小鼠FAM3C基因重组腺病毒载体的构建及其在肾系膜细胞中的表达

目的:利用Ad Easy TMsystem构建携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,转染至人胚肾细胞系HEK293细胞,检测外源FAM3C在细胞中的表达。方法:取小鼠肾脏提取RNA,创建c DNA文库,用PCR的方法扩增FAM3C基因,将其克隆到p EASY-1载体中,T3连接酶连接。经Bgl II单酶切后,接入p Ad Tra Ck-CMV穿梭载体,T4连接酶连接,构建重组腺病毒的穿梭质粒p Ad Tra Ck-CMV-FAM3C。将经Pme I线性化的p Ad Track-CMFAM3C电穿孔共转化入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-FAM3C,再将经Pac I线性化的Ad-FAM3C重组病毒骨架质粒转染人胚胎肾细胞系HEK293细胞,包装并扩增病毒。用Ad-FAM3C感染小鼠肾系膜细胞,Western blot法检测FAM3C在小鼠肾系膜细胞中的表达。结果:DNA序列分析和琼脂糖凝胶电泳结果表明,已构建表达FAM3C基因的重组腺病毒,该腺病毒在体外能有效感染小鼠肾系膜细胞,且高表达FAM3C蛋白。结论:成功地构建了携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,为进一步阐明FAM3C的功能及作用机制奠定实验基础。

中叶素1-53对大鼠动脉血压的影响及其作用机制

目的 研究降钙素／降钙素基因相关肽家族一员的中叶素(IMD)对大鼠动脉血压的影响及其可能机制。方法 动脉插管测定大鼠动脉血压，以Greiss法测定孵育血管组织亚硝酸盐含量，用放射方法检测NOS活性及L-Arg摄入。结果 IMD具有快速明显的降血压作用，其降压作用较等剂量肾上腺髓质素(ADM)更强。同时IMD可呈浓度依赖性增加血管组织NO含量，eNOS活性及L-Arg摄入，与对照组相比10^(-7)mol／L IMD使上述指标分别增加59％，356％和108％。结论 IMD具有强的降低大鼠动脉血压作用，该作用在一定程度上由IMD刺激血管组织NO的生成介导。