单中心565例肝移植病例分析

目的:总结肝移植患者预后的影响因素,探讨进一步提高肝移植疗效的措施。方法:回顾性分析565例原位肝移植患者资料,统计患者生存率及并发症发生率。结果:565例肝移植患者的随访时间为3～104个月。2000年5月至2003年12月完成的171例患者术后1个月、1年、3年、5年的存活率分别为87.8%、73.2%、60.2%、57.7%;2004年1月至2009年1月完成的394例患者术后1个月、1年、3年、5年的存活率分别为91.2%、84.9%、69.2%、66.1%,存活率显著提高;良性肝病患者术后1年、3年、5年的存活率分别为83.3%、79.8%、78.5%;肝癌患者术后1年、3年、5年的存活率分别为78.4%、49.1%、45.1%。肝移植术后早期因腹腔内出血接受二次手术、血管性并发症、严重感染、急性肾功能衰竭、移植物原发无功能的发生率分别为1.1%、1.6%、13.6%、7.4%、1.2%。术后的远期并发症主要有:肝癌复发、胆道并发症、乙肝复发、新发恶性肿瘤、移植物慢性失功能、慢性肾功能损伤等,发生率分别为40.3%、6.7%、2.1%、0.9%、0.9%、1.1%;其中,符合和超出米兰标准的肝癌患者的肝癌复发率分别为8.1%和62.5%,所有肝癌复发患者的中位生存时间为19.6个月。结论:肝移植是治疗各种终末期肝病的有效措施,在供肝短缺的情况下,应优先将供肝分配给良性肝病患者和符合米兰标准的肝癌患者。

外科治疗门静脉高压症手术适应证的初步探讨

目的探讨在不同条件下，合理选择门静脉高压症的手术方式。方法分析了1991～2002年12年间收治的508例门静脉高压患者，其中行断流术256例，门体分流术167例，选择性分流术62例，断流术加分流术11例，肝移植9例，肝癌合并门脉高压症手术3例。结果门体分流术中吻合口径在8～12mm组术前自由门静脉压力（free portal pressure，FPP）显著高于其它组（P〈0．01），术后FPP下降也较其它组明显（P〈0．01）。断流术、门体分流术、选择性分流术、断流术加分流术、肝癌合并门脉高压手术后再出血率分别为21．09％（54／256）、13．77（23／167）、11．29（7／62）、36．36％（4／11）和100％（3／3），肝性脑病的发生率分别为3．91％（10／256）、9．58％（16／167）、4．84％（3／62）、9．09％（1／11）、100％（3／3），手术死亡率分别为5．49％（15／256）、4．22％（7／167）、4．84％（3／62）、9．09％（1／11）、66．67％（2／3）。肝移植手术死亡率为22．22％（2／9）。结论门静脉高压症外科治疗的不同术式各有优缺点，应根据病人的具体情况审慎选择。断流术是门静脉高压外科治疗的主要方式。门体分流术吻合口径限制在6～8mm为宜，肠腔侧侧分流术为常用术式。选择性分流术是一种较理想的术式，但技术难度较大。断流术加分流术对病人打击较大，应视病人肝功能状况审慎选择。肝移植术的远期疗效较好，但是在我国还没有被当作首选术式。肝癌合并门脉高压时，应该综合评估肝功能状况，审慎选择只进行肝癌切除术或者同时手术治疗门静脉高压症。合并腹水的门脉高压症患者在肝功能和一般情况允许的前提下，可以采用小口径（6～8mm）的门体分流术治疗。肝硬化门静脉高压症上消化道大出血经积极内科保守治疗无效者，应积极采用对病人打击较小的断流术进行治疗，如果病人肝功能和全身情况允许，也可审慎地选择分流术。

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ 表达以及对HSC生物学特性的影响。 方法 设立空白对照组、3μmol L罗格列酮组、10μmol L罗格列酮组;分别 用RT PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α 平滑肌 肌动蛋白(α SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞 仪分析细胞凋亡。 结果 10μmol L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01), PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t ≥5.542,P<0.01),其α SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组 (χ2=16.682,P<0.01)。 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡。

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的 建立并鉴定肝星状细胞 (HSC)细胞系。 方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC ;通过体外长期传代培养后建立 1株细胞系 ,应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。 结果 HSC细胞系已传了 78代 ,保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为 36 5h ;细胞的染色体众数 4 2条 ,为正常大鼠体细胞的染色体表型 ;双层软琼脂培养未见细胞克隆形成 ;免疫细胞化学检测表明 ,细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α SMA、iNOS、ICAM 1、TGF α ;RT PCR检测表明 ,该细胞系表达TGF β、ICAM 1;聚硅酮膜培养法显示 ,HSC细胞系能在ET 1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准 ,是 1株新建立的大鼠肝星状细胞系 ,命名为rHSC 99,可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。

计算机行肝脏CT断层三维重建及测量在肝癌中的应用研究

目的 探讨利用个人电脑及自行开发的软件对肝脏CT断层图像进行三维重建和测量及其在肝癌患者的临床意义。方法 术前对 46例行原位肝移植的肝硬变门静脉高压症患者和 5例肝癌患者的肝脏CT断层图像进行三维重建和测量 ,术后与肝硬变门静脉高压症患者切除的受体实测肝体积进行对比分析。结果 对 46例肝硬变门静脉高压症患者用本方法测得平均肝脏体积为 ( 983 .3 3± 2 0 6.11)cm3 ,同组实测平均肝脏体积为 ( 90 4.93± 2 0 9.5 6)cm3 ,二者之间呈高度正相关 (r =0 .969) ,本方法测值的平均误差为 8.66%。本方法三维重建肝形状与切除同例肝标本实际形状基本相似。可任意角度旋转来观察三维重建肝。可以在重建肝脏同时重建肿物。当肿物被周围组织遮挡显示不清时 ,可用半透明显示法对肝脏进行半透明处理。同时 ,可测定肿物的体积及预计肝切除后的预留肝量。结论 运用该方法在个人电脑上实现肝脏连续CT断层图像三维重建和体积测量准确性较高。对术前明确肝肿瘤范围 ,正确选择手术术式 ,预测手术进程以及对肝病患者的随访和疗效判定 ,活体肝移植供受体匹配选择都有一定帮助。

人肝癌细胞系HLE细胞表面抗原多肽的纳升电喷雾串联质谱从头测序分析

肿瘤细胞表面的抗原多肽能够被细胞毒T淋巴细胞特异性识别而引起免疫应答,因此有可能用于研制基于多肽的抗肿瘤疫苗.用弱酸将人肝癌细胞系HLE 细胞表面抗原多肽和人正常肝细胞表面多肽洗脱后,经RP-HPLC分离,选择HLE细胞表面特异性多肽进行纳升电喷雾串联质谱（nanoESI-MS/MS）测序,共测定5个色谱峰中的20个多肽序列,分子量分布范围为1000～2000 Da.借助MasSeq软件分析出其中12个多肽的序列.经数据库查寻,其中的3个肽段分别来自钙调节蛋白、核蛋白S19和伴侣蛋白10.这些多肽的生物学功能及与肿瘤的关系值得深入研究.该研究表明nanoESI-MS/MS是测定微量混合多肽序列的最有效方法.

肝硬变门静脉高压症患者肝体积测量研究及其临床意义

目的 探讨用个人电脑及自行开发的软件对肝脏CT断层图像进行三维重建和测量及其在肝硬变门静脉高压症患者中的临床意义。方法 术前对 46例行原位肝移植的肝硬变门静脉高压症患者和 3 0例正常对照者的肝脏CT断层图像进行三维重建和测量 ,术后与肝硬变门静脉高压症患者切除的受体实测肝体积进行对比分析。结果 46例肝硬变门静脉高压症患者用本方法测得平均肝脏体积为 (983 .3 3± 2 0 6.11)cm3 ,同组实测平均肝脏体积为 (90 4.93±2 0 9.5 6)cm3 ,二者之间呈高度正相关 (r =0 .969,P<0 .0 1) ,本方法测定值的平均误差为 8.66%。正常对照组用本方法测得平均肝脏体积为 (12 87.0 0± 96.18)cm3 ,与其身高、体重和体表面积之间均存在着正相关关系 (r值分别为 0 .845、0 .83 3和 0 .93 2 ,P<0 .0 1)。肝硬变门静脉高压症患者肝脏体积与Child Pugh分级有关 ,C级患者肝脏体积明显小于B级者 ;也与血浆白蛋白水平呈显著正相关 (r =0 .496,P<0 .0 1) ,与总胆红素水平 (r =-0 .493 ,P<0 .0 1)及凝血酶原时间 (r =-0 .5 17,P<0 .0 1)呈显著负相关 ,与ALT值 (r =0 .2 0 6,P>0 .0 5 )、门静脉压力 (r =-0 .0 93 ,P =0 .5 3 9)及门体自然分流指数 (r =0 .0 44 ,P =0 .769)无明显相关关系。结论 运用该方法对肝脏CT?

合并门静脉血栓的肝病患者的肝移植方法及疗效

目的:探讨合并门静脉血栓(portal vein thrombosis,PVT)的终末期肝病患者的肝移植处理方法及疗效。方法:回顾性分析北京大学人民医院自2004年7月至2008年2月完成的308例原位肝移植手术资料,总结PVT患者肝移植术中的处理方法和疗效。结果:全部308例患者中共有46例存在PVT,其中1级血栓11例,2级血栓14例,3级血栓18例,4级血栓3例。1级和2级PVT患者的门静脉未做特殊处理。16例3级PVT患者行取栓、血栓切除或内膜剥脱术,2例行静脉搭桥术。1例4级PVT患者应用曲张静脉重建门静脉,2例4级PVT患者行门静脉-下腔静脉半转位术。262例非PVT患者的围手术期存活率、1年存活率分别为91.6%(240/262)和80.5%(211/262),PVT患者的围手术期存活率、1年存活率分别为86.9%(40/46)和76.1%(35/46),两组之间的差异没有统计学意义。PVT患者肝移植术后血栓复发率为4.3%(2/46)。结论:绝大多数PVT患者通过适当的处理可以成功实施肝移植手术,但门静脉系统弥漫性血栓形成的患者实施肝移植的疗效欠佳。

肝硬化大鼠门静脉高压症不同手术方式对其肝脏的影响

目的:评价门奇断流术(PAD)、肠腔分流术(MCS)、远端脾腔分流术(DSCS)对门体分流率(PSS)、肝脏功能、线粒体功能和抗氧化能力的影响,为合理选择手术方式提供理论依据. 方法:用CCl4/乙醇诱导大鼠肝硬化门脉高压症模型,观察了不同术式(MCS、DSCS、PAD)的死亡率及手术前后肝功能、门体分流率(PSS)、肝细胞线粒体功能和超微结构及肝组织SOD活性、巯基水平、LPO含量的变化,并探讨了线粒体功能与抗氧化能力的内在关系. 结果:肝硬化门脉高压时,PSS远高于正常,肝细胞线粒体功能、抗氧化能力均下降;肠腔分流(MCS)组术后肝细胞线粒体功能、抗氧化能力进一步下降且恢复慢;选择性远端脾腔分流术(DSCS)组和门奇断流术(PAD)组的上述指际变化小且恢复较快,其中DSCS组恢复更快且死亡率低. 结论:选择性分流术(DSCS)

NY-ESO-1抗原与肿瘤免疫治疗进展

NY-ESO-1抗原是肿瘤-睾丸抗原家族中的重要成员,在多种类型的肿瘤中广泛表达,并且是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应。因此,NY-ESO-1被认为是最好的肿瘤候选疫苗,在肿瘤免疫治疗中最具发展潜力。本文主要介绍了近年来有关NY-ESO-1抗原以及相关疫苗的研究进展。

再次肝移植10例临床分析

目的总结再次肝移植的临床经验。方法回顾性分析我中心自2003年5月至2006年12月间实施的10例再次肝移植患者的临床资料并进行随访,对再次移植的指征、手术时机、手术方式及预后进行讨论。结果在连续实施的315例同种异体原位肝移植中共有10例接受了再次移植,再次移植率为3.17%。再次移植指征分别为胆道并发症4例(40%),原发病复发4例(40%),其中包括肝癌复发2例(20%),乙肝复发1例(10%),肝硬化复发1例(10%),移植肝原发性无功能1例(10%),肝动脉血栓形成1例(10%)。10例患者中有3例死亡,其中2例死于全身严重的感染伴多器官功能衰竭,1例死于肝癌复发转移。其余7例患者均痊愈出院,随访至今已存活10～28月,肝功能及一般状况良好。结论合理选择再次移植的指征,把握合适的手术时机,建立完善的预后评估模型是提高再次肝移植患者存活率的关键。

不同手术方式对门体分流率和肝功能影响的实验研究

目的 通过动物实验检测肠腔侧侧分流术 (MCS)、远端脾腔分流术 (DSCS)及门奇断流术 (PAD)对门体分流率和肝功能的影响 ,为合理选择手术方式提供理论依据。方法 采用CCl4/乙醇诱导的肝硬变门脉高压大鼠模型行肠腔侧侧分流术 (MCS)、远端脾腔分流术 (DSCS)及门奇断流术(PAD)。观察术前及术后 1、2、3周时的自由门脉压力 (FPP)、门体分流率 (PSS)和肝脏功能的变化。结果 MCS组术后FPP明显下降 ,PSS显著升高 ,肝脏功能进一步恶化 ,至术后 3周仍未恢复 ;DSCS组和PAD组术后FPP及PSS变化较小 ;DSCS组肝脏功能无明显下降 ;PAD组术后 1周肝功能明显下降 ,2周后逐渐恢复到术前状态。结论 远端脾腔分流 (同时施行彻底的脾胰断流 )术有助于维持向肝血流 。

四氯化碳/乙醇诱导129/Sv小鼠产生原发性肝细胞癌模型的建立

目的 建立稳定可靠的肝癌动物模型 ,为深入进行肝细胞癌的实验研究打下良好的基础。方法 取 90只 12 9/Sv小鼠 ,采用四氯化碳 /乙醇诱导 2 0周 ,观察其肝癌发生的情况。另取 10只作为正常对照组。结果 90只 12 9/Sv小鼠共死亡 4 7只 ,最后剩余的 4 3只小鼠中有 16只发生肝癌。而常对照组 10只小鼠 ,其肝脏均未发现明显异常。诱导组小鼠的肝细胞癌类型以中、高分化为主。结论 采用四氯化碳 /乙醇诱发的 12 9/Sv小鼠肝癌 ,模型稳定 ,癌变率高 ,经历了肝炎、肝硬化阶段 ,与人肝癌的发生发展过程非常相似。因此 ,是较理想的研究肝癌的实验动物模型。

术中超声检查在肝脏肿瘤手术中应用的临床意义

目的探讨术中超声((intraoperative ultrasound,IOUS)检查在肝脏肿瘤手术的临床意义。方法对53例(89个结节)肝脏肿瘤患者的术中超声检查结果与术前影像学检查(包括体外经皮超声(ultrasonography,US)、核磁共振成像(magnetic res-onance imaging,MRI)和计算机断层扫描(computed tomography,CT))进行对比分析,以评价术中超声与术前影像学检查的差异;将术中超声检查与术中外科医生评定(包括肉眼观察、双手触诊)进行对比分析,以评价术中超声在外科手术过程中的作用。结果在肝脏肿瘤的探查中I,OUS、US、CT、MRI的敏感性分别为100%(89/89个结节)、81%(72/89个结节)、82%(49/60个结节)和87%(40/46个结节),特异性分别为91%(81/89个结节)、89%(64/72个结节)、90%(44/49个结节)和93%(37/40个结节)。在外科手术过程中,外科医生经望诊、触诊不能发现病灶,而由术中超声检查发现并定位的患者有11例,15个结节(17%,15/89个结节)。术前所有影像学检查未能提示结节,而由术中超声检查发现的患者有8例,11个结节。结论IOUS是检查发现肝脏肿瘤最敏感的方法,在手术过程中,可帮助外科医生发现触及不到的已知结节和发现新结节。

应用广谱抗体CK3-6H5检测细胞角蛋白在人类上皮组织来源的肿瘤细胞系中的表达

目的应用广谱抗细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)抗体CK3-6H5检测上皮组织来源的肿瘤细胞系中CK的表达,并研究应用此抗体检测血液循环中此类肿瘤细胞的敏感性。方法应用CK3-6H5标记QGY-7703等26种人类上皮组织来源的肿瘤细胞系、人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji、人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat以及健康志愿者外周血单个核细胞,通过免疫荧光显色和免疫细胞化学技术检测其中CK的表达情况;以表达CK的人肝癌细胞系QGY-7703作为靶细胞,以不同的比例分别掺入到健康志愿者PBMC中,以免疫磁珠去除CD45+的白细胞,对肿瘤细胞进行富集,流式细胞仪检测其中CK+CD45-肿瘤细胞数目,分析用CK3-6H5检测外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的敏感性。结果所有上皮组织来源肿瘤细胞系均表达CK,而健康志愿者和淋巴瘤细胞系Raji、T淋巴细胞白血病细胞株中未检测到CK表达。当向2×108个PBMC中掺入20个QGY-7703细胞时,经免疫磁珠富集后,行FACS分析,仍能检测到12个肿瘤细胞。结论CK3-6H5抗体复合物可以识别常见的上皮来源的肿瘤,应用CK3-6H5抗体标记肿瘤细胞,采用免疫磁珠富集技术以及流式细胞技术,可以用于有效检测外周血中上皮来源的肿瘤细胞。

临床活体肝移植4例报告

目的：总结原位活体肝移植的临床资料，探讨活体肝移植的关键手术技术。方法：对北京大学人民医院2003年2月至2006年11月实施的4例原位活体肝移植的临床资料进行回顾性分析。结幂：4例均为成人活体供肝，其中右半肝3例（不包含肝中静脉的2例，包含肝中静脉的1例），扩大左外叶（不包含肝中静脉）1例，移植物重量／受体体重0．85％～1．44％。其中3例供、受体行肝右静脉端端吻合，1例供肝肝左静脉与受体成形后的肝左、肝中静脉吻合。2例供肝肝右动脉与受体肝固有动脉端端吻合，1例供肝肝右动脉分支经受体桡动脉搭桥后与受体肝固有动脉端端吻合，1例供肝肝左动脉与受体肝固有动脉端端吻合。4例供肝胆管成形后与受体的肝总管端端吻合，其中2例留置“T”型管引流。4名供者术后均顺利康复，未出现严重并发症；4例受者手术顺利，术后无血管并发症，1例未留置“T”管的儿童受者胆管吻合口轻度狭窄。受体现已分别健康存活58个月、32个月、20个月及14个月。结论：原位活体肝移植手术过程复杂，技术要求高，选择好合适的供体、灵活掌握关键的手术技术可以使活体肝移植患者获得良好的预后。

肝体积的计算机测量研究及其临床意义

目的 :探讨用个人电脑及自行开发的软件对肝脏CT断层图像进行三维重建、测量及其临床意义。方法 :术前对 4 6例行原位肝移植的肝硬变门静脉高压症患者和 30例正常对照者的肝脏CT断层图像进行三维重建和测量 ,术后与肝硬变门静脉高压症患者切除的病肝实测肝体积进行对比分析。结果 :对 4 6例肝硬门静脉高压症患者用本方法测得平均肝脏体积为 (983.33± 2 0 6 .11)cm3,同组实测平均肝脏体积为 (90 4 .93± 2 0 9.5 6 )cm3,二者之间呈高度正相关 (γ =0 .96 9,P <0 .0 1) ,本方法测值的平均误差为 8.6 6 %。本法测得正常对照组平均肝脏体积为(12 87.0 0± 96 .18)cm3,与身高、体重、体表面积之间均存在着正相关关系。γ分别为 0 .84 5、0 .933、0 .932 ,均有显著性 (P <0 .0 1)。由体表面积推导正常人群标准肝脏体积公式为 :LV(cm3) =5 70 .1×体表面积 (m2 ) +16 8.8。结论 :运用该方法对肝脏CT断层图像进行三维重建和测量准确性较高。结合本方法测量和运用标准肝脏体积公式计算后所获得的资料 ,能客观地定量评价病肝体积的变化。

肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因mRNA在肝细胞癌中的表达及HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的:检测肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.为HCC的免疫治疗寻找新的靶位.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCC患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(肝硬化和正常肝组织)中的SPANX-C基因mRNA进行检测,随机选取RT-PCR阳性扩增产物进行序列测定;用超基序法和量化基序法联合预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.结果:在所检测的115例HCC组织中有70例(60.9%)表达SPANX-C基因mRNA,癌旁组织和20例对照肝组织均不表达.SPANX-C基因的表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平等临床指标无相关性(P>0.05).用基序预测法筛选出5个HLA-A2限制性CTL表位(9肽),其中SPANX-C51-59(LVVRYRRNV)与HLA-A2分子具有较高结合力.结论:SPANX-C基因mRNA在HCC组织中呈高频率特异性表达,并存在HLA-A2限制性CTL表位,有望用于HCC的免疫治疗.