Hansson染色法检测小鼠附睾上皮细胞碳酸酐酶的活性

碳酸酐酶（Carbonic Anhydrase，CA）是一种含锌的金属酶，可参与体内CO2和离子转运以及调节酸碱平衡。本文以改良的Hansson法检测CA在雄性小鼠附睾管上皮细胞的分布，为深入研究CA表达及功能提供可行的形态学技术方法。迅速分离ICR雄性小鼠附睾，制成厚度为5μm的冰冻切片。

雌激素对去卵巢大鼠下颌下腺血管活性肠肽VIP及功能的影响

目的:探讨雌激素对下颌下腺中VIP及其受体表达的影响,并观察功能指标α-唾液淀粉酶的变化。方法:雌性SD大鼠设置假手术组(SHAM),去卵巢组(OVX),去卵巢后雌激素干预组(OVX+E),实施假手术和卵巢切除术,构建围绝经期动物模型。手术后两周,SHAM组和OVX组腹腔注射芝麻油,OVX+E组腹腔注射17β-雌二醇,持续4周。应用放射免疫法检测大鼠血清雌二醇含量,免疫组化和免疫印迹法观察下颌下腺VIP和VPAC1的表达,活性检测试剂盒微量法测定下颌下腺α-唾液淀粉酶活性。结果:OVX组血清17β-雌二醇含量较SHAM组显著降低(P<0.05),OVX+E组血清17β-雌二醇含量与SHAM组无明显差异(P>0.05),证实围绝经期动物模型构建成功。免疫组化和免疫印迹结果显示,OVX组VIP和VPAC1表达较SHAM组明显减少(P<0.05),OVX+E组表达恢复至SHAM组水平(P>0.05)。微量法活性检测显示OVX组α-唾液淀粉酶活性较SHAM组显著降低(P<0.05),OVX+E组活性升高至SHAM组水平(P>0.05)。结论:雌激素水平与下颌下腺中VIP、VPAC1的表达呈正相关,可能通过对VIP及VPAC1的调控影响功能指标α-唾液淀粉酶活性。

下丘脑视前区TRPM2热敏神经元引发围绝经期潮热的研究

女性围绝经期低雌激素状态下,下丘脑视前区(POA)体温调节中枢产热和散热失衡引发潮热。体温调节中枢主要是依靠热敏神经元来调节体温的,并且其中的谷氨酸能和GABA能神经元分别参与散热和产热过程,最新的研究提出瞬时受体电位M2型(TRPM2)可以作为热敏神经元的特异性标记物和关键功能蛋白。但低雌激素状态下POA区TRPM2热敏神经元异常及其中谷氨酸能和GABA能神经元的比例变化是否为引发围绝经期潮热的关键因素尚未阐明。本实验采用40只成年雌性TRPM2-Cre小鼠,随机分为假手术(SHAM)组和去卵巢(OVX)组。随后使用化学遗传学方法特异性激活或抑制POA区TRPM2热敏神经元,同时红外热像仪记录小鼠体表温度,采用RNA Scope技术检测TRPM2热敏神经元中谷氨酸能和GABA能神经元所占的比例。

小鼠早期胚胎内细胞凋亡的一个量化模型

凋亡是早期胚胎(八细胞阶段后,特别是桑椹胚至囊胚期)进入非线性发育期的最重要诱因和调节因素.本文利用双光子激光扫描显微术,获得小鼠植入前胚胎的三维荧光图像;然后建立量化模型,经过一定图像处理,统计了凋亡小体在胚胎内的三维空间分布,并为探索凋亡的动力学机制做出一些尝试.研究发现,胚胎内细胞凋亡现象绝大部分(70%)发生在滋养外胚层,且胚胎质心与几何中心的偏离在32细胞期前后出现台阶式跃迁,这和囊胚腔的出现导致胚胎细胞分布对称性破缺的理论预测一致.

局部解剖学混合式教学方法初探

局部解剖学是在系统解剖学的基础上,研究人体局部的层次结构、器官的位置、毗邻关系及其临床应用的一门学科。作为一门重要的、实践性较强的基础医学课程,其实验教学是基础理论和临床实践之间的重要桥梁,对于学生加深对理论知识的理解和提高实践技能具有重要意义[1,2]。

青光眼小鼠Thy1-CFP-DBA／2J表达melanopsin蛋白的视网膜节细胞的丢失及小鼠行为学分析

为了研究表达melanopsin蛋白的视网膜神经节细胞在青光眼小鼠的抑郁性行为中所起的作用,本文使用不同年龄的青光眼小鼠Thy1-CFP-DBA/2J(CFP-D2)2,5,8,11,14个月龄各5只,对照组为C57BL/6小鼠2,8,14个月龄各5只.对视网膜平铺片进行免疫组织化学染色、细胞计数及形态学分析;旷场实验分析小鼠的行为学特征.实验结果显示,CFP-D2小鼠其眼内压随着年龄的增加逐渐升高,视网膜也发生了相应改变,包括表达CFP细胞数量的减少(细胞/mm2;2mo(月龄):1309±26,14mo:878±30,P<0.01),视网膜神经节细胞的减少(2mo:48±3,14mo:19±4,P<0.001),表达Brn-3b的视网膜神经节细胞数量的减少(2mo:1283±80,14mo:950±31,P<0.001),以及视网膜神经节细胞中Brn-3b阳性细胞所占比例的下降(5mo:50.17%±5.5%,14mo:12.61%±3.8%,P<0.001),形态学定量分析表明视网膜神经节细胞的树突野面积也逐渐减小(mm2;2mo:0.077±0.015,14mo:0.065±0.015,P<0.05).旷场实验指标分析(包括总的运动距离,进入中央区域的次数,在中央的时间占总的时间的比例)表明不同月龄的CFP-D2小鼠始终处于一种高活动度的状态.综合上述实验结果,本文证实,CFP-D2小鼠青光眼所致的高活动度状态与视网膜神经节细胞相关,尤其是与Brn-3b阳性的视网膜神经节细胞的功能异常有关.