双氢青蒿素、甲硝唑及两药联合应用体外抗阴道毛滴虫效果的研究

目的观察双氢青蒿素(DHA)、甲硝唑及两药合用体外抗阴道毛滴虫的效果。方法用肝汤培养基37℃无菌培养阴道毛滴虫滋养体。每实验管含滴虫2.5×106个/ml。实验分4组:双氢青蒿素组,甲硝唑组,两药合用组,对照组。观察不同药物浓度,不同作用时间杀滴虫效果。用杀虫率评价两药合用的杀虫效果。结果两药联合应用有以下特点:(1)增效作用明显,两药配伍剂量合适时杀虫效果最佳;(2)杀虫时间缩短,双氢青蒿素1.0mg/ml+甲硝唑0.004mg/ml杀虫率为100%的时间比单用减少8h;(3)药物用量减少,同在8h,杀虫率近100%,双氢青蒿素单用最低药量为1mg/ml,甲硝唑单用最低药量为0.008mg/ml,两药合用最低药量为双氢青蒿素0.5mg/ml+甲硝唑0.004mg/ml。两药合用药量比单用各减少1倍。双氢青蒿素破坏虫膜,裂解死亡,甲硝唑主要作用于胞内结构,两药作用靶位不同是联合应用增效的基础。结论双氢青蒿素、甲硝唑杀虫机理各不相同,两药联合应用有明显增效作用。

甲硝唑体外抗阴道毛滴虫的电镜观察

目的:观察甲硝唑对阴道毛滴虫超微结构的影响。方法:在2.5×106个.mL-1阴道毛滴虫培养液中加入甲硝唑(5mg/L),37℃培养3～5h,利用扫描和透射电镜观察甲硝唑对阴道毛滴虫超微结构的影响。结果:甲硝唑作用于阴道毛滴虫后,对其细胞膜及氢化酶体影响不明显;阴道毛滴虫细胞质出现大量空泡、裂隙,内质网消失、细胞核变形及自噬空泡,最终虫体变性坏死。结论:甲硝唑对阴道毛滴虫细胞内结构的破坏是导致虫体死亡的主要原因。

双氢青蒿素与甲硝唑体外抗阴道毛滴虫的电镜观察

目的观察双氢青蒿素与甲硝唑单用和联合用药体外对阴道毛滴虫超微结构的影响。方法在2.5×10~6个/ml滴虫培养液中加入两药合剂（双氢青蒿素0.5 mg/ml和甲硝唑0.002mg/ml）,同时设不加药的阴性对照组和单药对照组,即甲硝唑组（5 mg/ml）、双氢青蒿素组（1 mg/ml）,37℃培养3.5～5 h,扫描电镜和透射电镜观察阴道毛滴虫超微结构结果扫描电镜观察结果表明,仅用双氢青蒿素作用3.5 h,阴道毛滴虫细胞膜被破坏,部分表膜脱落;仅用甲硝唑作用3.5 h虫体表面结构无变化,作用5 h虫体表面出现许多小泡和小凹,但表膜未见破坏。两药联合作用3.5～4.2 h,阴道毛滴虫表面凹凸不平,出现皱褶、裂隙;细胞膜破损、脱落明显,表面粗糙,呈蜂窝状;细胞内含物从细胞膜裂口处溢出,虫体破裂,其内氢化酶体、核、轴柱和盾等裸露。透射电镜观察结果表明,仅用双氢青蒿素作用3.5 h,阴道毛滴虫膜系统破坏明显,破坏的滴虫细胞质从细胞膜破损处溢出;仅用甲硝唑作用3.5～5 h,细胞质破坏严重,细胞中可见许多空泡、裂隙和无结构区两药联合作用3.5～4.5 h,滴虫表膜破损,细胞内含物破坏严重,出现许多空泡、裂隙,内质网肿胀,氢化酶体膜破损、变形,细胞器大多消失;细胞核变形,核内出现裂隙,核膜受损,甚至消失。结论双氢青蒿素和甲硝唑对阴道毛滴虫的作用部位不同,两药联用可增进对虫体的破坏力。

Salusins对大鼠离体心脏及心肌细胞的生物学效应的研究

目的 :研究新发现的心血管活性肽salusin的心脏及心肌细胞的生物学效应。方法 :利用Langendorff装置灌流的成年大鼠离体心脏及原代培养的乳鼠心肌细胞 ,测定心功能和心肌细胞 [45Ca2 + ]摄入及 [3 H]-亮氨酸([3 H]-Leu)掺入量。结果 :10 -12 - 10 -7mol/Lsalusin -α及salusin - β对成年大鼠离体心脏功能无明显影响 ;但10 -10 - 10 -6mol/Lsalusin -α及salusin - β均呈浓度依赖性地促进心肌细胞 [45Ca2 + ]摄入及 [3 H]-Leu掺入 ,其效应在 10 -8mol/L时达峰值 ;salusin -α及salusin - β对心肌细胞 [45Ca2 + ]摄入的效应可被钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)所拮抗 ,且与内皮素有协同效应。Salusin -α及salusin - β对心肌细胞 [3 H]-Leu掺入的效应可被尼卡地平、钙调磷酸酶抑制剂FK5 0 6、丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)阻断剂PD980 59及蛋白激酶C(PKC)阻断剂chelerthinechloride等不同程度抑制。Salusin - β对心肌细胞 [45Ca2 + ]摄入的效应强于salusin -α,但 [3 H]-Leu掺入的效应两者之间无显著性差异。结论 :Salusin -α及salusin - β对成年大鼠离体心脏功能无直接效应 ,但能促进乳鼠心肌细胞钙摄入及蛋白合成 ,其效应可能与钙通道、钙调神经磷酸酶、MAPK和PKC等信号转导途径有关。Salusin可?

阴道毛滴虫分子致病机制的研究进展

阴道毛滴虫是一种常见的寄生原虫,以性传播为主。近年来对阴道毛滴虫致病机制的研究日益受到重视,本文从黏附因子、纤黏连蛋白、层黏连蛋白、G蛋白、成孔蛋白、蛋白酶和细胞骨架等方面综述阴道毛滴虫的分子致病机制。

双氢青蒿素对体外培养阴道毛滴虫作用的电镜观察

目的观察双氢青蒿素(DHA)对阴道毛滴虫超微结构的影响。方法在2.5×106个/ml滴虫培养液中加入双氢青蒿素1 mg/ml。37℃培养3和3.5 h,进行扫描电镜观察,培养2.5和4 h进行透射电镜观察。结果双氢青蒿素作用滴虫后,虫体细胞膜受损明显,表面皱褶加深、表膜凹陷,并出现裂隙。细胞核膜破损,细胞核和细胞质均出现裂隙。内质网呈囊状肿胀,氢化酶体受损、变形。细胞质从细胞膜破裂处溢出。细胞膜剥脱后细胞核、氢化酶体和盾等结构裸露。最后虫体变性、坏死。结论双氢青蒿素能破坏阴道毛滴虫膜系结构并导致虫体裂解死亡。

白头翁体外抗阴道毛滴虫透射电镜观察

目的探讨白头翁杀阴道毛滴虫作用机制。方法用浓度1.25 mg/ml白头翁水提液进行体外抗滴虫实验,并用透射电镜观察白头翁作用后滴虫的超微结构变化。结果在药物作用下,滴虫粗面内质网排列紊乱、脱颗粒,核糖体解聚,虫体内空泡增多、变大。随着药物作用时间的延长,高尔基复合体肿胀变形,细胞核核质疏松,核膜不完整,最终虫体破裂,内部结构不能分辨。结论白头翁具有较强的抗滴虫作用,可损伤虫体内部结构,多种细胞器受损。

焦性没食子酸培养阴道毛滴虫方法的建立及其应用

目的 建立阴道毛滴虫焦性没食子酸培养法 ,并研究其在药物敏感实验中的应用。方法 用焦性没食子酸法 ,在固体培养基中培养阴道毛滴虫 ,用打孔法和滤纸片法研究药物敏感性。结果 焦性没食子酸厌氧培养 1- 2 d,在显微镜下仅可见少数虫体聚集的虫落 ,从培养第 3天开始肉眼可见虫落 ,随培养基琼脂浓度增加 ,虫落数和直径均有所下降 ,加入培养基中的虫数越多 ,虫落直径越小 ,随培养时间的延长 ,虫体死亡率逐渐增多。用打孔法和滤纸片法观察药物杀虫效果 ,随药物浓度的增加 ,抑虫环直径增大。结论 焦性没食子酸厌氧培养中 ,培养基的最佳琼脂浓度为 0 .45 %。在直径 6 cm的培养皿中接种 2 0 0个虫数时 ,至培养第 6天虫落直径最大 ,滴虫可存活 9d。用打孔法观察药物杀虫效果较好。常山杀虫效果强于仙鹤草。

白头翁体外抗阴道毛滴虫的效果及扫描电镜观察

目的 探讨白头翁杀阴道毛滴虫作用机制。 方法 利用不同浓度白头翁水提液 (PWE)进行体外抗滴虫实验 ,并用光镜及扫描电镜观察白头翁作用后滴虫的形态变化。 结果 随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加 ,滴虫死亡率增高。 5mg/ml药物作用 8h ,滴虫死亡率达到 10 0 %。白头翁水提液 2 4h杀灭滴虫的最低有效浓度为 1.2 5mg/ml。药物作用后虫体内空泡增多 ,颗粒堆积 ,虫体裂解。扫描电镜显示 ,虫体表面皱褶加深 ,表膜凹陷、剥脱、破裂 ,鞭毛和波动膜受损。 结论 白头翁可直接作用于虫体表膜 ,具有较强的抗滴虫作用。

融合基因IFN-α1b/CSPⅡ原核表达载体的构建及在大肠埃希菌中的表达

目的 构建融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达。 方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN α1b基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b。利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白Ⅱ区 (CSPⅡ )基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体pGEX 4T 1/CSPⅡ 。用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ将IFN α1b从原核重组质粒 pGEX 4T 1/IFN α1b中切下 ,克隆入经相同酶切的原核重组质粒pGEX 4T 1/CSPⅡ 中 ,构建融合基因的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ。融合基因IFN α1b/CSPⅡ经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG )诱导 ,在大肠埃希菌中进行初步表达。 结果 构建的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b、pGEX 4T 1/CSPⅡ和 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ经PCR和酶切鉴定与预期结果一致。证实融合基因IFN α1b/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆入原核表达载体。在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN α1b/CSPⅡ ,该融合蛋白经十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析与理论预测值相符。经蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定具有免疫原性。 结论 构建了融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体 。

中草药白头翁对阴道毛滴虫蛋白的影响

采用浓度为0.625mg/ml白头翁水提液进行体外抗阴道毛滴虫(简称滴虫)实验,药物作用2h和4h后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测白头翁作用后滴虫可溶性蛋白组成和含量变化。结果显示,正常滴虫蛋白图谱共有28条蛋白带。药物作用2h,与对照组比较,5条蛋白带含量增加,4条蛋白带含量明显降低。药物作用4h,与对照组比较,5条蛋白带含量增加,5条蛋白带含量明显降低,另出现一条新蛋白带。

阴道毛滴虫小鼠模型的建立及感染动物免疫学诊断的研究

目的 建立阴道毛滴虫动物模型,寻找较理想的免疫诊断方法。方法 用体外培养不同时间(10和30d)、不同虫数(1×10~6和1×10~5)以及不同保存方法(新分离虫株和液氮保存虫株)获取的阴道毛滴虫虫株分别于背部皮下感染小鼠,并动态观察感染小鼠的脓肿形成。用ELISA方法检测感染小鼠血清中CAg、CIC和Ab。结果 用体外培养10和30d的新分离虫株感染小鼠,脓肿出现率分别为75％和60％,最大脓肿面积分别为0.94和0.25cm^2。用新分离和经液氮保存的虫株感染小鼠,脓肿出现率分别为80％和25％,最大脓肿面积分别为1.00和0.09cm^2。以1×10~6虫数皮下接种35只小鼠,在感染4～32d后均可形成脓肿,其脓肿大小与脓液中活虫数有关;感染50～60d时,脓肿内只有死虫,无活动虫体。用ELISA方法测定感染小鼠抗体,感染40～60d的小鼠血清抗体滴度可高达1:640;用斑点ELISA方法检测感染小鼠血清中CAg、CIC,只有用毒力较强的虫株感染小鼠,才会出现阳性反应。结论 用1×10~6个阴道毛滴虫皮下感染小鼠可以建立较理想的动物模型,活虫在体内维持的最长时间为40d,且虫体致病与接种虫数、虫株体外培养时间和体外保存方法有关。感染小鼠的抗体滴度与感染持续时间有关;在毒力较强的虫株感染的小鼠体内,可测出CAg和CIC。

恶性疟原虫海南株CSP3′末端基因的克隆及序列分析

目的 构建恶性疟原虫海南株 (FCC1 HN)CSP3′末端基因的原核表达载体 ,并对CSP3′末端基因进行序列测定。方法 根据恶性疟原虫CSP编码的基因序列设计引物 ,采用PCR技术扩增出CSP3′末端基因 ,将其克隆入原核表达载体pGEX 4T 1,转化大肠杆菌JM10 9;阳性重组质粒经PCR、酶切鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行序列测定。 结果 从恶性疟原虫基因组中扩增出CSP3′末端基因 ,其片段大小为 2 2 5bp ,构建的阳性重组质粒pGEX 4T 1 CSP3′末端经PCR和酶切鉴定与预期结果一致 ,测序结果进一步确认了插入片段的正确性。 结论 成功地构建了CSP3′末端的原核重组质粒 ,为进一步研究其功能奠定了基础。

阴道毛滴虫对灭滴灵抗药性机制研究进展

近年来国外学者从生物化学及分子生物学水平研究了阴道毛滴虫对灭滴灵的抗性机制,并取得一定进展。

白头翁对阴道毛滴虫氨基酸代谢的影响

目的探讨白头翁对阴道毛滴虫氨基酸代谢的影响。方法采用浓度为0.625mg/ml白头翁水提液进行体外抗阴道毛滴虫实验,用氨基酸色谱测定仪检测白头翁作用后滴虫的氨基酸种类和含量变化。结果加药组阴道毛滴虫含16种氨基酸,与未加药对照组相同。加药组阴道毛滴虫氨基酸含量除蛋氨酸外均显著减少。结论白头翁可干扰阴道毛滴虫氨基酸的代谢。