小鼠抗人Myosin Va多克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备Myosin Va多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法:PCR扩增编码人Myosin Va C末端(MyoVaCT)278个氨基酸的cD-NA片段,DNA重组入原核表达质粒pET28a,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基β-D硫代半糖苷(IPTG)诱导表达His-MyoVaCT融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。通过ELISA和免疫荧光法鉴定血清特异抗体效价和特异性。结果:成功构建了pET28a/MyoVaCT原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白His-MyoVaCT,纯化蛋白免疫小鼠后产生的Myosin Va多抗可特异检测细胞内源性Myosin Va的表达及定位情况,同时能特异识别细胞内外源表达的Myosin Va分子。结论:获得了效价和特异性都良好的Myosin Va抗体,适合应用于Myosin Va的检测。