北京市药品零差率销售政策的实施对广大社区居民看病就医的影响研究

目的了解药品零差率销售政策实施后,对广大社区居民看病就医带来的影响。方法采用问卷调查的方式,调查北京市城八区范畴内的社区卫生服务机构,并随机抽查前来就诊的社区居民,收集的数据采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 2007年和2008年社区卫生服务机构的次均门急诊费用和次均门急诊药费较2006年呈明显下降的趋势;2008年的均处方费用较2007年明显减少;且随着时间的推移,选择"大病去医院、小病在社区"这种就医模式的社区居民比例呈递增趋势。结论随着药品零差率销售政策的开展,广大社区居民在社区卫生服务机构就诊的费用较以往明显减少,同时社区居民的就医意向也逐渐向"大病去医院、小病在社区"转变。

八味抗纤方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的观察八味抗纤方对慢性乙型肝炎血清肝纤维化指标、肝组织的影响。方法将66例中医辨证为气虚血瘀,湿热未尽的慢性乙型肝炎患者按2:1比例随机分为中药治疗组和对照组,两组患者均给予维生素C、复合维生素B口服,中药治疗组加用八味抗纤方,疗程6个月。观察两组患者肝功能、血清透明质酸、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白等变化,18例患者行治疗前后肝组织活检。结果中药治疗组血清肝纤维化指标的联合评价效果显著优于对照组(P=0.020),中药尤其可以明显改善患者血清透明质酸的异常升高。治疗前后的肝活检比较显示,对照组肝纤维化没有自发缓解,43%(3/7例)患者病变处于进展之中。而八味抗纤方能够使73%(8/11例)患者的肝组织学病变维持稳定,18%(2/11例)患者肝纤维化得到逆转,仅9%(1/11例)患者纤维化仍在进展。结论中药八味抗纤方能有效改善血清肝纤维化指标,治疗前后肝活检病理组织学变化显示能阻止肝纤维化的进展。

循环肿瘤DNA在肝癌分子检测中的应用及研究进展

肿瘤细胞可以释放核酸片段进入循环中,成为循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA),被认为是新一代肿瘤分子标志物。ctDNA携带了所有肿瘤细胞的基因变异信息,在肿瘤发展的早期阶段即可检测到。因此基于ctDNA检测的肿瘤"液体活检"可帮助对肿瘤进行无创、实时、全面的动态监测,同时克服了传统组织穿刺的局限性。与大多数恶性肿瘤类似,肝癌发生发展中伴随着基因遗传学和表观遗传学变异,但有关肝癌患者循环肿瘤DNA的研究不多,本文就循环肿瘤DNA检测在肝癌诊断和预后分析中的研究进展做一综述。

丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选

目的:筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果:成功构建人胰腺cDNA文库以及pGB-KT7-HCVE2重组质粒,筛选出8种与HCVE2蛋白相结合的蛋白基因,分别为:胰凝乳蛋白酶原B1前体、胰蛋白酶原、胆盐刺激酯酶、CDK5、羧肽酶B1、人类v-Ki-ras2、鼠Kirsten肉瘤、弹性蛋白酶3A及辅脂肪酶.结论:筛选出的与HCVE2蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

高尔基体蛋白73定量检测方法的建立

目的建立人血清中高尔基体蛋白73（GP73）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记GP73单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、线性范围、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为18．5ng／ml，线性范围为25～500ng／ml，批内、批间变异均〈10％。检测GP73临床高、中、低值血清回收率为分别为95．3％、92．6％和103．7％；在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了定量检测血清中GP73的方法，该方法能够满足临床检测的需球。

HBV相关糖基转移酶Glt25D2的核苷酸单糖结合活性分析

目的体外克隆表达人类糖基转移酶Glt25D2,利用Biacore分析系统对其活化单糖及钙离子结合活性进行分析。方法构建Glt25D2原核表达载体pET32a-Glt25D2,转化大肠埃希菌BL21,克隆表达糖基转移酶Glt25D2。离心集菌,制备蛋白样品,进行SDS-PAGE电泳分析;融合蛋白线性梯度洗脱,Ni-NTA柱纯化,后做Western blot鉴定。用纯化后的Glt25D2融合蛋白包被CM5芯片,分别用不同浓度的活性单糖及钙离子灌注芯片,利用Biacore生物分子相互作用分析仪分析Glt25D2的活化单糖及钙离子结合活性。结果体外成功表达人类糖基转移酶Glt25D2融合蛋白。Biacore分析显示,该糖基转移酶与400、200、100、50μg/ml唾液酸的结合活性分别为108、71、50和20 RU,与200、100、50、0μg/ml钙离子的结合活性分别为37、20、10和0 RU。结论人类糖基转移酶Glt25D2重组蛋白具有较强的钙离子及唾液酸结合活性。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测方法的建立

目的建立人血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记HBV-LP单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为5ng／ml，批内、批间变异均小于10％。在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了血清中HBV—LP的检测方法，该方法性能能够满足临床检测的需求。

平分型GlcNAc糖基化修饰的生物学功能

平分型GlcNAc（bisecting N—acetylglucosamine）修饰是糖蛋白N-聚糖核心的常见分支修饰形式，哺乳类动物该糖基化修饰由β1，4-N-乙酰葡糖氨基转移酶Ⅲ催化。该修饰对分子结合、信号传导、生殖发育以及肿瘤细胞的生物学行为都有重要影响。相应地，针对平分型GlcNAc修饰N-聚糖的检测也正逐步成为糖生物学领域内的研究热点之一。

Ⅲ型前胶原氨基端肽的化学发光定量检测

目的建立人血清中Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）的定量微孔板化学发光酶免疫检测方法。方法辣根过氧化物酶标记PⅢNP单抗，选用鲁米诺化学发光体系检测，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、线性范围、稳定性等性能指标；并应用临床血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的线性范围为0．8—85ng／ml，灵敏度0．5rig／ml，批内、批间变异均〈10％。检测PⅢNP的临床高、中、低值血清回收率分别为96．2％、91．2％和101．1％；在4℃和37℃条件下分别进行了3d、5d．7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．99，标准偏差〈6％；比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义。结论成功建立了定量PmNP化学发光酶免疫分析方法，并且有较好的准确性、灵敏度、重复性，与进口试剂检测结果等效。