人趋化因子受体CCR4的克隆与表达

目的 :建立pcDI CCR4稳定转染并具有CCR4功能性表达的细胞株 ,为深入研究CCR4配体提供基础。方法 :利用RT PCR技术进行人CCR4的cDNA克隆化。通过基因转染技术获得稳定转染细胞株 ,利用趋化实验、钙流实验证实稳定转染细胞株能有效表达CCR4并具有生物功能。结果 :成功地将CCR4cDNA克隆于真核表达质粒pcDI,转染HEK2 93细胞获得稳定表达CCR4的HEK2 93细胞 ,可被RANTES诱导产生趋化反应和钙内流反应。结论 :建立的pcDI

血管内皮细胞生长因子促进成年小鼠胸腺细胞的增殖与分化

目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF12 1)在免疫系统的表达及其对小鼠胸腺细胞的作用 ,为了解VEGF在免疫系统中的功能提供实验依据。方法 构建pCDI VEGF真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获上清检测其对小鼠胸腺细胞的促增殖效应和CD4、CD8分子表达 ,用抗VEGF单克隆抗体及不同信号转导抑制剂进行阻断实验。通过RT PCR方法检测人VEGFmRNA在胸腺、脾脏等免疫器官的表达。结果 实验证明VEGFmRNA可以在多种免疫组织中表达。VEGF12 1真核表达蛋白可明显促进小鼠胸腺细胞增殖和分化 ,此作用可被VEGF的单克隆抗体所封闭 ;不同的信号转导抑制剂具有不同的效应。结论 VEGF参与了免疫系统的功能 ,对小鼠胸腺细胞的增殖分化有促进作用 ,可能是内源性的免疫系统的调节因子。

人类新细胞因子(CKLF-1)在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的 进一步研究人类新细胞因子———趋化素样因子 1(CKLF 1)蛋白的结构与生物学活性。方法 构建了融合蛋白的原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中进行诱导表达 ,获得了原核表达的融合蛋白 ,经凝血酶切割获非融合重组蛋白 ,并进行体外活性鉴定。结果 CKLF 1原核表达蛋白获得了高表达 ,纯化后获得约 90 %纯度以上蛋白 ,发现其可以与肝素结合 ,生物学活性检测表明其对人中性粒细胞、外周血单个核细胞和大鼠的巨噬细胞具有明显的趋化作用。结论 CKLF