甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的作用及其机制。方法:用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkep-halin,MENK)及抗δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性,并采用放射免疫分析法测定其三磷酸肌醇(IP3)的含量。结果:MENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。MENK对PKC影响呈双向反应,0．1μmol/ L MENK可以升高胞浆PKC活性,但却明显降低胞膜PKC活性;MENK浓度为10μmol/L时PKC 活性的改变则与此相反;1μmol/L的MENK可明显降低胞浆及胞膜PKC活性,抗体可拮抗这种下调作用。MENK可降低细胞内IP3的含量,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。结论:MENK 在与δ阿片受体结合后,可以通过多种信号转导系统来调节细胞功能,从而产生不同的生物效应。

纳洛酮在细胞信号转导系统中对甲硫氨酸脑啡肽的拮抗作用

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对细胞信号转导系统的影响及其机制。方法:用甲硫氨酸脑啡肽及不同浓度的纳洛酮处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性。结果:1×10-6mol／L的甲硫氨酸脑啡肽可以升高NS-1细胞胞浆PKA活性,却降低胞浆PKC活性,而且这2种作用均能被不同浓度的纳洛酮所拮抗。结论:甲硫氨酸脑啡肽通过传统的阿片受体机制参与了2条(cAMP-PKA途径及DG-PKC途径)胞外信号传递系统的信号传递。

DNA甲基化的生物学应用及检测方法进展

研究基因与蛋白质间的相互关系,是现代分子生物学研究的重要课题之一.近年来,现代分子生物学认为细胞中生物信息的表达受两种因素调控:一种是遗传调控,另一种是表观遗传调控.

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin,MENK)对体外培养的小鼠骨髓瘤细胞 (NS-1)增殖的作用及其机制。方法:用3H-TdR掺入法测定不同给药组细胞的增殖。结果:1μmol/ L MENK可促进NS-1细胞增殖,促进作用达109．5％,而0．1-10 nmol／L的抗δ阿片受体单克隆抗体可抑制MENK的作用。结论:抗δ阿片受体单克隆抗体能拮抗MENK促进细胞增殖的作用,提示MENK促进细胞增殖的作用可能是通过阿片受体机制所介导。

KLF6和Spl共同促进肿瘤转移抑制基因1的转录激活

目的探讨肿瘤转移抑制基因1（TMSG-1）的基因转录调控机制。方法PCR扩增TMSG．1转录起始位点上游-271bp与下游＋303bp之间不同长度片段，连入荧光素酶报告基因质粒pGL3-basic，各重组质粒转染后对表达的荧光素酶活性进行检测；对重组质粒pGL3-237插入DNA序列的潜在转录因子结合位点进行定点突变，然后检测其荧光素酶活性的变化；运用凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀验证转录因子KLF6和Spl与TMSG-1DNA调控区的相互作用；通过免疫共沉淀实验分析转录因子KLF6和Spl之间的相互作用；对人前列腺癌PC-3M不同转移潜能亚系PC-3M-E8、PC-3M．2134，人肺巨细胞癌PG不同转移潜能亚系PG-BEl、PG-LH7通过荧光定量PCR分析TMSG．1和野生型KLF6mRNA水平；将KLF6真核表达质粒转染PC-3M-284后检测TMSG-1蛋白水平及细胞侵袭能力的变化。结果通过荧光素酶报告基因实验鉴定出TMSG．1基因第1号外显子内存在明显促进基因转录的调控区域＋59～＋123bp。对该区域序列定点突变后重组荧光素酶报告基因表达的荧光素酶活性下降，而共转染未突变的荧光素酶报告基因质粒和KLF6或Spl的真核表达质粒则荧光素酶活性上升，差异具有统计学意义（P〈0．01）。凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀结果显示，转录因子KLF6和Spl与该区域特定序列存在相互作用。免疫共沉淀结果验证转录因子KLF6与Spl之间存在相互作用。荧光定量PCR结果显示前列腺癌细胞低转移亚系PC．3M-21M中TMSG-1和野生型KLF6mRNA水平均高于高转移亚系PC．3M-1E8（P〈0．05，P〈0．01），同样肺巨细胞癌低转移亚系PG．LH7中TMSG-1和野生型KLF6mRNA水平均高于高转移亚系PG-BEl（均P〈0．01）。PC-3M-284细胞转染KLF6真核表达质粒后检测到TMSG-1蛋白的增加和细胞侵袭能力的下降。结论前列腺癌细胞中转录因子KLF6与Spl共同作用促进肿瘤转移抑制相关基因TMSG-1的转录激活；不同转移潜能前列腺癌和肺巨细胞癌细胞亚系之间TMSG-1的差异表达与其野生型KLF6差异表达相关。