52000Ro/SSA抗原结构分析及抗原片段克隆

目的预测相对分子量为52000的Ro/SSA自身抗原的可能表位,并选择性克隆含亮氨酸拉链氨基酸序列的抗原片段。方法用蛋白结构分析软件对52000Ro/SSA抗原结构进行分析,从人心脏来源的cDNA中通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到编码第119至264位氨基酸片段的cDNA,插入表达载体,转染大肠杆菌并表达融合蛋白。结果计算机分析显示该抗原中有α螺旋结构,整个分子抗原性强,柔韧性一般,表面可及性差。PCR产物长440bp,重组融合蛋白相对分子质量为28000,测序鉴定保证了研究的正确性。结论52000Ro/SSA多肽抗原性好,所获得的抗原片段为今后研究亮氨酸拉链氨基酸序列在该抗原表位形成中的作用奠定了基础。

Ro52抗原119-264位氨基酸片段克隆及其抗原性研究

目的研究Ro52抗原的第119至第264位氨基酸片段(含亮氨酸拉链基序)在抗原表位构成中的作用。方法用PCR法从人类心脏cDNA第一链中扩增编码第119至第264位氨基酸的基因片段,定向插入表达质粒pMTY4,转导入宿主菌pop2136诱导表达融合蛋白,重组融合Ro52抗原片段纯化后用免疫印迹法进行抗原性检测。结果重组Ro52抗原的第119至第264位氨基酸片段的融合蛋白相对分子质量为28000,该融合蛋白在宿主菌中高水平表达,形成包涵体。在42份抗Ro52抗体阳性血清中,26份(61.90%)可与重组融合蛋白反应。结论所克隆的含亮氨酸拉链基序的第119至第264位氨基酸片段是Ro52抗原的重要抗原表位区段。