以核仁形成区银染蛋白等指标评价肿瘤患者免疫状况的研究

目的 比较分析各项免疫检测指标在肿瘤患者的变化情况 ,寻找可以真实反映肿瘤患者机体免疫状况相对理想的指标。方法 运用细胞培养、细胞化学银染技术、酶联免疫吸附测定、单向免疫扩散测定、KL型免疫图象分析系统及流式细胞仪等技术方法 ,分别检测健康人和恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞核仁形成区银染蛋白 (argyrophilicnuclearorganizerregionassociatedproteins,Ag NORs)、T细胞亚群及血浆细胞因子等项目。结果 与健康人比较 ,各种类型肿瘤患者外周血T细胞Ag NORs降低。胃肠道恶性肿瘤外周血T淋巴细胞Ag NORs、CD3、CD4显著减少 ,血浆TH1型细胞因子IL 2和IFN γ降低 ,TH2型细胞因子IL 6升高。外周血T淋巴细胞Ag NORs变化与患者化疗和术后的全身综合状况的恢复时相大致相符。经过对衡量人罹患恶性肿瘤时免疫状态作用的各项免疫指标进行筛选比较 ,单项指标中血浆细胞因子最佳。外周血T淋巴细胞Ag NORs优于T细胞亚群及NK细胞。联合应用 ,以T淋巴细胞Ag NORs、IFN γ及IL 2三项指标的检测结果为最佳 ,其判断恶性肿瘤发生可能性的敏感性和特异性分别达 93.1%和 96 .7%。结论 外周血T细胞Ag NORs可以作为反映患者机体免疫状况的一个具有临床应用前景的指标。外周血T淋巴细胞Ag NORs、IFN γ及IL

人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用

目的克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人 PAI1的单克隆抗体,以检测 PAI1在乳腺癌中的表达。方法利用逆转录(RT)-PCR 方法从人乳腺癌细胞株MDA231总 RNA 中扩增克隆 PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达 MS2-PAI1融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫 BALB/C 小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体。利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析 PAI1在乳腺癌中的表达水平。结果克隆了1209 bp 的 PAI1基因全长片段。经 ELISA 双筛,获得2株能稳定分泌抗 PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为 IgG1,且均能特异识别 PAI1,并与其他蛋白无交叉反应。Wb 结果显示,该抗 PAI1单抗与 MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合。免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株 MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应。结论克隆了人 PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对 PAI1的单克隆抗体。初步检测 PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究 PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的 PAI1奠定了可靠基础。