联用多步骤虚拟筛选方法发现具有新母核的GABAA受体正性变构调节剂

GABAA受体主要介导哺乳动物中枢神经系统的抑制性信号传递,是镇静催眠药的关键靶点。在寻找具有新母核的镇静催眠药的过程中,计算机辅助药物设计(CADD)方法显示出巨大的优势。在这项研究中,首先,我们通过机器学习模型、分子对接模型和分子力学广义玻恩比表面积(MMGBSA)方法筛选了来自于商业数据库中的41112种化合物。经过筛选,我们得到了16个化合物,然后我们通过全细胞膜片钳电生理学实验验证了4个结构新颖的化合物确实为有效的GABAA受体正性变构调节剂。其中,化合物GPR120在细胞水平和动物水平都得到了实验验证。在重组表达α1β2γ2型受体的皮层神经元中,在10和50µmol∙L^(−1)浓度下,GPR120可将GABA EC3-10电流分别增强71.5%和163.8%。通过全分解贡献分析和点突变实验,我们发现GPR120与GABAA受体结合的关键位点是H102,与阳性药物地西泮相似。为了进一步验证GPR120在动物水平上的功能,我们进行了运动活动测试和翻正反射消失(LORR)实验。GPR120对小鼠的运动活动有抑制作用,6 h后可恢复,说明GPR120是一种中度镇静剂。在戊巴比妥钠(PB)诱导的翻正反射消失实验中,与生理盐水组相比,GPR120(20 mg∙kg^(−1))可显著缩短开始LORR的时间并延长LORR的持续时间。综上所述,通过联用多种虚拟筛选方法,我们发现了GPR120是一种具有新型母核的中度强度镇静剂。

去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨

背景与目的:去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是斑蝥素(cantharidin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小。本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制。方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变。Westernblot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、CyclinB1、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:2.5、5、10、20、30和40μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.001)。Nd3作用24h、36h和48h的IC50分别为(25.1±2.3)!mol/L、(21.8±2.8)!mol/L和(20.4±3.3)!mol/L。细胞周期分析证实,10、20、30、40μmol/LNd3作用48h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%;同时30μmol/L的Nd3作用12、24、36、48h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞。此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40μmol/L的Nd3作用48h后细胞凋亡率高于对照组30%以上。Westernblot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、CyclinB1和Bcl-2的表达则相应减少。结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、CyclinB1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关。

补阳还五汤对中风大鼠脑组织中ROS生成的抑制作用(英文)

诱发脑中风的分子机理至今尚未清楚,临床研究表明经典验方补阳还五汤治疗脑中风作用显著,但其作用的分子机理也不清楚。运用低温电子顺磁共振(EPR)技术和自旋捕捉EPR技术实验研究了中风大鼠脑组织中ROS的生成情况;并首次直接测定了补阳还五汤对中风大鼠皮层及小脑的活性氧物质(ROS),包括一氧化氮生成的影响。同时还检测了补阳还五汤对体外化学模拟体系产生的超氧阴离子(O2-)和羟自由基(OH)的清除能力。结果表明,与对照组相比,中风大鼠皮层及小脑中的ROS生成明显增多(P<0.05),脑组织中的NO水平也明显升高(P<0.001);补阳还五汤可明显(P<0.05)抑制中风大鼠皮层及小脑中ROS的生成,显著降低NO水平(P<0.05,与中风不给药组比较);补阳还五汤对于体外化学模拟反应生成的02-和OH也有很强的清除能力。由此可认为ROS的生成是导致脑中风的重要分子机理之一,而抑制ROS的生成则可能是补阳还五汤抗脑中风作用的途径之一,同时也说明在中药现代化研究中EPR技术可作为一种有效的研究工具。

MTT法测定稀土离子对BEL-7402及K562细胞的毒性及增殖毒性

用MTT法测定稀土离子在不同浓度、不同培养液中,与BEL 7402和K562细胞作用不同时间,对细胞的毒性和增殖毒性。结果表明,在含10%小牛血清培养液中,仅个别稀土离子在较高浓度时对BEL 7402细胞增殖有较弱的抑制作用;对于K562细胞,稀土离子在低浓度时对细胞增殖即表现出较强的抑制作用(P<0.05)。当培养液不含小牛血清时,较低浓度的稀土离子即可抑制BEL 7402细胞的增殖(P<0 05)。

中国南海软珊瑚Dendronephthya gigantea中的多羟基甾醇成分

从中国南海三亚海域采集的软珊瑚Dendronephthyagigantea中 ,分离得到 6个甾醇类成分 ,分别为胆甾醇 (Ⅰ ) ,胆甾 5 烯 3β ,7β二醇 (Ⅱ ) ,胆甾 5 ,2 2 (E) 二烯 3β ,7α 二醇 (Ⅲ ) ,2 4 亚甲基 胆甾 5 烯 3β ,7α 二醇 (Ⅳ ) ,2 4 甲基 胆甾 5 ,2 2 (E) 二烯 3β ,7α 二醇 (Ⅴ )和胆甾 5 烯 3β ,7α二醇 (Ⅵ )。应用1H ,13CNMR ,EIMS等谱学方法确定了它们的结构。

新型双核铂类配合物的合成及其抗肿瘤活性

合成 3种双核铂类配合物 [{Pt(H2 O) 2 I}μ— OOC— (CH2 — ) n COO— {Pt(H2 O) 2 I}](1～ 3 ) (n=0 ,1,2 ) .用元素分析、摩尔电导、差热热重分析、红外光谱、紫外光谱和核磁共振氢谱等方法对其进行了表征 .体外抗肿瘤活性表明 ,配合物 1和 3对多种人的肿瘤细胞有较高的活性 ,配合物

中国南海圆裂短足软珊瑚的甾体成分研究

从南海圆裂短足软珊瑚（Cladiella krempfi）中分离出12个甾体化合物，分别鉴定为：1，2-[1’，3’，4’]oxodithiin-pregna-20-en-3-one（1）；19-nor-4-methylpregna-1，3，5（10），20-tetraen-1-ol（2）；pregna-1-en-3-one-20-01（3）；pregna-1，7-dien-20-ol-3-one（4）；pregna-5，20-dien-3-O-a—fucopyranoside（5）；pregna-20-en-3-O-a—fucopyranoiside（6）；孕甾-1，20-二烯-3-酮（7）；孕甾-1，4，20-三烯-3-酮（8）；24-甲基-5d-胆甾-7，22-二烯-3β，5，6β三醇（9）；26-甲基-24-亚甲基胆甾-5烯-3β-醇（10）；胆甾-5-烯-3β醇（11）；β-谷甾醇（12）。化合物1～6系首次从Cladiella属软珊瑚中获得的孕甾类化合物。对所获得化合物的生源途径进行了初步讨论。

束生刚毛藻Cladophora fascicularis中三萜化合物的活性研究

根据生物活性筛选为导向,对采自青岛沿海的绿藻束生刚毛藻（Cladophora fascicularis）的化学成分进行研究,利用薄层制备色谱方法从中分离出一系列环阿尔廷类三萜化合物,分别为环阿尔廷-24-过氧羟基-25烯-3β-醇（1）、环阿尔廷-25-过氧羟基-23-烯-3β-醇（2）、环阿尔廷-23,25-二烯-3β-醇（3）、环阿尔廷-25烯-3β,24-二醇（4）、环阿尔廷-23烯-3β,25-二醇（5）和环阿尔廷-24-烯-3β-醇（6）.对该类化合物首次进行体外对几种肿瘤细胞靶蛋白酶筛选,化合物1~化合物6在浓度为1μg·m L-1时对肿瘤细胞部分靶蛋白酶（ARK5、EGFR、B-RAFVE、EPHB4、CK2alpha1、ERBB2、FAK、CDK2/Cyc A、IGF1R、SRC、CDK4/Cyc D1、VEGFR2、VEGFR3、Aurora A、INSR、Aurora B、MET、PDGFRbeta、FLT3、COT、SAK、PLK1 like、TIE2）具有较强的抑制活性.该研究为束生刚毛藻（C.fascicularis）的进一步开发利用及药理活性研究提供理论依据.

细胞色素P450 1A1的研究进展

细胞色素P450酶系参与生物体内许多内源性及外源性物质的生物转化。其中细胞色素 P4501A1(CYP1A1)广泛存在于多种肝外组织,参与了多种前致癌物和致突变物的活化代谢过程,并与 多种肿瘤发生相关。本文综述了CYP1A1在体内的分布、诱导和抑制,遗传多态性及癌症易感性,简要 介绍了该领域研究的进展情况。

组织型纤溶酶原激活剂突变体基因转染细胞株的建立

以脂质体介导法将含有t PA突变基因的真核表达载体pCSRA及pCSRK分别转染CHO dhfr ,经G4 1 8及DMEM双重选择 ,获得两者的稳定表达细胞株。结果表明 ,表达产物具有良好溶纤活性 ;Western印迹实验证明 ,产物具有特异抗原性 ;经多次传代 ,细胞株具有良好的稳定性。比较了无血清培养基CHO S SFMⅡ与常规培养基DMEM培养条件下pCSRK细胞株产物的表达量 ,前者约为后者的 2倍 ,表明无血清培养基SFM有可能用于药用性蛋白的生产。实验为t

稳定表达细胞色素P4501A1人肝癌细胞系的建立

目的:建立稳定表达人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌细胞系(Bel-7402)。方法:通过将人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的表达质粒转染到人肝癌细胞系(Bel-7402),经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成系,WesternBlotting检测蛋白的表达。细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯并蒽(DMBA)对Bel-7402/1A1细胞的增殖抑制作用。双核微核实验对Bel-7402/1A1细胞进行了遗传毒理的短期实验。结果:转染后筛选得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达。细胞暴露于DMBA时,Bel-7402/1A1与Bel-7402细胞相比,细胞增殖明显抑制。双核微核试验表明Bel-7402/1A1细胞的微核率随DMBA浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化。连续传代后仍有CYP1A1标志酶EROD的较高表达,该酶活性能被CYP1A1抑制剂α-萘黄酮抑制。结论:建立了一个新的稳定表达CYP1A1的1个肝癌细胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性。该细胞系可用来筛选能被CYP1A1代谢的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用来研究CYP1A1的催化性质及被CYP1A1代谢的化合物的毒性机理。

8-氯腺苷对HL-60细胞中蛋白酶体活性的抑制作用

背景与目的:蛋白酶体是真核细胞中具有多相催化活性的蛋白酶复合体,国外报道,蛋白酶体可作为新靶点来筛选抗肿瘤药物。8-氯腺苷(8-chloroadenosine,8-CA)由本室合成,研究已证实8-CA对肉瘤细胞株S180、肝癌细胞株H22及人胃癌异种移植瘤生长有抑制作用。但8-CA抑制肿瘤生长与蛋白酶体的关系还不清楚。本研究拟探讨8-CA对人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60中20S蛋白酶体的三种酶活性(包括糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性)的影响。方法:不同浓度的8-CA作用于HL-60细胞24、48、72h后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性,并采用免疫沉淀法测定纯化蛋白酶体的糜蛋白酶样活性,酶活性均以特异底物被蛋白酶体水解后产生的荧光吸光度表示。结果:0.1μmol/L8-CA作用于HL-60细胞48h,对总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性均有显著抑制作用,并且随着8-CA浓度的增加,其抑制作用逐渐增强。5μmol/L8-CA作用48h,对糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性抑制率分别为44.96%、54.52%和48.36%;作用72h,对三种酶活性的抑制率分别为67.53%、70.48%和64.08%。1μmol/L和5μmol/L8-CA作用48h,对HL-60中蛋白酶体的糜蛋白酶样活性抑制率分别为68.

毛细管区带电泳法测定4种抗HIV-1活性的化合物与牛血清白蛋白的结合常数

采用毛细管区带电泳紫外检测方法,在pH8 0、浓度50mmol/L的磷酸盐缓冲溶液及运行电压15kV的条件下,测定了4种新合成的具有抗HIV 1活性的化合物(IG3,iso C3,C3,MC3)与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的结合常数。在缓冲溶液中加入不同浓度的BSA,通过测定化合物迁移时间的变化,计算得到了上述4种化合物与BSA的结合常数分别为1 07×104,1 34×104,8 51×103和9 45×103L/mol。该方法简单、快捷,可用于研究结合比为1∶1的小分子与生物大分子的相互作用。

沙利度胺对油酸诱发小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:观察沙利度胺对油酸诱发小鼠急性肺损伤的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:将实验动物随机分为5组:正常组、模型组、地塞米松阳性对照组(Dex,10mg·kg^(-1),ig)、沙利度胺低、高剂量组(Tha,50,100mg·kg^(-1),ig)。利用油酸诱发小鼠急性肺损伤,光镜下观察肺组织病理学变化,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白质及前列腺素E_2(PGE_2)含量。结果:与模型组比较,Tha组均使渗出性病变及粒细胞浸润明显改善,低剂量组减少BALF中蛋白含量,抑制率为28.9%(P<0.01);高剂量组降低肺系数及BALF中蛋白与PGE_2含量,抑制率分别为27.8%,32.2%,21.9%(P<0.01);但两剂量组对小鼠体重、脾及胸腺重量指数均无影响。结论:沙利度胺对油酸诱发的小鼠急性肺损伤有一定保护作用;抑制PGE_2生成是其作用机制之一。

线虫脂肪模型研究

肥胖是一种脂肪酸积累增加的慢性疾病,采用研究模式生物的方法可以有助于探明肥胖产生的致病基因或致病相关因子,进而寻找可能的药物靶点.综述了国内外对线虫脂肪模型的研究进展,分析了线虫体内脂肪酸代谢途径的关键基因和核心通路.线虫脂肪代谢调节研究工作对人类肥胖症等代谢疾病的研究具有重要的提示作用,利用线虫脂肪模型研究降脂减肥药物具有广阔的应用前景.

细胞分裂周期相关蛋白7通过增强细胞增殖和干性促进人乳腺癌进程

目的探讨细胞分裂周期相关蛋白7(CDCA7)在人类乳腺癌中的相关功能及潜在的作用机制。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库分析检索出不同乳腺癌亚型差异表达基因,找到在基底型乳腺癌中高表达基因,在这些基因中找到CDCA7,通过临床患者的相关标本做免疫组织化学分析,确定其研究意义,进而建立CDCA7稳转细胞系,通过集落形成实验、成球实验及流式细胞术分析研究其在乳腺癌中的功能,最后通过Realtime PCR及Western blotting实验分析其在乳腺癌中的分子机制。结果数据库和免疫组织化学结果均显示,CDCA7在基底型乳腺癌细胞中表达高于其他亚型,高表达的CDCA7预示乳腺癌患者不良预后。在luminal细胞系中稳定地过表达CDCA7后,细胞表现出更强的增殖能力,进入分裂期的细胞明显增多,而凋亡细胞显著减少。同时流式细胞术分析表明,过表达CDCA7的细胞表现出了干细胞标记(CD133,乙醛脱氢酶)上调。Real-time PCR和Western blotting结果提示,CDCA7能够上调β-连环蛋白(β-catenin)表达,以此影响Wnt信号通路,并影响细胞增殖和干性。结论 CDCA7作为一个促瘤基因,能够通过依赖β-catenin以及Wnt信号通路的方式来诱导luminal乳腺癌细胞向basal-like亚型转化的能力。

染色质结构之美——染色质可及性

染色质可及性(chromatin accessibility)作为一种衡量染色质结合因子与染色质DNA结合能力高低的染色质属性,是评价染色质结构稳态的重要指标之一,在多种细胞核进程中扮演重要角色,包括基因转录调控以及DNA损伤修复等。该属性的异常调控与多种疾病的发生发展密切相关,包括肿瘤以及神经退行性疾病等。对于该属性探究已经成为生命科学与疾病领域的热点。伴随越来越多的新技术应运而生,例如染色质构象捕获技术、高通量测序技术以及两种技术的结合等。随着技术的进步,多种参与调控染色质可及性的因素被发现和总结,包括核小体占位、组蛋白修饰以及非编码RNA等。多项大规模的染色质组学数据绘制了多种疾病的染色质可及性图谱,为揭示疾病的发生发展与染色质可及性之间的关系提供了数据支持。同时,随着单细胞染色质可及性测序技术的发展,实现了对细胞类型染色质层面的划分,弥补了单纯依赖基因表达划分细胞类型的不足。本文将从染色质的组成与可及性、影响染色质可及性的因素、染色质可及性的检测方法,以及染色质可及性与癌症的关系等方面简要阐述染色质可及性的研究进展。

国家一类抗肿瘤新药有机硒化合物乙烷硒啉的药效药理作用(英文)

乙烷硒啉是由北京大学药学院设计合成并具有国际国内自主知识产权的有机硒化合物,其生物学靶点为硫氧还蛋白还原酶。作为国家一类抗肿瘤新药,乙烷硒啉正在进行临床Ⅰ期试验。本篇综述主要介绍目前已研究发表的乙烷硒啉的药效药理作用,包括体内体外的抗肿瘤作用及免疫调节功能。这些结果为乙烷硒啉进行更深入的抗癌临床研究提供了理论基础及治疗思路。

何首乌肝脏不良反应研究进展

何首乌Polygonum multiflorum是重要的补益药物,具有解毒消痈、润肠通便、补肝肾、益精血、乌须发的功效。然而,自20世纪末期开始,国内处不断出现由于服用何首乌或含何首乌制剂而导致肝损伤的不良反应报道,并引起了一些国家药监部门的高度关注。对何首乌肝损伤不良反应的临床报道、实验研究进行综述,重点关注引发肝损伤的制剂、损伤发生的特点、剂量范围等,初步探讨了这种不良反应与其基源、炮制方法、复方配伍等相关关系,为何首乌肝脏不良反应的深入研究提供了参考。

益母草肾脏不良反应研究进展

益母草Leonurus heterophyllus是传统的妇科圣药,具有活血调经、利尿消肿的功效,自古以来医家都认为益母草是安全无毒、久服可以轻身延年的"上品",然而近年来不断出现正常剂量或是过量服用益母草出现的肾脏、子宫等脏器的损伤,或是过敏、腹泻等不良反应,其中以服用益母草导致的肾脏损伤报道最为引人关注。本文对近年来由于服用益母草而出现的以肾脏损伤为主的不良反应从临床报道、实验研究两方面进行了综述,总结了这种肾脏损伤可能的损伤部位、损伤剂量与物质基础,并对药材种属来源、采收季节及果实比例、复方配伍等相关因素进行了分析,为进一步研究益母草安全用药问题奠定基础。