ,第 2个ORF位于 10 7至 715位核苷酸 ,编码 2 0 2个氨基酸。TTV基因的 5′和 3′末端为非编码区 ,分别有 10 6和 837个核苷酸。在该基因中A占 31 2 % ,C占2 5 4% ,G占 2 2 5 % ,T占 2 0 9%。北京地区TTV分离株与日本分离株的核苷酸和氨基酸同源性均在 95 %以上。结论 北京地区TTV分离株和日本株属同一基因型。

101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测

目的 研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒 (SARS CoV)RNA的情况。方法 采用荧光定量聚合酶链反应法 (FQ PCR)检测 10 1例病程为 10～ 5 5d的SARS患者、2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群粪便中SARS CoVRNA。结果 10 1例SARS患者的粪便标本中 5 8例 (5 7 4 % )SARS CoVRNA阳性 ;2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群的粪便标本均为阴性。SARS患者发病后 10～ 19、2 0～ 2 9、30～ 39和 4 0～ 5 5d ,粪便中SARS CoVRNA阳性率分别为 10 0 % (8/ 8)、6 7 7% (2 1/ 31)、4 7 4 % (2 7/ 5 7)和 4 0 0 % (2 / 5 )。粪便中SARS CoVRNA载量对数值分别为 6 0 6± 2 0 5、4 5 1± 1 2 3、3 82± 1 4 4和 3 5 7± 1 2 5。结论 SARS患者急性期粪便中SARS CoVRNA阳性率和载量对数值最高 。

人源抗人免疫缺陷病毒1型噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）特异性噬菌体抗体库，制备人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体。方法以半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）从ＨＩＶ－１感染者外周血单个核淋巴细胞中扩增抗体重链Ｆｄ和轻链（ｋ）基因，与噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３连接，构建噬菌体抗体Ｆａｂ组合文库。对抗体库进行３轮吸附－洗脱－扩增的亲和选择后，以ＥＬＩＳＡ法筛选抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体，并进行ＤＮＡ序列分析和Ｆａｂ的可溶性表达。结果半巢式ＰＣＲ有效地扩增出Ｆｄ和ｋ基因，以此构建成容量为１９５×１０７的噬菌体抗体库。３轮亲和选择使特异性抗体得到高度富集，抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０噬菌体抗体阳性克隆占３２％。对一阳性克隆抗体基因ＣＨ１和ＣＬ部分ＤＮＡ序列进行了测定，并在大肠杆菌表达出可溶性Ｆａｂ。结论抗ＨＩＶ－１特异性噬菌体抗体库的构建和人源抗ＨＩＶ－１ｇｐ１２０单克隆抗体的制备为今后筛选抗ＨＩＶ中和抗体奠定了基础，具有重要的应用价值。