猪圆环病毒2型毒株分离鉴定和体外增殖特性研究

为分离鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)毒株并研究其体外增殖特性,本研究采用PCR法分别对从山东、山西、北京和河北收集的疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病猪的病料进行检测,将检测结果为PCV2阳性的病料处理后接种PCV阴性的PK15A细胞连续传代进行病毒分离,观察每代细胞是否有病变,采用PCR、间接免疫荧光法(IFA)对第3代培养物进行鉴定,对各毒株的全基因组进行克隆、测序和系统进化分析,并将PCV2各分离株连续传20代,对其体外增殖特性进行了研究。结果共分离到5株猪圆环病毒2型毒株,分别命名为DBN-SD02、DBN-SX07DBN-BJ08、DBN-HB12和DBN-HB13株,GenBank登录号分别为FJ660967、FJ660968、FJ660969、FJ660970和FJ660971。各分离株基因组全长均为1767bp,系统进化分析结果表明,除DBN BJ-08属于PCV2a基因型外,其余均属于PCV2b基因型,基因组序列核苷酸同源性为98.5%～99.7%,体外增殖特性研究结果表明,随着传代次数的增加病毒感染滴度均有明显的提高。

鸭疫里氏杆菌外膜蛋白研究进展

综述了鸭疫里氏杆菌外膜蛋白的研究进展。鸭疫里氏杆菌病为危害养鸭业最严重的疾病之一。外膜蛋白作为鸭疫里氏杆菌不同血清型的共同免疫原性蛋白,可同时诱导机体的体液免疫和细胞免疫,具有异种血清型的免疫交叉保护作用,其与鸭疫里氏杆菌毒力密切相关,且在鸭疫里氏杆菌诊断及疫苗研制中具有重要的应用价值。

生物制品中支原体污染及清除方法的研究进展

支原体是生物制品污染中较常见的一种微生物,它可以污染细胞、病毒批、血清等制品,给科研及生物制品产业带来危害。文章简要介绍了支原体污染生物制品后带来的危害,并对清除支原体方法的研究进展进行了综述。

猪博卡病毒1型/2型PCR检测方法的建立

猪博卡病毒(PBo V)是2009年新发现的一种DNA病毒,常于腹泻仔猪体内检测到该病毒。为建立该病毒的检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的PBo V 1/2型的高度同源保守序列设计一对特异性引物,经PCR扩增条件优化,建立了PBo V 1/2型的PCR检测方法。特异性试验结果显示,该PCR方法仅从PBo V 1或2型的阳性病料样品中特异性的扩增出751 bp的目的片段,而对猪伪狂犬病毒、圆环病毒、大肠杆菌、沙门氏菌的核酸样品的扩增结果均为阴性。敏感性试验显示,该PCR方法对PBo V 1/2重组质粒标准品的最低检测量为34.8拷贝/μL。对来自河南中牟、开封、兰考、濮阳、洛阳等地猪场发生腹泻疫情的70份猪病料样品,采用该方法进行检测,其中10份样品呈PBo V 1/2型阳性,阳性率为14.29%。该PCR检测方法的建立为PBo V1/2型的诊断和监测提供技术支持。

猪博卡病毒1/2型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速和高通量检测猪博卡病毒(PBoV)的方法,本研究根据GenBank中登录的PBoV 1/2型NS1基因高度同源保守序列设计并合成一对特异性引物,建立了检测PBoV1/2的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。结果表明,该方法对常见的其它病毒均未检测到荧光信号,而仅对PBoV1/2检测为阳性;其灵敏度为45拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;组内和组间变异系数均小于5%。本实验建立的荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,为PBoV的早期诊断和定量分析PBoV感染程度提供参考。

一株猪捷申病毒的分离与鉴定

北京地区某猪场猪群疑似感染猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV),为了分离与鉴定该病毒,从采集的脑组织样品中分离出病毒,并从病毒中提取总RNA,根据已报道的引物序列,经RT-PCR扩增得到部分编码主要结构蛋白的VP1基因和高度保守的5′-UTR区基因序列,将这些基因克隆到pEASY-Blunt载体中,经序列测定,与GenBank上的毒株序列进行比对。试验结果表明,分离的毒株与猪捷申病毒同源性为95%～100%。本试验成功分离获得一株猪捷申病毒北京地方流行毒株,命名为10BJ02株。

猪圆环病毒2型不同地区毒株的分离鉴定及基因型分析

分别对收集于山东、山西、北京和河北的PCV-2核酸阳性的病料进行PCV-2分离鉴定,采用PCR和间接免疫荧光法对各分离毒株进行鉴定,并对各分离毒株的全基因组进行克隆、测序和基因型分析。结果共分离到5株PCV-2毒株,分别命名为DBN-SD02、DBN-SX07DBN-BJ08、DBN-HB12和DBN-HB13株,GenBank登录号分别为FJ660967、FJ660968、FJ660969、FJ660970和FJ660971。各分离株基因组全长均为1 767bp,基因型分析表明,除DBN BJ-08属于PCV-2a外,其余均属于PCV-2b。

4种病毒性猪病流行病学调查与分析

利用ELISA和PCR/RT-PCR方法对2010年6月-2011年9月来自20个省市的病料和血清共13824份,分别进行了抗原和抗体的检测,以调查猪瘟(CSF)、猪圆环病毒病(PCVD)、猪蓝耳病(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)的流行情况。结果显示:抗原和猪场阳性率最高的均是PCVD,分别达到63.14%(334/529)和89.69%(87/97),最低的均是PR,分别达到10.01%(354/3537)和38.67%(58/150);抗体水平最高的是PR,最低的是PCVD,说明疫苗免疫具有一定效果;证实了目前PRRSV和HP-PRRSV均是流行毒株,并且在同一猪场同时检出这两个毒株的几率很大。以上结果呈现了4种疾病的感染情况,以期为养猪业提供参考,从而采取合理有效的防治措施。

猪圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。

规模猪场种猪扁桃体中猪瘟病毒的检测与猪瘟抗体监测方法的分析

猪瘟仍然是当前我国规模猪场需要重点防控的传染病,其发病呈现种群持续感染和非典型猪瘟的特点,因此,净化种群是控制猪瘟的根本性措施。通过对国内部分规模猪场种猪扁桃体活体采样进行免疫荧光检测,结果表明,种猪猪瘟病毒(CSFV)带毒率为8.9%(313/3516),总体阳性率为6.43%(351/5459),经过净化后,所有猪场种群CSFV带毒率显著降低。通过对临床血清学样品的对比分析,发现检测猪瘟抗体的阻断ELISA方法和间接血凝试验方法在判断结果上有一致性,但是检测抗体的滴度并无相关性。规模猪场需要对猪瘟采取综合防治措施来达到净化猪瘟的目标。

猪圆环病毒2型(PCV2-SX株)灭活疫苗免疫效果研究

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，该病毒可以协同其他因素增强疾病感染的危害。感染PCV2后可引起猪只消瘦、生长缓慢、饲料利用率低，抑制免疫系统，使机体免疫防御力降低，常常发生多疾病混合感染。自1991年加拿大发生该病之后，迅速蔓延到世界各地养猪国家，给养猪业带来了巨大的经济损失。

猪圆环病毒2型与猪捷申病毒混合感染的分子生物学诊断

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）是单股DNA的圆环病毒科、无囊膜病毒，直径为14～17nm，为已知的最小动物病毒之-。它分为2种血清型，即PCV-1和PCV-2。PCV-1无致病性，广泛存在于猪体内及猪源传代细胞系。

猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗宿主的感染机制

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪严重的繁殖障碍，断奶仔猪普遍发生肺炎、生长迟缓，以及死亡率增加等为临床特征的疾病。由于猪繁殖与呼吸综合征病毒具有高度的宿主依赖性，主要在肺脏、淋巴及其他组织巨噬细胞中大量复制，使宿主的免疫系统受到攻击并造成免疫抑制，